微生物學(xué)的檢驗(yàn)方法都有哪些?

舒小桃

隨著現(xiàn)代科技的飛速發(fā)展，各個(gè)學(xué)科之間存在著相互交叉和滲透，比如微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)被廣泛地應(yīng)用到醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)當(dāng)中。微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的研究水平如今已經(jīng)上升到細(xì)胞、分子、甚至基因，各種各樣的新技術(shù)推動(dòng)著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展。微生物學(xué)檢驗(yàn)在醫(yī)學(xué)研究、治療、診斷當(dāng)中都扮演著重要的角色，接下來的內(nèi)容就將向您介紹微生物學(xué)的檢驗(yàn)方法有哪些？

對微生物做形態(tài)學(xué)檢查是微生物檢驗(yàn)的重要方法之一，可以有效地對細(xì)菌進(jìn)行分類和鑒定。其主要是根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、染色反應(yīng)等特性來判斷細(xì)菌的狀態(tài)，從而為接下來的鑒定提供有力的參考依據(jù)。

一、顯微鏡檢查

我們都知道，細(xì)菌的體積是很小，僅通過肉眼是沒有辦法看到的，必須借助其它放大倍數(shù)比較大的設(shè)備（比如顯微鏡）才可以觀察到。在顯微鏡下可以觀察到細(xì)胞的一般形態(tài)和結(jié)構(gòu)，如果想要觀察細(xì)菌的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，則需要借助電子顯微鏡。顯微鏡有很多種類，以下為常用的顯微鏡：

1.普通光學(xué)顯微鏡

普通的光學(xué)顯微鏡采用自然光或燈光作為光源，光源的波長在0.4微米左右，顯微鏡的分辨率是波長的一般，也就是0.2微米。但是人體肉眼能見的最小物質(zhì)為0.2毫米，和顯微鏡的分辨率相差了很多，所以需要用油（浸）鏡將目標(biāo)物放大1 000倍，這樣才能比較清晰地進(jìn)行觀察。

普通的光學(xué)顯微鏡一般可用作觀察細(xì)菌、真菌、放線菌等。

2.暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡，顧名思義就是在視野呈現(xiàn)暗色的顯微鏡，其原理是在普通光學(xué)顯微鏡中安一個(gè)暗視野聚光器，這樣就使光線不能從中間直接透過。目標(biāo)物接收到從聚光器邊緣射出的光之后可以發(fā)生散射，就能在視野較暗的情況下觀察光亮的微生物，形成一個(gè)明顯的反差，觀察結(jié)果會(huì)更清晰。

暗視野顯微鏡一般用作觀察不染色微生物形態(tài)和運(yùn)動(dòng)，比如細(xì)菌、螺旋體等。

3.相差顯微鏡

相差顯微鏡主要是利用相差板的光柵作用，最光的相位和振幅進(jìn)行改變。這樣一來，當(dāng)光線透過不染色標(biāo)本時(shí)，密度不同的部位就會(huì)呈現(xiàn)不一樣的結(jié)果。

相差顯微鏡一般可用于微生物形態(tài)、運(yùn)動(dòng)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)的觀察。

4.熒光顯微鏡

熒光顯微鏡和普通光學(xué)顯微鏡的原理和結(jié)構(gòu)沒有太大的區(qū)別，主要在光源、濾光片和聚光器上有所不同。

熒光顯微鏡主要用于檢測或鑒定對熒光色素染色、與熒光抗體結(jié)合的細(xì)菌。

5.電子顯微鏡

電子顯微鏡是以電子流為光源，波長與可見光相比差幾萬倍，所以電子顯微鏡的分辨率非常高。除此之外，電子顯微鏡還用磁性電圈作為光學(xué)放大系統(tǒng)。這兩者的共同作用使得電子顯微鏡的放大倍數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其它任何顯微鏡。

電子顯微鏡一般用于觀察病毒、細(xì)菌的內(nèi)部結(jié)構(gòu)等。

二、不染色標(biāo)本檢查

不染色標(biāo)本主要用于細(xì)菌形態(tài)、運(yùn)動(dòng)情況的觀察。細(xì)菌在未染色狀態(tài)下，主要是利用光的折射以及細(xì)菌和周圍環(huán)境的明暗對比來進(jìn)行觀察。有鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)相較于無鞭毛的細(xì)菌更活潑，無鞭毛的細(xì)菌則做不規(guī)則的布朗運(yùn)動(dòng)。還有一些螺旋體（比如梅毒蒼白密螺旋體等）有著自身特別的運(yùn)動(dòng)方式。通過觀察細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)形態(tài)可以進(jìn)一步對種類進(jìn)行鑒定，有很重要的臨床意義。常用的不染色標(biāo)本檢查方法有壓滴法、懸滴法和毛細(xì)管法等。

1.懸滴法

在凹玻片凹孔周圍涂凡士林，用接種環(huán)取液放在蓋玻片中央，凹玻片凹孔與液滴中央對準(zhǔn)，蓋上，翻轉(zhuǎn)，輕壓蓋玻片，觀察其與凹玻片粘緊封閉后，就可以進(jìn)行觀察，一般選擇高倍鏡或暗視野。

2.壓滴法

壓滴法的操作方法和懸滴法基本相同，只是將凹玻片換成了玻片，也沒有使用凡士林。在蓋玻片的時(shí)候需要注意不要讓液滴外溢，防止產(chǎn)生氣泡。

三、染色標(biāo)本檢查

細(xì)菌在染色狀態(tài)下，顏色會(huì)和周圍環(huán)境形成很明顯的對比。一般可用于觀察細(xì)菌的形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)比如如莢膜、鞭毛、芽孢等，還可以對細(xì)菌進(jìn)行鑒別。

對細(xì)菌進(jìn)行染色的一般步驟是：涂片—固定—染色—（脫色）—（復(fù)染）。

1.涂片制備

血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液體培養(yǎng)物，可以直接將目標(biāo)物放在載玻片上作薄膜涂片。尸檢或感染動(dòng)物組織，一般用病變局部涂抹采樣的棉拭子直接涂片。

2.固定

固定的主要目的是將細(xì)菌殺死，凝固細(xì)菌蛋白及結(jié)構(gòu)，這樣可以讓染色劑快速地進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，便于染色;而且細(xì)菌可以粘附在載玻片上，防止在水洗這一步驟被水沖掉。

3.染色

不同的細(xì)菌會(huì)選擇不同地染色劑以及染色方法。

4.脫色

脫色這一步的目的是檢查脫色劑可以查出細(xì)菌與染料結(jié)合的穩(wěn)定程度，作為鑒別染色之用。

5.復(fù)染

進(jìn)行了脫色處理的細(xì)菌需要用復(fù)染液作復(fù)染來觀察。需要注意的是復(fù)染不宜過度，防止掩蓋初染的顏色。