免疫檢測(cè)灰區(qū)判讀研究

余麗萍 向紅梅

【摘 要】目的：對(duì)免疫檢測(cè)結(jié)果的灰區(qū)判讀意義進(jìn)行研究。方法：選取我院2014年1月至2017年1月采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的126例乙肝核心抗體（Anti-HBc）樣本，其檢測(cè)結(jié)果均為邊緣值，分別采用西門(mén)子電化學(xué)發(fā)光法與強(qiáng)生酶免疫化學(xué)發(fā)光法對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)檢分析，以對(duì)免疫檢測(cè)的灰區(qū)判讀意義進(jìn)行研究。結(jié)果：酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的126例灰區(qū)樣本，采用另外兩種方法復(fù)檢顯示，82例樣本結(jié)果得到確認(rèn)證實(shí)，并且在對(duì)復(fù)檢結(jié)果存在差異的樣本采用乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測(cè)分析顯示，復(fù)檢陽(yáng)性與結(jié)果不確定樣本均存在既往感染情況，而復(fù)檢陰性樣本無(wú)既往感染發(fā)生。結(jié)論：免疫檢測(cè)受敏感性與特異性影響，存在灰區(qū)結(jié)果容易造成誤檢或漏檢發(fā)生，應(yīng)引起重視。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸；附法 檢測(cè)； 灰區(qū)； 判讀意義

【中圖分類(lèi)號(hào)】R392.3 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）09--02

乙肝病毒感染檢測(cè)是免疫檢測(cè)的重要內(nèi)容，其中，乙肝表面抗原作為乙肝病毒感染的特異性標(biāo)志，在乙肝病毒感染判斷中存在一定的局限性，比如，對(duì)表面抗原陰性的乙肝病毒感染者，就需要通過(guò)乙肝核心抗體的檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)其病毒感染情況判斷，它也是進(jìn)行乙肝病毒感染診斷的唯一性指標(biāo)，對(duì)恢復(fù)期以及乙肝病毒攜帶者也可以通過(guò)該指標(biāo)檢測(cè)分析進(jìn)行判斷[1]。臨床中，對(duì)單獨(dú)核心抗體陽(yáng)性的情況，也存在病毒傳染性，由此可見(jiàn)，乙肝核心抗體檢測(cè)及其結(jié)果準(zhǔn)確性在乙肝診斷的重要作用和意義。下文以我院2014年1月至2017年1月采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的126例乙肝核心抗體（Anti-HBc）結(jié)果處于邊緣值的樣本為研究對(duì)象，對(duì)免疫監(jiān)測(cè)灰區(qū)判讀意義進(jìn)行研究，以供參考。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院2014年1月至2017年1月采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的126例乙肝核心抗體（Anti-HBc）結(jié)果處于邊緣值樣本為研究對(duì)象，S/CO標(biāo)準(zhǔn)為0.50-1.50，均為在我院就診并進(jìn)行乙肝標(biāo)志物篩查患者，包含男性患者69例、女性患者57例，患者年齡在14至67歲不等，平均為（42.4±6.8）歲。

1.2 方法 對(duì)126例采用酶聯(lián)免疫吸附法（檢測(cè)儀器為美國(guó)寶特Bio-TekELX800全自動(dòng)酶免分析儀，檢測(cè)試劑從上海榮盛公司購(gòu)買(mǎi)）檢測(cè)顯示抗Anti-HBc結(jié)果處于邊緣值的樣本血清進(jìn)行分離后，在-20℃環(huán)境中進(jìn)行冰凍保存，以進(jìn)行備用。根據(jù)上述Anti-HBc的免疫檢測(cè)結(jié)果，分別采用西門(mén)子電化學(xué)發(fā)光法（檢測(cè)儀器為西門(mén)子X(jué)P電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，檢測(cè)試劑為配套試劑）與強(qiáng)生酶免疫化學(xué)發(fā)光法（檢測(cè)儀器為強(qiáng)生5600化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑為配套試劑）對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)檢，對(duì)檢測(cè)結(jié)果分析中，將兩種復(fù)檢方式檢測(cè)結(jié)果相反，或者是至少一種復(fù)檢方法的檢測(cè)結(jié)果位于灰區(qū)的情況，判斷為不確定樣本，然后對(duì)復(fù)檢不確定以及與復(fù)檢結(jié)果相反的樣本，采用乙肝PCR（檢測(cè)儀器為ABI5700基因分析儀，檢測(cè)試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供）或乙肝標(biāo)志物檢測(cè)進(jìn)行再次確認(rèn)分析。

2 結(jié)果

酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的126例灰區(qū)樣本，采用另外兩種方法復(fù)檢顯示，82例樣本結(jié)果得到確認(rèn)證實(shí)，如下表1所示，即為各檢測(cè)方法對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比。

此外，在對(duì)復(fù)檢結(jié)果存在差異的樣本采用乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測(cè)分析顯示，西門(mén)子電化學(xué)發(fā)光法與強(qiáng)生酶免疫化學(xué)發(fā)光法復(fù)檢陽(yáng)性的3例患者（酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)為陰性），均存在既往乙肝感染病史，且酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)結(jié)果最高為1.37；此外，14例西門(mén)子電化學(xué)發(fā)光法與強(qiáng)生酶免疫化學(xué)發(fā)光法復(fù)檢陰性樣本（酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)為陽(yáng)性），經(jīng)PCR檢測(cè)確認(rèn)為陰性，無(wú)既往感染情況，其中，酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)最低值為0.56。另外，對(duì)27例不確定樣本經(jīng)PCR檢查顯示為陰性，其中有6例存在既往感染情況，酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)顯示2例為陰性、4例結(jié)果處于灰區(qū)，結(jié)果范圍為0.92-1.14，而西門(mén)子電化學(xué)發(fā)光法與強(qiáng)生酶免疫化學(xué)發(fā)光法復(fù)查顯示結(jié)果為陽(yáng)性或灰區(qū)，如下表2所示。

3 討論

臨床中，在進(jìn)行乙肝病毒檢測(cè)判斷中，對(duì)乙肝核心抗體檢測(cè)主要檢測(cè)方式為酶聯(lián)免疫吸附法，在對(duì)檢測(cè)樣本采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)判斷中，其檢測(cè)結(jié)果主要通過(guò)樣本檢測(cè)的吸光光度值與臨界值進(jìn)行計(jì)算得出[2]，其中，樣本檢測(cè)結(jié)果的陰性和陽(yáng)性判斷，是根據(jù)其樣本檢測(cè)吸光光度值與臨界值比值進(jìn)行判斷，其比值≥1時(shí)，表示結(jié)果為陰性，反之則為陽(yáng)性，這一檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算與判斷是由酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀器自動(dòng)計(jì)算與判斷獲取。值得注意的是，酶聯(lián)免疫吸附法在進(jìn)行樣本檢測(cè)分析中，由于會(huì)受到人員操作以及檢測(cè)環(huán)境、板間差異或孔間差異等因素影響，再加上對(duì)檢測(cè)儀器的校驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品較為缺乏與儀器自動(dòng)判斷結(jié)果等情況影響，導(dǎo)致其在樣本檢測(cè)與判斷中，對(duì)同一個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)，其檢測(cè)數(shù)值也會(huì)出現(xiàn)一定的浮動(dòng)變化，一旦檢測(cè)樣本的吸光光度值與臨界值相近，就會(huì)導(dǎo)致重復(fù)檢測(cè)過(guò)程中吸光光度值的波動(dòng)變化造成檢驗(yàn)結(jié)果判斷不一致情況發(fā)生[3]。針對(duì)這種情況，在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)環(huán)節(jié)，針對(duì)免疫檢測(cè)數(shù)值浮動(dòng)變化及影響，是否針對(duì)臨界值附件樣本進(jìn)行灰區(qū)設(shè)定，以解決檢測(cè)結(jié)果判定存在的問(wèn)題，成為當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)與判斷研究關(guān)注的重點(diǎn)。

上文中，在對(duì)我院收治的126例乙肝核心抗體酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果處于邊緣值樣本，通過(guò)不同方法進(jìn)行復(fù)檢分析驗(yàn)證顯示，82例樣本結(jié)果得到確認(rèn)證實(shí)，并且在對(duì)復(fù)檢結(jié)果存在差異的樣本采用乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測(cè)分析顯示，復(fù)檢陽(yáng)性與結(jié)果不確定樣本均存在既往感染情況，而復(fù)檢陰性樣本無(wú)既往感染發(fā)生，其中，酶免檢驗(yàn)樣本結(jié)果最小為0.56、最大為1.37。這一結(jié)果表明，酶免檢測(cè)在乙肝核心抗體判斷中，檢測(cè)范圍在0.56-1.37之間仍然會(huì)存在誤檢或漏檢情況，在不設(shè)定邊緣值的情況下，會(huì)導(dǎo)致3例樣本被漏檢、14例誤檢發(fā)生，與患者既往感染情況之間存在一定關(guān)聯(lián)。

總之，免疫檢測(cè)受敏感性與特異性影響，存在灰區(qū)結(jié)果容易造成誤檢或漏檢發(fā)生，應(yīng)引起重視。

參考文獻(xiàn)

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