駱越壯酒抗疲勞及耐缺氧實(shí)驗(yàn)研究

李耀燕，張 曼，李 彤*，白燕遠(yuǎn)，謝陽姣，閆國躍

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 瑤醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530001；2.廣西壯瑤醫(yī)藥與醫(yī)養(yǎng)結(jié)合人才小高地，廣西 南寧 530001)

疲勞是指機(jī)體生理過程不能持續(xù)其機(jī)能在一特定水平或各器官不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度[1]，是機(jī)體復(fù)雜的生理生化變化過程，疲勞的產(chǎn)生標(biāo)志著機(jī)體原有工作能力暫時(shí)下降，或是機(jī)體發(fā)展到傷病狀態(tài)的先兆[2-3]。由于現(xiàn)代社會(huì)環(huán)境、飲食、生活節(jié)奏加快、競爭壓力大等原因，使人體更容易出現(xiàn)疲勞狀態(tài)。

現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)一些中草藥及一些天然植物中含有抗疲勞、抗氧化的成分。如黃精、枸杞子、益智仁、阿膠、大棗都是較好的補(bǔ)益之品，具有很好的抗疲勞、抗氧化，或兩者兼有的作用[4-9]。駱越保健方是廣西武鳴縣阮氏家族祖?zhèn)髅胤?，含多種中藥及壯、瑤藥，臨床發(fā)現(xiàn)，駱越保健方對(duì)亞健康失眠男性睡眠生活質(zhì)量及性功能有正干預(yù)效應(yīng)[10]。本實(shí)驗(yàn)探討以駱越保健方泡制的藥酒——駱越壯酒對(duì)小鼠抗疲勞及耐缺氧作用的影響。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠160只，雌雄各半，體質(zhì)量20～22 g。購于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物培育中心，許可證號(hào)：SYXK(甘)2015-0003。

1.2 藥物與試劑

駱越壯酒及其溶媒體白酒(廣西武鳴駱越壯酒有限公司)；陽性對(duì)照品紅景天(北京索萊寶科技有限公司，10338-51-9)；全血乳酸檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所A019-1)；血尿素檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所C013-2)；乳酸脫氫酶檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所A020-2)；血紅蛋白檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所A059)。

1.3 儀器與設(shè)備

紫外分光光度計(jì)(日本島津，UV-2401PC)；電熱恒溫水槽(金壇成輝儀器廠，HH-W600)；電子天平(日本島津，ER-120A)。

2 方法

2.1 動(dòng)物篩選及給藥

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)前于室溫環(huán)境下，自由飲水，常規(guī)飼料飼養(yǎng)1周適應(yīng)環(huán)境，進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn)，篩選行為學(xué)評(píng)分相近的小鼠，分組如下。

抗疲勞實(shí)驗(yàn)分為：①正常對(duì)照組；②溶媒對(duì)照組；③低劑量駱越壯酒組；④中劑量駱越壯酒組；⑤高劑量駱越壯酒組；⑥紅景天陽性對(duì)照組。

耐缺氧實(shí)驗(yàn)分為：①正常對(duì)照組；②溶媒對(duì)照組；③低劑量駱越壯酒組；④中劑量駱越壯酒組；⑤高劑量駱越壯酒組；⑥紅景天陽性對(duì)照組。

亞硝酸鈉毒性實(shí)驗(yàn)分為：①正常對(duì)照組；②低劑量駱越壯酒組；③中劑量駱越壯酒組；④高劑量駱越壯酒組。

所有動(dòng)物于每日晨起8時(shí)定時(shí)灌胃1次，灌胃28 d后進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)。駱越壯酒組的劑量以毒性試驗(yàn)為參考選定。灌胃體積以駱越壯酒高劑量組灌胃體積為標(biāo)準(zhǔn)，各組不足部分以生理鹽水補(bǔ)充。各組給藥劑量如下，正常對(duì)照組：灌胃與高劑量等體積生理鹽水；溶媒對(duì)照組：灌胃與中劑量等體積的溶媒(駱越壯酒的溶媒白酒)；低劑量駱越壯酒組：13.39 mL/kg；中劑量駱越壯酒組：21.81 mL/kg；高劑量駱越壯酒組：35.52 mL/kg；紅景天陽性對(duì)照組：按干品1 g/kg·wet·d的劑量灌胃。

2.2 抗疲勞實(shí)驗(yàn)

2.2.1 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn) 小鼠連續(xù)灌胃給藥28 d后，于末次灌胃120 min后，在尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，放入自制游泳箱中游泳并避免各小鼠之間的相互影響，水溫34℃，水深38 cm，記錄游泳開始至小鼠游泳疲勞而沉入水中7 s不能浮起的時(shí)間為負(fù)重游泳時(shí)間。

2.2.2 抗疲勞生化指標(biāo)測定 小鼠末次給藥120 min后，無負(fù)重在溫度為(30±0.5)℃的水中游泳90 min，撈出小鼠擦干60 min后，拔眼球采血0.5～1 mL (整個(gè)采血控制在30 s內(nèi)完成)，血液在室溫(30 ℃)靜置30 min使血液凝固，以5 000 r·min-1離心10 min，取血漿，置冰箱中冷藏備用，檢測血漿中乳酸、尿素氮含量及乳酸脫氫酶活力。同時(shí)迅速取出小鼠肝臟和股四頭肌，放入液氮罐保存?zhèn)溆靡詸z測肝糖原和肌糖原含量。

血乳酸(LD)的測定、尿素氮(BUN)的測定、肝糖原和肌糖原的測定及乳酸脫氫酶(LDH)的測定均按相應(yīng)測試盒說明進(jìn)行測定。

2.3 耐缺氧實(shí)驗(yàn)

2.3.1 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 小鼠連續(xù)灌胃給藥28 d，于末次灌胃60 min后，將小鼠放入250 mL事先盛有紗布包好的15 g堿石灰的廣口瓶中，每瓶1只，涂抹凡士林密封瓶口，記錄從密封至小鼠呼吸停止的時(shí)間。

2.3.2 急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn) 末次給藥60 min后，對(duì)每組動(dòng)物稱重，各組小鼠自頸部逐只斷頭，記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止的時(shí)間。

2.4 亞硝酸鈉中毒存活試驗(yàn)

小鼠末次給藥后120 min，均腹腔注射亞硝酸鈉溶液(0.1 mL/10 g)，立即計(jì)時(shí)，記錄動(dòng)物存活時(shí)間。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

3 結(jié)果

3.1 駱越壯酒對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果，詳見表1。表明中劑量駱越壯酒和紅景天一樣，可顯著延長小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間(P<0.01)，且負(fù)重游泳時(shí)間比紅景天陽性對(duì)照組和正常對(duì)照組分別提高11.55%和33.16%。低劑量組的負(fù)重游泳時(shí)間與正常對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但溶媒組和高劑量組的負(fù)重游泳時(shí)間顯著少于正常對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果表明適量的駱越壯酒具有抗疲勞作用，但過量的駱越壯酒與溶媒白酒一樣令小鼠更加疲勞。

組別游泳時(shí)間t(min)正常對(duì)照組7.69±1.01紅景天組9.18±0.78**溶媒組5.31±0.50**高劑量5.15±0.83**中劑量10.24±1.59**低劑量7.33±0.83

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01。

組別生化指標(biāo)血乳酸(mmol/L)血清尿素氮(mmol/L)乳酸脫氫酶(U/L)肝糖原(mg/g)肌糖原(mg/g)正常對(duì)照組5.41±0.1911.46±0.312 292.70±118.101 228.90±64.9210.62±0.47紅景天組3.12±0.17**7.59±0.22**2 100.10±204.371 943.90±57.27**12.32±1.01**溶媒組5.44±0.1612.44±0.40**2 425.10±352.451 519.00±262.92**9.30±0.26**高劑量3.23±0.16**7.54±0.22**2 221.50±334.061 753.80±199.02**11.62±0.90**中劑量4.83±0.21**9.74±0.35**2 415.00±262.241 554.90±106.99**12.29±0.68**低劑量4.90±0.14**10.52±0.38**2 325.40±213.121 497.10±150.05**11.11±0.74

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01。

3.2 駱越壯酒對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠抗疲勞生化指標(biāo)的影響

由表2可見，與正常對(duì)照組相比，駱越壯酒低、中、高劑量和組紅景天均可顯著降低運(yùn)動(dòng)后小鼠的血乳酸值(P<0.01)，降低的幅度分別為9.43%、10.72%、40.30%、42.33%，說明駱越壯酒與紅景天一樣，可以降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸的生成。溶媒組與正常對(duì)照之間血乳酸值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

運(yùn)動(dòng)后，駱越壯酒低、中、高劑量組及紅景天陽性對(duì)照組小鼠血清尿素氮顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01)，分別下降8.20%、15.01%、34.21%和33.77%，而溶媒組血清尿素氮顯著高于正常對(duì)照(P<0.01)。

運(yùn)動(dòng)后，小鼠的乳酸脫氫酶在正常對(duì)照組和紅景天組、溶媒組、駱越壯酒各劑量組之間無顯著差異(P<0.05)，表明給藥對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后的乳酸脫氫酶的活性影響不大。

駱越壯酒各劑量組及紅景天陽性對(duì)照組、溶媒組的肝糖原數(shù)值在運(yùn)動(dòng)后均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)，其中紅景天組又顯著高于其他各組(P<0.05)，駱越壯酒組肝糖原數(shù)值隨用藥劑量升高而升高。

駱越壯酒中劑量組、高劑量組及紅景天陽性對(duì)照組的肌糖原數(shù)值在運(yùn)動(dòng)后極顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)。低劑量組與正常對(duì)照組的肌糖原數(shù)值間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而運(yùn)動(dòng)后溶媒組小鼠肌糖原數(shù)值極顯著低于正常對(duì)照組和駱越壯酒各組(P<0.01)。

由表3可見，中劑量組小鼠的常壓耐缺氧時(shí)間雖然顯著低于紅景天陽性對(duì)照組，但卻高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組小鼠常壓耐缺氧時(shí)間與正常對(duì)照組差異不顯著(P<0.05)，溶媒組和高劑量組常壓耐缺氧時(shí)間極顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01)。低劑量組和中劑量組小鼠急性腦缺血時(shí)間極顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)；高劑量組小鼠的急性腦缺血時(shí)間與正常對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但兩者顯著高于溶媒組(P<0.01)。

3.3 駱越壯酒對(duì)小鼠耐缺氧時(shí)間的影響

組別小鼠耐缺氧時(shí)間常壓耐缺氧時(shí)間(min)急性腦缺血時(shí)間(s)正常對(duì)照組23.07±0.9416.00±1.06紅景天組26.12±1.55**23.35±1.16**溶媒組18.54±0.55**14.13±1.01**高劑量19.84±0.86**15.93±0.66中劑量24.25±1.19*21.78±1.10**低劑量22.80±2.2917.63±1.18**

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.4 駱越壯酒對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響

組別亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間t(min)正常對(duì)照組19.06±0.69高劑量25.14±0.77**中劑量20.70±0.94**低劑量18.64±0.71

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01。

由表4結(jié)果可見，盡管駱越壯酒低劑量組小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間與正常對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但中劑量和高劑量駱越壯酒卻可以顯著延長小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間(P<0.01)。

4 討論

運(yùn)動(dòng)耐力下降是疲勞最直接的表現(xiàn)，而測定機(jī)體持續(xù)運(yùn)動(dòng)到力竭的時(shí)間可以反映機(jī)體的耐力，因此，負(fù)重力竭游泳時(shí)間一直被作為是反映運(yùn)動(dòng)耐力的重要指標(biāo)[4-6，11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，駱越壯酒中劑量組的負(fù)重游泳時(shí)間比紅景天陽性對(duì)照組和正常對(duì)照組分別提高11.55%和33.16%，表明駱越壯酒可顯著提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力，但不具有“劑量—效應(yīng)”關(guān)系。

乳酸、尿素氮和糖原都是常用的抗疲勞生化指標(biāo)[12]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，駱越壯酒與紅景天一樣能顯著降低運(yùn)動(dòng)后小鼠的血乳酸及血清尿素氮的濃度，提高小鼠肝糖原和肌糖原含量。對(duì)血乳酸和血清尿氮素的影響，高劑量組與紅景天組的效果相當(dāng)；對(duì)肝糖原的影響中紅景天效果顯著優(yōu)于駱越壯酒各劑量組；而對(duì)肌糖原的影響中，中劑量組的效果與紅景天組相當(dāng)。在實(shí)驗(yàn)中，駱越壯酒對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠乳酸脫氫酶影響不大，暗示通過提高體內(nèi)乳酸脫氫酶活性而加速血乳酸清除的機(jī)制可能并非駱越壯酒抗疲勞的機(jī)制之一。

研究表明，缺氧與中樞疲勞和外周疲勞都有密切的關(guān)系。人體在劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，缺氧會(huì)促使肌肉進(jìn)行糖的無氧酵解，能量(ATP)減少，乳酸增多，導(dǎo)致疲勞[13]。缺氧也可導(dǎo)致腦突觸傳遞功能受阻，從而導(dǎo)致神經(jīng)疲勞的發(fā)生[14]。機(jī)體耐疲勞能力與耐缺氧能力密切相關(guān)，耐缺氧時(shí)間越長，耗氧量越低，反映機(jī)體組織對(duì)氧的利用率越高，有利于體內(nèi)能量的節(jié)省，可以提高體力和腦力的活力效能[15]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量的駱越壯酒可顯著延長小鼠常壓耐缺氧時(shí)間及耐急性腦缺氧時(shí)間，但不存在“量—效”關(guān)系。急性亞硝酸鈉中毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，駱越壯酒可以顯著延長小鼠亞硝酸鈉中毒后的存活時(shí)間，且在一定范圍內(nèi)存在“量—效”關(guān)系。

綜上所述，駱越壯酒可以提高小鼠抗疲勞及耐缺氧能力。中醫(yī)認(rèn)為酒性溫，味甘苦辛，有毒，入心、肝、肺、胃經(jīng)。酒可飲用，與藥結(jié)合引藥入經(jīng)、通經(jīng)活絡(luò)、溫補(bǔ)陽氣、祛寒止痛等，更是理想的有機(jī)溶媒，能溶解藥物有效成分，降低毒副作用[16]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，酒與駱越保健方藥物結(jié)合，較之溶媒體白酒，有更好的抗疲勞和提高耐缺氧作用。