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    梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)灰區(qū)范圍分析

    2019-09-07 13:03趙靜卞成蓉李伯安王晗
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2019年16期
    關(guān)鍵詞:灰區(qū)

    趙靜 卞成蓉 李伯安 王晗

    [摘要] 目的 探討化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的灰區(qū)范圍,提高梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的有效性和準(zhǔn)確性。方法 收集解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學(xué)中心2016年2月~2018年5月采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體,樣品吸光度與臨界值的比值(S/CO)為1~9(擬定灰區(qū))的患者,以梅毒實(shí)驗(yàn)室逆向檢測(cè)流程及免疫印跡法結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),評(píng)價(jià)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)灰區(qū)的假陽性率。 結(jié)果 采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體患者25 190例,灰區(qū)患者462例(1.83%)。其中S/CO值1~3患者234例,假陽性率為0.74%;S/CO值>3~6患者109例,假陽性率0.27%;S/CO值>6~9患者119例,假陽性率0.12%,三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。選取假陽性率較低的S/CO值>6~9組患者比較,S/CO值>6~7時(shí)假陽性率為0.072%,S/CO值>7~8時(shí)假陽性率為0.024%,S/CO值>8~9時(shí)假陽性率為0.020%,三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。 結(jié)論 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體,在擬定灰區(qū)范圍內(nèi),假陽性率隨S/CO值升高呈現(xiàn)降低趨勢(shì)?;覅^(qū)范圍宜設(shè)定為S/CO值1~7。

    [關(guān)鍵詞] 化學(xué)發(fā)光法;梅毒螺旋體抗體;灰區(qū);假陽性率

    [中圖分類號(hào)] R514? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210(2019)06(a)-0151-04

    Analysis of grey area of Treponema pallidum specific antibody detection

    ZHAO Jing? ?BIAN Chengrong? ?LI Boan? ?WANG Han

    Clinical Laboratory Medical Center, the Fifth Medical Center, General Hospital of PLA, Military Clinical Laboratory Diagnostic Center for Infectious Diseases, Beijing? ?100039, China

    [Abstract] Objective To investigate the grey area of Treponema pallidum specific antibody detected by chemiluminescent immunoassay, and improve the validity and accuracy of syphilis laboratory diagnosis. Methods The patients with cut-off (S/CO) value 1 to 9 (assumed grey area) of Treponema pallidum specific antibody detected by chemiluminescent immunoassay from February 2016 to May 2018 were collected from the Fifth Medical Center in General Hospital of PLA. The false positive rate of chemiluminescent immunoassay in grey area was evaluated by using the methods of reverse detection process of syphilis laboratory and the results of immunoblotting as gold standard. Results A total of 25 190 cases were detected by chemiluminescent immunoassay, and 462 cases (1.83%) were observed within grey area. The false positive rate was 0.74% in 234 cases with S/CO values ranging from 1 to 3, 0.27% in 109 patients with S/CO values ranging from greater than 3 to 6, and 0.12% in 119 patients with S/CO values ranging from greater than 6 to 9. There was a significant difference among three groups (P < 0.05). Comparison of S/CO values in greater than 6 to 9 patients with lower false positive rate, the false positive rate of S/CO value greater than 6 to 7 was 0.072%, the false positive rate of S/CO value greater than 7 to 8 was 0.024%, the false positive rate of S/CO value greater than 8 to 9 was 0.020%, and the difference between three groups was statistically significant (P < 0.05). Conclusion In the assumed grey area, when the specific antibody of Treponema pallidum is detected by chemiluminescent immunoassay, the false positive rate showes a decreasing trend with the increase of S/CO value. The gray area should be set to S/CO value of 1 to 7.

    [Key words] Chemiluminescent immunoassay; Treponema pallidum specific antibody; Grey area; False positive rate

    梅毒是一種由密螺旋體屬蒼白螺旋體(Treponema pallidum,TP)感染所引起的慢性傳染性疾病。在我國增長(zhǎng)迅速,其中一級(jí)梅毒和二級(jí)梅毒均呈上升趨勢(shì)[1]。2017年全國法定傳染病疫情概況顯示,梅毒發(fā)病率居于乙類傳染病前三位。早期、準(zhǔn)確的梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷對(duì)于有效治療具有重要意義[2],目前體外人工培養(yǎng)梅毒螺旋體尚未成功[3]。梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要依賴血清學(xué)檢測(cè),包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、梅毒甲苯胺紅不加熱血清凝集試驗(yàn)、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)和免疫印跡法(Western blot,WB)等。梅毒螺旋體抗體檢測(cè)存在一定的假性結(jié)果[4]。近年來,化學(xué)發(fā)光法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)廣泛應(yīng)用于梅毒螺旋體特異性抗體的檢測(cè),具有自動(dòng)化高、通量大、職業(yè)危害少等優(yōu)點(diǎn),但在檢測(cè)過程中存在一定假陽性率,給臨床診斷帶來了困擾?!盎覅^(qū)”指在測(cè)定中處于臨界值(cut-off值)附近臨床意義可疑的一部分結(jié)果[5]。目前國內(nèi)對(duì)CMIA檢測(cè)梅毒特異性抗體的灰區(qū)范圍定義模糊,缺少大樣本量研究。美國疾病預(yù)防控制中心建議實(shí)驗(yàn)室診斷執(zhí)行逆向檢測(cè)流程,并以WB檢測(cè)作為最終確認(rèn)結(jié)果[1,6]。本研究主要探討CMIA檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的灰區(qū)范圍,提高梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷的準(zhǔn)確性。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    1.1.1 研究對(duì)象? 收集解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學(xué)中心2016年2月~2018年5月,采用CMIA檢測(cè)梅毒螺旋體抗體患者25 190例。Anti-TP S/CO值1~9患者共462例(1.83%),男361例,女101例,年齡0~88歲,平均(41.2±31.5)歲,其中>40~50歲組人數(shù)最多,占25.0%(116/462),其次是>50~60歲,占24.5%(表1)。中老年仍然是梅毒感染的高發(fā)人群。梅毒感染診斷符合我國制訂的《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)-梅毒診斷(WS 273—2018)》[7]。

    1.1.2 試劑與儀器? 雅培I2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及梅毒化學(xué)發(fā)光法微粒子免疫檢測(cè)(CMIA)試劑購自美國雅培公司,試劑批號(hào):91381S300;梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(treponemapallidumparticleagglutinatio-nassay,TPPA)試劑購自日本富士瑞比歐株式會(huì)社,試劑批號(hào):AB358;血漿反應(yīng)素卡片試驗(yàn)(rapid plasma reagin,RPR)為上??迫A公司產(chǎn)品,試劑批號(hào):2017041 1204。WB進(jìn)行抗梅毒螺旋體抗體IgG確證實(shí)驗(yàn)試劑購自德國歐蒙公司,E1210320AZ。所有檢測(cè)過程按照操作說明嚴(yán)格執(zhí)行。

    1.2 方法

    1.2.1 梅毒實(shí)驗(yàn)室逆向檢測(cè)流程? 采用逆向檢測(cè)流程法[1,6]:首先采用CMIA對(duì)疑似患者梅毒螺旋體特異性抗體進(jìn)行初篩,Anti-TP S/CO值<1,報(bào)告陰性結(jié)果;Anti-TP S/CO值>9,報(bào)告陽性結(jié)果。對(duì)Anti-TP S/CO值1~9的患者,再行RPR復(fù)檢。RPR陽性時(shí),報(bào)告陽性結(jié)果;RPR陰性時(shí),采用TPPA進(jìn)行復(fù)檢。對(duì)RPR與TPPA檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本以WB確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。

    1.2.2 梅毒實(shí)驗(yàn)室確證實(shí)驗(yàn)? 對(duì)以上所有462例樣本,采用WB確證實(shí)驗(yàn)判斷最終結(jié)果。結(jié)果判讀如下:當(dāng)印跡膜上出現(xiàn)1條及以上相對(duì)分子質(zhì)量為47 000、45 000、17 000或15 000的特異性條帶時(shí),結(jié)果判斷為陽性;當(dāng)無顯色帶或僅出現(xiàn)非特異條帶時(shí),結(jié)果判斷為陰性。所有檢測(cè)結(jié)果均以WB確證實(shí)驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)。

    1.2.3 假陽性比率? 假陽性率計(jì)算按照如下公式,即假陽性率=假陽性人數(shù)/金標(biāo)準(zhǔn)陰性人數(shù)。按照CMIA檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體S/CO值,劃分為1~3、>3~6和>6~9之間3個(gè)區(qū)間,計(jì)算假陽性率。根據(jù)假陽性率的比較,進(jìn)一步分析S/CO值在>6~7、>7~8和>8~9各區(qū)間假陽性率的分布特點(diǎn)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷

    逆向檢測(cè)流程結(jié)果:CMIA檢測(cè)梅毒螺旋體抗體患者25 190例,Anti-TP S/CO值<1患者24 605例,報(bào)告陰性結(jié)果;Anti-TP S/CO值>9患者123例,報(bào)告陽性結(jié)果。CMIA檢測(cè)灰區(qū)范圍樣本462例,其中181例患者確證陽性,281例確證陰性。綜上,陽性患者共計(jì)304例,陰性患者24 886例,假陽性281例??傟栃月蕿?.21%(304/25 190),假陽性率為1.13%(281/24 886)。

    2.2 CMIA檢測(cè)S/CO值1~3、>3~6和>6~9區(qū)間假陽性率比較

    按照CMIA檢測(cè)S/CO值1~3、>3~6和>6~9三個(gè)區(qū)間劃分,三組假陽性率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2 = 78.41,P < 0.05)。見表2。

    2.3 CMIA檢測(cè)S/CO值在>6~7、>7~8和>8~9區(qū)間假陽性率比較

    按照CMIA檢測(cè)S/CO值>6~7、>7~8和>8~9三個(gè)區(qū)間劃分,三組假陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2 = 20.15,P < 0.05)。見表3。

    3 討論

    近年來,由于術(shù)前和產(chǎn)前篩查的需要,以及性行為導(dǎo)致的梅毒發(fā)病率上升趨勢(shì)等原因,梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本量逐年增加[8]。CMIA檢測(cè)梅毒抗體具有檢測(cè)靈敏度高、特異性強(qiáng)和易于自動(dòng)化的特點(diǎn)。本研究所用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀采用兩步法檢測(cè)人血清和血漿中梅毒螺旋體抗體。樣品中的抗梅毒螺旋體抗體與重組抗原包被的微粒子相結(jié)合,加入抗人吖啶酯標(biāo)記結(jié)合物,通過預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液的作用,獲得化學(xué)發(fā)光反應(yīng)物的相對(duì)光單位。兩步法可有效避免以往酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中的鉤狀效應(yīng)[9-10]。此外,該方法結(jié)果判定客觀,人為干擾因素少,操作簡(jiǎn)單方便。有報(bào)道顯示,CMIA檢測(cè)各期梅毒患者梅毒螺旋體抗體的敏感性為98%[11]。

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