2016～2018年江蘇省規(guī)模豬場PRRS血清學調(diào)查

蔡丙嚴，戴建華，田其真，郝福星，范紅結(jié)

（1.南京農(nóng)業(yè)大學，南京200241；2.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學院，泰州225300）

豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的豬的一種高度傳染性疾病，已在全世界范圍內(nèi)廣泛傳播，給養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)帶來嚴重的經(jīng)濟損失[1]。2006年4月，我國南方地區(qū)出現(xiàn)了以PRRSV變異株感染引起的PRRS大規(guī)模爆發(fā)，其發(fā)病率和死亡率高，迅速波及到全國大部分省份[2]。2014～2015年，我國華東和中原地區(qū)出現(xiàn)了與北美NADC30序列非常類似的PRRSV毒株，被命名為NADC30-Like毒株[3]。至今，PRRSV的毒株仍在變異，給該病的控制帶來了挑戰(zhàn)。市場上PRRS的疫苗種類較多，既有以ATCCVR-2332、CH-1R等為代表的經(jīng)典毒株疫苗，也有以JXA1-R、TJM-F-92、GDr180等為代表的變異毒株疫苗，做好疫苗免疫工作是當前控制該病的有效手段之一[4]，同時PRRSV容易變異，現(xiàn)有疫苗對變異毒株免疫效果不能提供完全的交叉保護[5]。因此，生產(chǎn)中對于疫苗的選擇及是否要進行疫苗免疫存在諸多的困惑。本研究為了解江蘇規(guī)?；i場PRRS流行動態(tài)，對江蘇省泰州、南通、常州等7個地區(qū)27家規(guī)模豬場送檢的2062份未免疫PRRS血清樣本進行了PRRSV抗體與核酸檢測，并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。開展血清學調(diào)查，對江蘇規(guī)模豬場PRRSV的感染狀況進行深入了解，摸清當前PRRS的流行動態(tài)和規(guī)律，以期為規(guī)模豬場的PRRS防控提供參考。

1 材料和方法

1.1 樣品與試劑樣品為2016年1月～2018年12月，江蘇省泰州、揚州、南通、鹽城、宿遷、徐州、常州等7個地區(qū)的27家規(guī)模豬場，不同批次送檢的未免疫PRRS疫苗血液樣本，共計2062份。每批血液樣品以3000×g離心10 min制備血清，集中檢測。豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒，購自美國IDEXX 公司；病毒磁珠法血液總RNA快速提取試劑盒，購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司；PRRSV 通用型RT-qPCR檢測試劑盒，購自洛陽萊普生信息科技有限公司。

1.2 PRRSV抗體檢測參照IDEXX豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒說明書，對送檢樣品進行PRRSV抗體檢測。結(jié)果判定標準：S/P值＜ 0.4為陰性，S/P值≥0.4為陽性。

1.3 PRRSV RT-qPCR檢測血清總RNA的提取，按照磁珠法血液病毒RNA提取試劑盒說明書進行加樣，然后放進全自動核酸提取儀進行批量提取樣本RNA。以提取好的血清總RAN為模板，按照PRRSV通用型RT-qPCR檢測試劑盒說明書進行加樣檢測。Primer-F：5'-GGGTAAGATCATCGC TCAGC-3'，Primer-R：5'-GGTCTGGATTGACGA CAGACA-3'，引物P：FAM- CAGTCCAGAGGCA AGGGACCG-MGB，以上為試劑盒參考引物序列。反應體系：擴增反應液17 μL、混合酶反應液0.8 μL、模板2.5 μL。反應條件：42℃ 5min，95℃預變性10 s，95℃變性5 s，55℃退火40 s，共40個循環(huán)。結(jié)果判定標準：樣本檢測結(jié)果Ct值≤35，有明顯指數(shù)增長，表明樣本中檢測出該病毒，判為陽性；35＜Ct值≤38判為可疑，可疑樣本如果為典型S型擴增曲線則為可疑陽性，否則為陰性，可疑樣本需重復檢測；樣本檢測結(jié)果Ct＞38或無Ct值，表明樣本中未檢測出該病毒。

1.4 數(shù)據(jù)處理檢測數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學分析，利用單變量方差分析比較，當P＜ 0.05 時表示差異顯著，具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同地區(qū)豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果不同地區(qū)豬場送檢血清的PRRSV抗體檢測結(jié)果，見表1。結(jié)果顯示，江蘇省7個地區(qū)未免疫豬場均表現(xiàn)出較高的PRRSV抗體陽性率，陽性率為58.82%～72.04%，抗體總陽性率為68.82%。其中高于抗體總陽性率的地區(qū)有泰州、南通、鹽城和宿遷，最高為宿遷的72.04%，低于抗體總陽性率的地區(qū)分別為揚州、連云港和常州，最低為連云港58.82%。上述結(jié)果表明，江蘇省未免疫PRRS疫苗的規(guī)模豬場普遍存在PRRSV 野毒感染。綜合分析認為主要有以下幾點原因：（1）不同地區(qū)的不同規(guī)模豬場對PRRS防控理念有所差異，尤其對于是否選用PRRS疫苗免疫與選用何種類型的疫苗免疫存在較大爭議。這與市場上PRRS疫苗種類繁多，現(xiàn)有疫苗不能對PRRSV變異毒株提供完全的交叉保護有關(guān)[5]；（2）多數(shù)規(guī)模豬場生物安全控制措施存在漏洞，尤其較小規(guī)模的豬場漏洞相對較多[6]，具體表現(xiàn)在消毒意識淡薄，缺乏完備的消毒設施及消毒制度，如豬場只重視豬群生產(chǎn)，不愿在環(huán)控設備、防疫消毒等基礎設施建設上增加投入。此外，不重視疫病風險點的控制[7]，如人員流動與車輛進出消毒不徹底、病死豬與廢棄物的無害化處理不到位等；（3）缺乏后備母豬引種與公豬精液定期檢測機制，部分豬場對后備豬引種前后不檢測或引進后不經(jīng)隔離馴化直接與現(xiàn)有豬群混養(yǎng)是造成豬場PRRS發(fā)病的主要原因之一[8]，同時種豬場忽視種公豬精液的定期檢測，促使PRRSV在豬場持續(xù)循環(huán)感染[9]；（4）近3年由于浙江省、上海市及江蘇省南部地區(qū)豬場迫于環(huán)保壓力，部分拆遷的豬場逐年向江蘇中部及北部地區(qū)轉(zhuǎn)移，豬群的頻繁調(diào)動及飼養(yǎng)密度的大幅增加，而與之相配套的管理及防控措施不完善，是引發(fā)上述江蘇省7個地區(qū)（蘇中和蘇北為主）規(guī)模豬場PRRSV野毒感染的重要原因之一。

2.2 不同年份豬場 PRRSV抗體檢測結(jié)果不同年份PRRSV抗體檢測結(jié)果顯示，PRRSV抗體陽性率在2016～2018年呈現(xiàn)逐年下降趨勢，從2016年的76.41%下降到2018年的57.72%，具體數(shù)據(jù)見表2。結(jié)果表明，江蘇省豬群 PRRSV感染壓力有所下降，分析原因有以下幾個方面：（1）本次調(diào)查的規(guī)模豬場均未免疫PRRS疫苗，而生產(chǎn)中免疫PRRS疫苗的豬場占多數(shù)，科學選擇PRRS疫苗和制定合理的免疫程序仍然是現(xiàn)階段防控PRRS的主要措施，這也是江蘇規(guī)模化豬場PRRSV感染壓力下降的原因之一；（2）當前，部分小規(guī)模豬場和養(yǎng)殖戶，受重要疫病流行、市場風險和環(huán)保壓力的多重影響，正逐漸退出養(yǎng)豬行業(yè)，這對減少豬疫病的流行及科學防控上有一定的推進作用；（3）2018年下半年，受非洲豬瘟的影響，規(guī)模豬場對PRRS的關(guān)注度有所下降，因此，檢測的樣品數(shù)量有所下降且PRRSV抗體陰性樣本占比較多，這對2018年的PRRSV抗體總陽性率可能會有所干擾。

表1 不同地區(qū)豬場 PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 1 The results of PRRSV antibody in swine sera collected from different regions

表2 不同年份豬場 PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 2 The results of PRRSV antibody in swine sera collected on different year

2.3 不同規(guī)模豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果不同規(guī)模豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果，見表3。由表3可知，500≤母豬存欄≤1000的較大規(guī)模場，PRRSV抗體陽性率為61.73%，300 ＜母豬存欄＜500的較小規(guī)模場，PRRSV 抗體陽性率為73.86%，兩者感染比例相差12.13%，差異具有顯著性統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)果表明，規(guī)模較大一些的豬場對PRRS的防控效果相對較好，PRRSV感染率小于規(guī)模較小豬場的。雖然PRRS疫苗免疫有爭議、防控有難度，但總體看來規(guī)?；i場對PRRS的防控重視程度較高，尤其是規(guī)模較大的豬場，其在飼養(yǎng)管理、生物安全和藥物預防控制繼發(fā)感染等綜合防控理念及生產(chǎn)中的運用優(yōu)于較小規(guī)模的豬場，伴隨集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，規(guī)?；i場對生物安全與綜合防控的重視程度呈現(xiàn)逐年升高的趨勢。

表3 不同規(guī)模豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 3 The results of PRRSV antibody in swine sera collected from different scales

2.4 不同階段豬群 PRRSV抗體檢測結(jié)果不同階段豬群PRRSV抗體檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，公豬、后備母豬、12～16周齡育肥豬和18～25周齡育肥豬抗體陽性率較高，分別為80.95%、92.86%、86.84%和98.09%，且種豬群中公豬、后備母豬與各胎次經(jīng)產(chǎn)母豬、商品豬群中10周齡以內(nèi)仔豬與12周齡以上育肥豬PRRSV抗體陽性率差異均具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.05），具體數(shù)據(jù)見表4。上述結(jié)果表明，種豬群以公豬和后備母豬抗體陽性率較高，且抗體S/P值≥2.5比例偏高，分別為9.52%和11.9%，提示這些豬群PRRSV相對活躍，正處于野毒感染或感染后的高病毒血癥期[10-11]。種豬群中公豬和后備豬對PRRSV易感性較高，公豬的精液傳播和后備豬的引種是造成豬場PRRSV感染的重要因素[12-13]。建議規(guī)模化種豬場加強公豬的精液檢測，做好后備母豬的引種檢測、隔離、馴化及適時淘汰老齡經(jīng)產(chǎn)母豬，不斷引進PRRSV陰性后備母豬，加速豬場母豬更新，降低豬場PRRSV野毒陽性率是控制種豬群PRRS流行的重要措施。商品豬群中12周齡后的育肥豬PRRSV抗體陽性率急劇上升，且抗體S/P值≥2.5比例高達25.64%，提示大部分豬只已感染野毒，雖然育肥豬的抵抗力較強，PRRSV感染后不表現(xiàn)或僅表現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀，但是育肥豬攜帶的病毒可以回傳至經(jīng)產(chǎn)母豬[14]，尤其是1～2胎的經(jīng)產(chǎn)母豬的易感性較高，造成PRRSV在豬群內(nèi)進行循環(huán)感染。建議規(guī)?；i場對商品豬PRRS的防控可從加強豬群飼養(yǎng)管理、減少應激因素、做好仔豬的疫苗接種、藥物預防控制繼發(fā)感染和適當降低育肥豬的飼養(yǎng)密度等方面開展。

表4 不同階段豬群 PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 4 The results of PRRSV antibody in swine sera at different stages

2.5 PRRSV RT-qPCR檢測結(jié)果對PRRSV抗體陽性率≥80%的公豬、后備母豬、12～16周齡育肥豬和18～25周齡育肥豬4個階段豬群，按照抗體S/P值＜0.4、0.4≤S/P值＜2.5 和S/P值≥2.5不同分布頻段，選取135份血清進行RT-qPCR PRRSV檢測，結(jié)果見表5。由表5可知，135份血清共計檢出24份PRRSV核酸陽性樣本，病毒Ct值與抗體S/P值高低無相關(guān)性。在上述4個抗體陽性率≥80%的豬群階段，血清PRRSV陽性率以后備母豬最高，為20.58%，抗體S/P值＜0.4和S/P值≥2.5異常分布頻段，血清PRRSV陽性率均≥15.38%，而在0.4≤S/P值＜2.5正常范圍內(nèi)，血清PRRSV陽性率均≤10%，抗體異常與正常分布頻段血清PRRSV陽性率之間比較差異顯著，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表6。吳靜波等[15]采用ELISA和RT-qPCR方法檢測PRRSV抗體水平與PRRS病毒血癥之間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，抗體S/P值＜0.4和S/P值＞2.5 的豬群中PRRS病毒血癥發(fā)生率為16.7%，S/P值在0.4～2.5之間的豬群中PRRS病毒血癥發(fā)生率為7.3%。本研究結(jié)果表明，PRRSV抗體在0.4≤S/P值＜2.5正常范圍內(nèi)，公豬、后備母豬、12～16周齡育肥豬和18～25周齡育肥豬，RT-qPCR檢測，血清PRRSV陽性率分別為8.33%、9.09%、8.33%和10.00%，與吳靜波等[15]報道的結(jié)果較為吻合，說明PRRSV抗體水平為0.4≤S/P值＜2.5，PRRS病毒血癥檢出率相對較低，但血清中的PRRS病毒滴度與S/P 值的高低沒有明顯的相關(guān)性。

表5 24份PRRSV陽性樣本RT-qPCR檢測結(jié)果Table 5 The results of RT-qPCR from 24 positive PRRSV samples

表6 PRRSV抗體陽性率≥80%豬群階段血清PRRSV檢測結(jié)果Table 6 The results of PRRSV in serum of pigs with positive rate of PRRSV antibody≥80%

PRRS的血清學調(diào)查由于受檢測時機、采樣數(shù)量及采樣階段等因素的影響，調(diào)查結(jié)果往往會有所差異[16]。本次調(diào)查所有送檢樣品均來自于300頭以上母豬存欄的規(guī)?；瘓?，這種規(guī)模占當前江蘇省養(yǎng)豬業(yè)的主流。因此，本研究的調(diào)查結(jié)果比較接近江蘇省規(guī)模豬場PRRS的流行動態(tài)。鑒于PRRSV變異的多樣性與免疫機制的復雜性，當前規(guī)?；i場對PRRS的防控仍然面臨著壓力與挑戰(zhàn)，做好PRRS的免疫、檢測、生物安全等是防控PRRSV感染的重要舉措。