姜會(huì)真,金曉飛,閆麗萍,冀雨芳,燕 平,司佳弘,李佳茹,曹韻茗
(山西中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,山西晉中030619)
隨著現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展,對(duì)針灸的研究不斷深入,迫切需要在針灸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過程當(dāng)中尋求較為恰當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行固定,然后進(jìn)行針刺干預(yù)。以大鼠為例,對(duì)大鼠進(jìn)行穴位定位后,根據(jù)不同干預(yù)的要求,加上運(yùn)用不同的針刺方法,在實(shí)際操作過程當(dāng)中,給科研實(shí)驗(yàn)及教學(xué)實(shí)踐帶來一定困難,迫切需要客觀、可靠的固定方法。隨著與國際接軌,以人文關(guān)懷的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求,以3R原則為指導(dǎo)[1],減少對(duì)動(dòng)物的不必要的傷害和刺激,達(dá)到最佳的治療目的。筆者通過提供更多固定的方法,為廣大科研工作者及教學(xué)實(shí)踐者提供更加符合實(shí)際應(yīng)用、取材簡(jiǎn)便、制作簡(jiǎn)單、不易損壞的動(dòng)物固定方法。
針刺大鼠過程的具體固定方法:以SPF級(jí)SD雌性大鼠,9 w左右,約275 g為例,許可證號(hào):SCXK(京)2016-0006,北京維通利華動(dòng)物技術(shù)有限公司。
結(jié)果見圖1。
圖1 麻醉束縛法
操作需要物品準(zhǔn)備:提前配制好水合氯醛、一次性注射器1 mL、橡皮筋5個(gè)、紙板或木板一塊,長(zhǎng)約29.5 cm、寬約18 cm、厚約0.5 cm,燕尾夾5個(gè)。具體操作方法:腹腔注射10%水合氯醛,麻醉生效后,用橡皮筋進(jìn)行捆綁,俯臥位、仰臥位都需固定四肢及牙齒。根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作目的予以針刺治療及治療時(shí)間要求進(jìn)行固定,一般束縛時(shí)間不超過1 h,避免遠(yuǎn)端肢體因束縛導(dǎo)致缺血壞死。
本操作的優(yōu)點(diǎn):能夠讓大鼠的穴位更加暴露,更具有準(zhǔn)確性,取穴方便,大鼠不會(huì)躁動(dòng)。非束縛下的大鼠穴位不如束縛下暴露充分,影響取穴的準(zhǔn)確性。
缺點(diǎn):麻醉狀態(tài)下如果麻醉深度把控不住,可能在麻醉狀態(tài)下造成死亡;在針刺過程中,因?yàn)樘幱诼樽頎顟B(tài)下,可能導(dǎo)致信息傳導(dǎo)受阻,最終影響治療效果。盡管之前中國興起針刺麻醉和藥物麻醉組合進(jìn)行手術(shù)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不理想[2]?,F(xiàn)在已經(jīng)基本淘汰,但對(duì)于普通手術(shù)可采用此類方法進(jìn)行手術(shù)。
結(jié)果見圖2。
操作需要物品準(zhǔn)備:除橡皮筋及燕尾夾外,余同上。本操作的優(yōu)點(diǎn):未行束縛,干擾因素較少,減少應(yīng)激刺激,穴位選取方便。缺點(diǎn):不如束縛下穴位暴露充分,麻醉可能導(dǎo)致死亡,影響經(jīng)氣感傳,對(duì)實(shí)驗(yàn)針刺刺激減弱,可能影響較大?,F(xiàn)在已經(jīng)基本淘汰。
結(jié)果見圖3。
圖3 高空孤立法
操作需要物品準(zhǔn)備:礦泉水瓶或飲料瓶,透明膠帶,小木板 9 cm×7 cm,1.5~2 L容積的瓶子,瓶高約43 cm,直徑約7.5 cm。先將空瓶灌滿自來水,再將另外1個(gè)空瓶剪掉頭部,留下底座,罩在有水的瓶子上方,最后用膠布把空瓶與灌滿水的瓶子粘住。為使頂部平穩(wěn),放上提前制作好的木板或紙板,然后用膠布粘住固定。
利用大鼠膽小的特性,讓大鼠脫離地面,用一個(gè)小型平板支撐,使大鼠盡量不動(dòng)。治療過程當(dāng)中,大鼠會(huì)有大小便排出,最終會(huì)影響其固定。優(yōu)點(diǎn):讓大鼠背部及頭部充分暴露,大鼠的人為刺激較少。缺點(diǎn):腹部穴位不宜針刺;高臺(tái)固定通過膠布黏附大鼠[3],造成大鼠的恐懼心理,可能造成大鼠的條件反射和軀體感覺誘發(fā)電位發(fā)生改變[4],對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能造成影響。
結(jié)果見圖4。
圖4 非麻醉束縛法
操作需要物品準(zhǔn)備:利用木板、釘子6枚、繃帶,對(duì)大鼠進(jìn)行束縛,最后綁成8字型。進(jìn)行針刺治療部分穴位受束縛影響,但大部分背部及頭部穴位不受影響。木板長(zhǎng)約18 cm、寬約7 cm、高約3.5 cm。中間有直徑約為5 cm的空心,與下方距離6 cm,上方距離11 cm,束縛繩長(zhǎng)(紗布繃帶)約為1~1.5 m。優(yōu)點(diǎn):較容易控制大鼠肢體,沒有麻醉帶來的可能影響,有利于背部穴位及四肢穴位暴露,不容易逃脫,有利于針刺。缺點(diǎn):捆綁后,由于木板抵擋,不容易取胸腹部的穴位;大鼠束縛后掙扎可能導(dǎo)致胸廓壓迫縮小,最終導(dǎo)致窒息后死亡。隨著時(shí)間的推移,慢性束縛可能通過調(diào)節(jié)大鼠下丘腦弓狀核CART通路,對(duì)大鼠的食欲造成影響,體質(zhì)量下降[5]。束縛應(yīng)激可以使大鼠免疫功能顯著降低[6]。
操作需要物品準(zhǔn)備:圓柱筒長(zhǎng)18.5 cm,直徑5.5 cm,前后有閥門,可根據(jù)大鼠的體型大小進(jìn)行調(diào)整。對(duì)大鼠進(jìn)行針刺固定治療,較為方便快捷。優(yōu)點(diǎn):利用大鼠鉆洞習(xí)性,可迅速使大鼠入內(nèi),單獨(dú)一人即可完成。缺點(diǎn):主要是穴位選取較為局限。牢籠稍微欠缺,因?yàn)樾吞?hào)固定,部分體型較小的大鼠可在內(nèi)部翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng),而體型過大則不能塞入筒內(nèi),李洋洋等[7]設(shè)計(jì)的大鼠頭部可能被卡住導(dǎo)致窒息死亡,落地后網(wǎng)筒易變形等缺點(diǎn)。結(jié)果見圖5。
圖5 鼠筒法
結(jié)果見圖6。
圖6 懸掛法
操作需要物品準(zhǔn)備:布或紗網(wǎng)狀織物、燕尾夾若干、掛繩,剪刀,布長(zhǎng)約19 cm、寬約17 cm、離上方2 cm,用剪刀剪出前肢洞口長(zhǎng)約2 cm,后肢長(zhǎng)約3 cm,前肢和前肢兩者之間約4 cm,前后肢相距約12 cm。穿前肢后夾住上方,再穿后肢,用夾子夾住,最后夾在電線上。這是利用大鼠不能著力,并且掙脫困難的特點(diǎn)而制作的。優(yōu)點(diǎn):減少對(duì)大鼠的人為刺激,穴位選取不受影響,必要時(shí)可以提前按穴位定位后剪一約0.5 cm大小的洞。缺點(diǎn):穴位暴露稍受限制,部分大鼠束縛過松可造成大鼠掙脫,存在大鼠掉入地面受傷的風(fēng)險(xiǎn);針刺針在大鼠治療過程可能出現(xiàn)脫落狀況;在抓握過程中存在被大鼠咬傷的風(fēng)險(xiǎn)。
讓大鼠處于完全放松狀態(tài)下進(jìn)行針刺治療,就目前水平而言基本上很難做到。初次接受針刺大鼠躁動(dòng)不安較為明顯,一般隨著固定次數(shù)越多,后期大鼠較為適應(yīng)這種刺激,固定時(shí)相對(duì)較為安靜,較為配合固定。根據(jù)針刺的部位來選擇適合的固定方法,以腰背部腧穴為主,選擇順序?yàn)楣铝⒏吲_(tái)法>牢籠法>懸掛法>木板捆綁法>麻醉非束縛法>麻醉束縛法;以胸腹部選穴為主,選擇順序?yàn)閮?yōu)化牢籠法>懸掛法>麻醉束縛法>麻醉非束縛法>木板束縛法。牢籠法及懸掛法較為實(shí)用,操作簡(jiǎn)便,其他固定方法使選穴局限。高臺(tái)法除了胸腹取穴不方便外,在固定方法中大鼠相對(duì)處于較為放松的狀態(tài);捆綁法大鼠死亡率最高,逃脫也較高;麻醉法因麻醉狀態(tài)而導(dǎo)致死亡率最高,其他方法逃脫率較大。固定方法可根據(jù)大鼠的大小靈活設(shè)計(jì)。
根據(jù)大鼠的生理學(xué)特性,大鼠天性膽小,容易受外界刺激的干擾和影響;針刺對(duì)大鼠來說是一種相對(duì)較為強(qiáng)烈的傷害性刺激,加之市面上的一些大鼠使用的針具及艾灸材料不夠完善,匹配程度較差,就體格來講,對(duì)大鼠來說相對(duì)較大;由于大鼠的伸縮性較好,皮膚及肌肉之間錯(cuò)開的范圍相對(duì)較大,束縛后造成穴位定位稍有偏差,可能影響到治療效果,最終可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成影響。
固定器械的設(shè)計(jì)目的應(yīng)主要滿足以下幾點(diǎn)要求:第一、治療時(shí)穴位要充分暴露;第二、盡量讓大鼠處于放松狀態(tài),減少應(yīng)激刺激,避免干擾和影響;第三、總體時(shí)間需要維持到治療結(jié)束;第四、避免在抓握過程當(dāng)中被大鼠咬傷,實(shí)驗(yàn)過程安全性第一;第五、治療過程中盡量降低大鼠死亡率,以便實(shí)驗(yàn)最終順利進(jìn)行,以不影響實(shí)驗(yàn)為目的等。部分實(shí)驗(yàn)需進(jìn)一步研究,以高度為例,在多少范圍內(nèi)才為最佳高度,未能做出較為客觀依據(jù),對(duì)大鼠應(yīng)激最小,在實(shí)驗(yàn)過程當(dāng)中對(duì)大鼠外界干擾因素較少;為此,通過多方面的評(píng)估,以及所在實(shí)驗(yàn)室所能夠就地取材,為廣大科研工作者及教學(xué)實(shí)踐者提供更具有科學(xué)及實(shí)用性的方法,為針刺實(shí)際操作過程中提供較為客觀的指導(dǎo)方針。
固定方法同時(shí)可以為尾部采血[8]、尾部注射、紅外照射[9]等提供合理的要求,因此可以拓展其應(yīng)用范圍,不僅局限于針刺干預(yù)。固定器本身的材質(zhì)要求,主要以牢固、原材料容易獲取、價(jià)格較為低廉、制作簡(jiǎn)便、實(shí)用等,上方描述的六大類方法,基本能夠滿足目前實(shí)際運(yùn)用操作。
固定方法的具體設(shè)計(jì)還需要科學(xué)的進(jìn)一步制定,就布料而言就是一個(gè)比較大的問題,及其四肢洞的距離,離地面懸空高度等,以哪種最為合適,通過大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),檢測(cè)對(duì)其體內(nèi)物質(zhì)水平改變,從多方面考慮選取影響最小的固定方法,來得出較為科學(xué)嚴(yán)緊的結(jié)論,為最佳大鼠固定方法提供依據(jù)。