β族鏈球菌檢測(cè)方法的對(duì)比評(píng)價(jià)

辛潔，魏文婷，楊利鑫

（空軍航空醫(yī)學(xué)研究所附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，北京 100089）

0 引言

β族鏈球菌又名無(wú)乳鏈球菌（GBS），是一種革蘭氏陽(yáng)性球菌和條件致病菌，是孕婦圍產(chǎn)期感染和新生兒感染的重要病原菌。孕婦圍產(chǎn)期感染GBS可致胎膜早破、早產(chǎn)、流產(chǎn)、產(chǎn)褥感染，并可導(dǎo)致新生兒肺炎、腦膜炎、敗血癥等[1]。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室必須加強(qiáng)對(duì)圍產(chǎn)期孕婦GBS篩查工作。本研究旨在通過(guò)對(duì)GBS的細(xì)菌培養(yǎng)法、免疫法和PCR法的五種檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)估，為快速、準(zhǔn)確地鑒定GBS感染診斷提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）研究對(duì)象：我院2016年6月至12月的門(mén)診妊娠34-37周的孕婦200例（均為初產(chǎn)婦），孕周均通過(guò)B超和末次月經(jīng)時(shí)間核查確認(rèn)，近期無(wú)感染性疾病及抗菌藥物使用史。標(biāo)本為同時(shí)采集5份生殖-直腸分泌物。

（2）儀器與試劑PCR擴(kuò)增儀，熒光PCR試劑盒為廈門(mén)泰普生物科學(xué)有限公司。西門(mén)子全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)及其配套革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌鑒定卡，CO2培養(yǎng)箱，層析法試劑盒由珠海華澳科技提供。乳膠法試劑盒由北京金沃生物工程技術(shù)有限公司提供。

1.2 方法

（1）混合血瓊脂培養(yǎng)法：拭子在選擇增菌培養(yǎng)基（GBS增菌肉湯）增菌后轉(zhuǎn)種到血平板上，在37℃有氧條件下培養(yǎng)18-24小時(shí)，根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)和溶血特性，及革蘭氏染色、Camp試驗(yàn)及全自動(dòng)微生物分析儀鑒定菌種。

（2）哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)法：在35℃、5%CO2條件下避光孵育18-24小時(shí)，對(duì)中小灰白，有β溶血，用革蘭氏染色和觸酶試驗(yàn)篩選，用全自動(dòng)微生物分析儀鑒定菌種。

（3）膠乳凝集法：使用吸附了抗GBS莢膜多糖的抗體的膠乳混懸液與檢測(cè)物中的GBS莢膜多糖抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物的檢測(cè)方法。

（4）免疫層析法：利用針對(duì)GBS的特異性單克隆抗體-標(biāo)記物和固相化多克隆抗體來(lái)檢測(cè)標(biāo)本中的GBS。

（5）熒光PCR檢測(cè)法：按試劑盒規(guī)定提取拭子中的細(xì)菌DNA，在稀釋50倍后制成PCR檢測(cè)模板進(jìn)行測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析采用t檢驗(yàn)，用計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，用%表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 五組檢測(cè)結(jié)果對(duì)比表

2.1 兩種細(xì)菌培養(yǎng)法陽(yáng)性檢出率比較

200例標(biāo)本增菌后轉(zhuǎn)種血瓊脂平板和哥倫比亞瓊脂平板培養(yǎng)后的檢出率分別為：4.5%（9/200）和5.0%（10/200），二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 兩種免疫學(xué)檢查法陽(yáng)性檢出率比較

膠乳凝集法和免疫層析法檢出率分別為：5.0%（10/200）和5.5%（11/200），二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 PCR與細(xì)菌培養(yǎng)法、免疫學(xué)檢查法比較

PCR檢測(cè)陽(yáng)性15例，陽(yáng)性檢出率為7.5%，與兩種細(xì)菌培養(yǎng)法、兩種免疫學(xué)檢查法陽(yáng)性檢出率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 結(jié)論

B族鏈球菌寄居腸道和直腸，一般正常健康人群感染后并不致病，是條件致病菌。而孕婦作為特殊人群感染后會(huì)導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局，其中40%-70%可在分娩中傳遞給新生兒[2-3]，導(dǎo)致敗血癥。由于產(chǎn)婦B族鏈球菌感染時(shí)，臨床癥狀不夠明顯，從而易被忽視，因此產(chǎn)前孕婦進(jìn)行B族鏈球菌的檢測(cè)是十分重要，檢測(cè)陽(yáng)性者可通過(guò)藥物治療，改善妊娠結(jié)局，使新生兒及孕產(chǎn)婦的健康得以保障[4-6]。

細(xì)菌培養(yǎng)法陰性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確度較高，是國(guó)內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院采用的首選檢測(cè)法，但細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率易受外界條件影響，例如：臨床檢測(cè)準(zhǔn)確、快速的要求。免疫學(xué)方法靈敏度高于細(xì)菌培養(yǎng)法，簡(jiǎn)單實(shí)用且成本相對(duì)較低，是一種快速定性試驗(yàn)，更適用于社區(qū)醫(yī)院快速檢測(cè)。熒光PCR技術(shù)是通過(guò)體外擴(kuò)增獲得特定的DNA片段，其優(yōu)點(diǎn)快速、靈敏、特異性準(zhǔn)確性高，并且在檢測(cè)過(guò)程中可進(jìn)行全程監(jiān)控[7-9]，具有更高的臨床實(shí)用性和優(yōu)越性。本次研究顯示：對(duì)200例孕婦B族鏈球菌檢測(cè)，PCR準(zhǔn)確率為100%（15/15），比細(xì)菌培養(yǎng)法和免疫檢測(cè)法有明顯的優(yōu)勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）[10]。

綜上所述，熒光PCR法檢測(cè)孕婦B族鏈球菌具有靈敏、準(zhǔn)確、快速、陽(yáng)性檢出率高的特點(diǎn)，為更快速、準(zhǔn)確的鑒定B族鏈球菌，合理應(yīng)用抗菌藥物提供可靠的診斷依據(jù)。