羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的急性心肺損傷的保護作用及機制①

石恩朋 彭美玉

(德州市市立醫(yī)院檢驗科,德州 253012)

膿毒癥是由感染、大面積燒傷、外科大手術(shù)、嚴重創(chuàng)傷等因素引起的一種常見的并發(fā)癥，是臨床重癥科室主要死亡因素之一[1]。膿毒癥早期主要表現(xiàn)為系統(tǒng)性炎性反應(yīng)，通過釋放大量的炎癥介質(zhì)，進而誘發(fā)膿毒癥休克和多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，其中心血管和肺組織是最容易發(fā)生損傷的器官。

在膿毒癥誘發(fā)MODS中肺組織是最先也是最容易被牽連的器官，進而誘發(fā)急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome，ARDS)。與直接感染造成的ALI/ARDS相比，膿毒癥造成的ALI/ARDS的恢復(fù)性更差，住院時間更長，死亡率更高[2]。膿毒癥誘導(dǎo)的ALI/ARDS的主要特征表現(xiàn)為肺組織中性粒細胞的浸潤增加、肺毛細血管通透性增加、肺泡上皮細胞被嚴重破壞、肺表面張力顯著增加和肺泡塌陷等。膿毒癥可導(dǎo)致肺組織分泌大量炎癥因子[3]。參與肺組織炎癥信號活化的通路的較多，膿毒癥可以激活NF-κB和MAPK 3個亞家族(ERK、JNK和p38)信號通路促進炎癥因子的分泌，導(dǎo)致ALI/ARDS[4]。在LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥模型中，白藜蘆醇可以激活沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent information regulator 1，SIRT1)，降低炎癥因子的分泌，減輕ALI[5]。因此上調(diào)SIRT1的表達，抑制NF-κB信號通路的過度活化，從而降低肺泡灌洗液中TNF-α、 IL-1β 和IL-6等炎癥因子的分泌，是改善膿毒癥誘導(dǎo)的ALI有效方法。

臨床大約50%以上的膿毒癥患者伴有膿毒癥心肌病，并且心臟功能受損可以使膿毒癥患者的死亡率增加70%[6]。膿毒癥誘導(dǎo)的心功能障礙主要表現(xiàn)在心臟收縮功能受損，如左室射血分數(shù)(Ejection fractions，EF)和短軸縮短率(Fractional shortening，F(xiàn)S)下降，左室收縮峰壓/左室舒張末期壓(Left ventricular systolic peak pressure/left ventric-ular end-diastolic pressure，LVPP/LVEDP)下降及左心室舒張末期容積(Left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)增加等。同時研究表明膿毒癥心肌細胞中TNF-α、 IL-1β和IL-6等炎癥因子的分泌明顯增加[7]，最新研究表明，通過降低炎癥因子的分泌，可以降低膿毒癥誘導(dǎo)的心肌損傷，并延長膿毒癥小鼠的生存時間[8]。

SIRT1基因敲除的小鼠，膿毒癥誘導(dǎo)的心肌損傷明顯加重[9]。因此激活SIRT1，抑制NF-κB信號通路的過度活化，從而降低心肌細胞中TNF-α、 IL-1β和IL-6等炎癥因子的分泌，可能是改善膿毒癥誘導(dǎo)的心肌功能障礙的有效方法。

羥基酪醇(Hydroxytyrosol,HYD)是橄欖油中的主要活性成分之一，研究表明，HYD具有廣泛的抗動脈硬化、抗血栓、抗炎和抗氧化活性[10]。HYD可以降低LPS刺激巨噬細胞ROS、TNF-α 和IL-6的產(chǎn)生，抑制血管內(nèi)皮細胞NF-κB 信號通路的活化[11,12]，同時HYD可保護心臟缺血再灌注損傷[13]。最新研究表明HYD可以激活SIRT1，降低氧化應(yīng)激引發(fā)的線粒體功能障礙，同時可以上調(diào)SIRT1表達，降低LPS誘導(dǎo)的肺組織炎性反應(yīng)[14,15]。但是HYD是否可以通過調(diào)節(jié)SIRT1的表達降低膿毒癥及膿毒癥誘導(dǎo)的多器官損傷尚無相關(guān)報道。

本研究將利用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(Cecal ligation and puncture,CLP)構(gòu)建小鼠膿毒癥模型，并探討HYD對膿毒癥小鼠心肌功能、肺組織損傷及小鼠生存率的影響，同時研究HYD對膿毒癥小鼠心、肺組織中SIRT1的表達和NF-κB活化的影響，從而更加深入闡明HYD改善膿毒癥心肌損傷和保護膿毒癥急性肺損傷可能的分子生物學(xué)機制，為更多HYD的臨床研究提供實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑 Hydroxytyrosol(阿拉丁生化科技股份有限公司，上海)；Trisol reagent(Invitrogen，美國)；RT-PCR試劑盒(全式金生物技術(shù)有限公司，北京)；Primers(生工生物技術(shù)有限公司，上海)；BCA Protein Assay Kit(索萊寶，北京)； Anti-phosphate-NF-κB、Anti-NF-κB、Anti-mouse IgG和Anti-rabbit IgG(Cell signaling，美國)；Anti-SIRT1和Anti-GADPH(Abcam，美國)；TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA 試劑盒(R&D，美國)；MPO 檢測試劑盒(建成生物工程研究所，南京)。

1.1.2實驗動物 C57BL/6小鼠，雄性，20～25 g，6～8周齡大，SPF級，購于北京華阜康生物科技股份有限公司，飼養(yǎng)于醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.2方法

1.2.1實驗分組 小鼠飼養(yǎng)1周后，按照隨機分組原則分為3組，每組10只，即假手術(shù)組(Sham)、模型組(CLP)和治療組(HYD+CLP)。禁食12 h后實施手術(shù)。

圖1 CLP手術(shù)過程Fig.1 Surgical procedure of cecal ligation and puncture

1.2.2膿毒癥模型的建立 根據(jù)有關(guān)膿毒癥模型的文獻報道[16-18]，采用非常接近于臨床的CLP建立膿毒癥動物模型。小鼠腹腔注射10%水合氯醛，給藥劑量為0.004 ml/g 麻醉小鼠，腹部脫毛，消毒，沿腹中線開2～4 cm的小口，分離盲腸，在距離盲腸末端大約0.5 cm處用外科4.0帶針縫合線進行結(jié)扎，在結(jié)扎的中間位置使用21G注射器針頭全層對穿腸管(為確保穿刺效果來回抽動2次)，以輕擠可見少許糞便于穿刺處流出為標(biāo)準(zhǔn)以保證穿孔，將穿刺好的盲腸放回腹腔，關(guān)腹(如圖1所示)。手術(shù)過程中保證：①手術(shù)全程要在5 min之內(nèi)完成；②手術(shù)全程都要注意無菌操作，采用一次性耗材，避免因為操作原因的感染造成各組模型的差異；③手術(shù)分兩個步驟結(jié)扎盲腸和穿孔，這兩項應(yīng)由同一人完成，從而盡量保證所有動物的一致性。Sham組小鼠，只是單純的打開腹腔，將盲腸按照以上相同的方法取出，不對盲腸根部進行任何的結(jié)扎及穿刺，在空氣中暴露與膿毒癥小鼠手術(shù)相同的時間后，將腸管盡量保持原有的功能位置放回腹腔，然后用真絲編織線逐層縫合腹壁，最后消毒縫合切口。HYD+CLP組于造模后10 min灌胃給藥1次(20 mg/kg)。Sham組和CLP組給予等量的生理鹽水，各組均在造模后24 h測定大鼠的心臟功能，并取心臟和肺組織，于液氮中保存；另外，按如上操作重新建立三組CLP小鼠模型，24 h后進行肺泡灌洗，灌洗液-20℃保存。

1.2.3左心室心臟功能測定 各組造模24 h后，對小鼠進行超聲心動檢測，觀察并記錄各組左心室功能的變化情況。首先在小鼠心臟區(qū)域及周邊約2 cm 范圍內(nèi)備皮。按照Visualsonic Vevo 2100超聲系統(tǒng)的操作規(guī)范進行心功能檢測。設(shè)置探頭頻率為25 MHz，探測深度為15～20 mm。探頭置于小鼠的左胸，獲取滿意的左心室二維圖像，在短軸水平取得二維圖像后，在乳頭肌水平將M型取樣線垂直于室間隔與左心室后壁獲得M型超聲心動圖，通過M型超聲測定室后壁運動幅度和LVEF。連續(xù)采集8個心動周期的動態(tài)圖像。儲存圖像后用VisualsonicSVevo770R專業(yè)軟件進行分析，測量和計算后得出左心室EF和FS。

1.2.4肺組織病理學(xué)檢查及評分 各組于造模24 h 后取材，麻醉小鼠，取右肺中葉，固定、包埋、切片，蘇木精-伊紅(HE)染色，觀察各組小鼠肺組織病理學(xué)變化情況，并對每張片子隨機選擇10個視野進行拍照記錄，然后依據(jù)美國胸科協(xié)會肺損傷的評分標(biāo)準(zhǔn)(表1)，對每一個小鼠肺組織進行病理學(xué)評分。

1.2.5MPO活性測定 采用測定MPO活性的方式判定中性粒細胞聚集程度。按照MPO 檢測試劑盒說明書操作。

1.2.6酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測肺泡灌洗中炎癥因子的分泌 各組小鼠造模24 h后，麻醉小鼠，消毒，分離小鼠頸部支氣管，將20G的靜脈留置針置入氣管中固定。經(jīng)靜脈留置針將預(yù)冷的PBS輕輕注入肺中，每次灌洗0.8 ml，吸出后再次注入，反復(fù)2次后，抽出PBS置于無菌的EP管中，再灌洗1次，保證每次的回收率大于80%認定為合格，即注射0.8 ml的PBS可以回收0.7 ml。離心去除肺泡灌洗中的炎癥細胞，離心轉(zhuǎn)速為2 000 r/min，共離心 10 min，收集上清液并分裝后凍存于-80℃冰箱中保存。按照ELISA試劑盒說明書操作檢測TNF-α、IL-6 和IL-1β濃度。

表1 肺損傷病理評分標(biāo)準(zhǔn)

Tab.1 Lung injury pathology score criteria

ParameterGrade0 score1 score2 scoresNumber of neutrophils in the alveolar space(A)01-5>5Number of neutrophils in the interstitium of the lung(B)01-5>5Hyaline membranes(C)01>1Protein residue in the alveolar space(D)01>1Alveolar septum thickening(E)<2x2x-4x>4x

Note：Lung injury score=[(20×A)+(14×B)+(7×C)+(7×D)+(2×E)]/(Visual field number×100).

1.2.7Real-time RCR檢測心臟組織炎癥因子的表達 提取心臟組織RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA。引物序列(表2)由上海生工生物工程有限公司合成。運用SYBR Green 熒光染料法，數(shù)據(jù)分析根據(jù)公式2-ΔΔCT法計算各組與假手術(shù)組之間目的基因相對表達含量的變化；GAPDH作為內(nèi)參，每個樣品3個復(fù)孔。

1.2.8Western blot檢測 取約30 mg心臟和肺組織，加入0.5 ml的RIPA裂解液，用組織研磨器研磨均勻，將研磨液轉(zhuǎn)移到1.5 ml的無菌的EP管中冰上靜止30 min，中間用振蕩器每隔5 min振蕩1次，每次30 s，然后4℃、12 000 g離心15 min，吸取上清，將其轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml EP管中；按照說明書進行蛋白定量。Western blot檢測分別加入一抗Anti-phosphate-NF-κB、Anti-NF-κB、Anti-SIRT1和Anti-GADPH，二抗Anti-mouse IgG和Anti-rabbit IgG。

1.2.9小鼠生存率觀察 假手術(shù)組(Sham)、模型組(CLP)和治療組(HYD+CLP)各10只小鼠，所有小鼠術(shù)后自由進食及飲水，每天觀察記錄小鼠活動情況和精神狀態(tài)，觀察7 d內(nèi)各組小鼠的生存情況，統(tǒng)計分析各組小鼠的生存率差異，繪制死亡率百分率(%)表和生存曲線。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 實驗結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析，組間的差異用單因素方差分析，多組間比較采用 One-Way ANOVA 完全隨機設(shè)計資料的方差分析。應(yīng)用生存分析中的小樣本 Kaplan-Meier 方法(log-rank 檢驗)分析各小組間死亡率以及各組間平均生存時間差異，并繪制生存曲線，平均生存時間組間比較采用秩和檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 Real-time PCR引物序列

Tab.2 Real-time PCR primer sequence

GeneForward primer(5′→3′)Reverse primer(3′→5′)TNF-αCGTCAGCCGATTTGCTATCTCGGACTCCGCAAAGTCTAAGIL-6AGTTGCCTTCTTGGGACTGATCCACGATTTCCCAGAGAACIL-1βCTATGTCTTGCCCGTGGAGCATCATCCCACGAGTCACAGAPDHGCCTCGTCTCATAGACAAGATGCAGTAGACTCCACGACATAC

2 結(jié)果

2.1羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠心臟功能的影響 首先取得胸骨旁左心室短軸 M 型超聲心動圖(圖 2A)，與Sham組相比，CLP組LVEDV顯著增加，HYD+CLP組LVEDV較CLP組明顯降低。然后應(yīng)用專業(yè)數(shù)據(jù)軟件進行處理和分析計算EF和FS值；每組數(shù)據(jù)取連續(xù)3個心動周期的平均值。如圖2B和2C所示，造模24 h后，CLP組小鼠的EF與FS值較Sham組顯著降低(P<0.01)，而HYD+CLP組EF和FS的值較CLP組明顯升高(P<0.05)。

2.2羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠心臟炎癥因子表達的影響 造模24 h后，取心臟組織，提取RNA，Real-time PCR法檢測IL-6、IL-1β和TNF-α的各組的表達差異，如圖3所示，造模24 h后，與Sham組相比，CLP組小鼠心臟炎癥因子(TNF-α:1.00±0.01 vs 3.50±0.04；IL-6：1.00±0.09 vs 4.69±0.21；IL-1β：1.00±0.11 vs 3.16±0.22)的表達顯著升高，P<0.01；而HYD治療后，與CLP組相比，HYD+CLP組炎癥因子的表達明顯下降(TNF-α:3.50±0.04 vs 2.81±0.06； IL-6：4.69±0.21 vs 3.19±0.19；IL-1β：3.16±0.22 vs 2.01±0.15)，P<0.01。

2.3羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠肺組織病理學(xué)改變的影響 造模24 h后，取肺組織，HE染色，光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變，如圖4A所示，Sham組小鼠肺組織較完好，肺間隔無增寬，無水腫液，肺泡腔中偶見少量的巨噬細胞，未見中性粒細胞浸潤。

圖2 羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠心臟功能的影響Fig.2 Effect of hydroxytyrosol to sepsis-induced cardi-ovascular dysfunction on mouseNote: HYD+CLP vs Sham group，*.P<0.01;HYD+CLP vs CLP group，#.P<0.01.

CLP組，小鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺間質(zhì)和肺泡腔中有大量的中性粒細胞浸潤，肺間隔明顯增寬，偶見少量的蛋白質(zhì)殘留物。HYD+CLP組，小鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞減輕，肺間隔無明顯增寬，肺泡腔和肺間質(zhì)內(nèi)中性粒細胞滲出減少，同時對肺組織病理損傷進行評分，如圖4B所示，CLP組與Sham組相比，評分顯著升高(2.50±0.51 vs 9.50±0.94)，P<0.01，而HYD治療后，與CLP組相比，HYD+CLP組病理評分明顯降低(9.50±0.94 vs 4.33±0.47)，P<0.01。

2.4羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠肺泡灌洗液炎癥因子及肺組織中性粒細胞浸潤的影響 研究表明失控的炎性反應(yīng)也是誘導(dǎo)急性肺損傷的主要原因之一，檢查肺泡灌洗液中炎癥因子的分泌，如圖5A～C所示：與Sham組相比，CLP組肺泡灌洗液中炎癥因子[TNF-α:(12.02±2.46)pg/ml vs (57.53±14.78) pg/ml；IL-6：(9.65±1.09)pg/ml vs (36.88±1.80) pg/ml；IL-1β：(33.07±2.99)pg/ml vs (63.16±4.2)pg/ml,P<0.01]分泌明顯增加；而HYD治療后，與CLP組相比，HYD+CLP組炎癥因子的分泌明顯降低[TNF-α:(57.53±14.78)pg/ml vs (32.91±6.85) pg/ml； IL-6：(36.88±1.80)pg/ml vs (17.75±2.32) pg/ml；IL-1β：(63.16±4.20)pg/ml vs (40.16±2.62) pg/ml，P<0.01]。中性粒細胞大量浸潤是造成肺組織損傷的另一主要原因，MPO是中性粒細胞的特異性標(biāo)志物，檢測肺組織MPO活性間接反應(yīng)中性粒細胞的反映情況，如圖5D所示，CLP組MPO活性[(0.22±0.06)U/g vs (0.58±0.04)U/g，P<0.01]顯著升高。而HYD治療后，與CLP組相比，HYD+CLP組MPO活性[(0.58±0.04)U/g vs (0.32±0.01)U/g，P<0.01]顯著降低。

圖3 羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠心臟炎癥因子表達的影響Fig.3 Effect of hydroxytyrosol to levels of inflammatory cytokine in sepsis-induced mouse myocardium tissueNote: HYD+CLP vs Sham group，*.P<0.01;HYD+CLP vs CLP group，#.P<0.01.

圖4 羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠肺組織病理學(xué)改變的影響

Fig.4 Effect of hydroxytyrosol to pulmonary histopatho-logical changes in sepsis-induced mouse myocar-dium tissue

Note: HYD+CLP vs Sham group，*.P<0.01;HYD+CLP vs CLP group，#.P<0.01.

圖5 羥基酪醇對膿毒癥誘導(dǎo)的小鼠肺泡灌洗液炎癥因子及肺組織中性粒細胞浸潤的影響Fig.5 Effect of hydroxytyrosol to levels of inflammatory cytokine in bronchoalveolar lavage fluid and neutrophil/leukocyte infiltration in sepsis-induced mouse myocardium tissueNote: HYD+CLP vs Sham group，*.P<0.01;HYD+CLP vs CLP group，#.P<0.01.

2.5羥基酪醇對心臟和肺組織炎癥信號通路的活化的影響 應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測羥基酪醇對心臟組織和肺組織中SIRT1的表達和NF-κB活性的影響。與Sham組相比，CLP小鼠SIRT1表達在心臟(圖6A～C)，和肺組織(圖6D～F)都顯著降低，而p65磷酸化水平顯著增強，而HYD治療可以上調(diào)SIRT1的表達，抑制p65磷酸化。

2.6羥基酪醇對膿毒癥小鼠生存率的影響 CLP膿毒癥模型可以造成小鼠死亡，能否延長小鼠的生存時間是檢測藥物療效的重要指標(biāo)，因此我們觀察HYD對膿毒癥小鼠7 d生存率的影響。各組實驗小鼠 CLP 術(shù)后麻醉全部蘇醒，12 h各組小鼠活動、進食等情況無明顯差異，24 h后，部分小鼠出現(xiàn)豎毛、活動減少和飲食減少等行為改變。CLP組48 h后開始有部分小鼠出現(xiàn)嚴重的全身重癥感染跡象導(dǎo)致死亡。記錄各組每天的死亡情況并繪制生存曲線，如圖7所示，CLP組7 d的生存率只有20%，而HYD+CLP組7 d生存率在50%以上(P<0.01)。

圖6 羥基酪醇對心臟和肺組織炎癥信號通路活化的影響Fig.6 Effect of hydroxytyrosol to activation of inflammatory signaling pathway in myocardium and pulmonary tissueNote: HYD+CLP vs Sham group，*.P<0.01;HYD+CLP vs CLP group，#.P<0.01.

圖7 小鼠7 d生存曲線圖Fig.7 7-days survival rate curve of mouseNote: HYD+CLP vs CLP group，#.P<0.01.

3 討論

失控的炎性反應(yīng)是膿毒癥的本質(zhì)特征，膿毒癥患者多伴有可疑感染或感染，適度調(diào)控早期炎性反應(yīng)成為膿毒癥防治的有效措施。據(jù)有關(guān)報道稱大約40%的因為膿毒癥而導(dǎo)致休克的患者存在心臟功能改變，主要體現(xiàn)在心室收縮功能障礙。尤其是在休克發(fā)生2～3 d后，其存在心臟功能障礙的患者可增至60%。并且，心臟功能障礙也是評估膿毒癥患者預(yù)后不良的重要指標(biāo)之一[6]。本研究發(fā)現(xiàn)HYD明顯抑制膿毒癥誘導(dǎo)的LVEDV的增加和EF與FS值的降低，提示HYD可減輕膿毒癥誘導(dǎo)的心臟功能障礙。目前，膿毒癥誘導(dǎo)的心臟功能障礙的機制尚不明確，過度的炎性反應(yīng)是其主要原因之一。體外TNF-α、IL-6 和IL-1β可導(dǎo)致心肌細胞收縮力明顯下降[19]。膿毒癥患者應(yīng)用TNF-α 中和抗體治療可以顯著改善左心室心功能[20]。本研究結(jié)果顯示HYD可顯著降低心臟組織中炎癥因子的表達，這可能是其改善左心室心臟功能的原因之一。SIRT1分子是調(diào)控膿毒癥炎性反應(yīng)的關(guān)鍵信號分子，在膿毒癥早期SIRT1分子表達量降低，導(dǎo)致過度炎性反應(yīng)，膿毒癥后期，SIRT1分子表達顯著升高，從而導(dǎo)致免疫抑制[21]。SIRT1分子調(diào)節(jié)NF-κB的活化，激活SIRT1可抑制NF-κB的活化[22]，我們研究發(fā)現(xiàn)HYD可以顯著上調(diào)心肌組織中SIRT1的表達，同時抑制NF-κB的活化。因此本研究結(jié)果可表明HYD可通過上調(diào)心肌組織中SIRT1的表達和抑制NF-κB的活化而降低炎癥因子的產(chǎn)生，從而改善左心室心臟功能。

與膿毒癥誘導(dǎo)的心肌功能障礙相比，膿毒癥誘導(dǎo)的ALI發(fā)病率更高。引起ALI的原因多樣，其中膿毒癥被認為是造成ALI進展的最主要高風(fēng)險因素[23]。在膿毒癥患者中，急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征等都是常見的并發(fā)癥。而膿毒癥造成肺損傷的主要原因就是感染所致的炎癥，中性粒細胞、肺泡巨噬細胞、肺泡上皮細胞、淋巴細胞等均會參與到炎癥的發(fā)展中去，尤其是中性粒細胞和巨噬細胞。研究報道，HYD可以上調(diào)SIRT1表達減輕LPS引起的ALI[24]，我們的結(jié)果顯示HYD治療后，膿毒癥小鼠肺組織損傷程度顯著減輕，同時中性粒細胞肺組織浸潤減少。膿毒癥可激活肺組織中NF-κB信號通路而促進炎癥因子TNF-α、IL-6 和IL-1β等的分泌，這是造成急性肺損傷的主要原因[25]。我們的結(jié)果顯示，HYD可顯著降低炎癥因子TNF-α、IL-6 和IL-1β的分泌，同時HYD可上調(diào)肺組織SIRT1表達和抑制NF-κB的活化。因此我們的結(jié)果可表明HYD通過上調(diào)肺組織中SIRT1的表達和抑制NF-κB的活化而減少 TNF-α、IL-6 和IL-1β的分泌，從而保護膿毒癥誘導(dǎo)的急性肺損傷。

CLP膿毒癥模型可以造成小鼠死亡，能否延長小鼠的生存時間是檢測藥物療效的重要指標(biāo)，我們的結(jié)果表明HYD治療可顯著降低CLP小鼠的死亡率。

總之，我們的研究發(fā)現(xiàn)HYD可通過上調(diào)SIRT1的表達和抑制NF-κB炎癥信號通路的活化而抑制炎癥因子的表達和分泌，從而減輕膿毒癥誘導(dǎo)的急性心肌損傷和肺損傷，并降低小鼠的死亡率。但是其更加深入的作用機制尚需進一步的研究和探索。HYD作為天然的抗炎藥物在防止或減輕過度炎性反應(yīng)造成的機體機能紊亂和器官功能損傷方面效果顯著，應(yīng)用前景廣闊。