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    急性冠狀動脈綜合征患者血清miR-27a、miR-34a表達(dá)及其臨床意義

    2019-08-27 02:37:58夏云峰
    醫(yī)學(xué)綜述 2019年15期
    關(guān)鍵詞:受試者膽固醇程度

    王 磊,夏云峰,李 良,王 晨

    (解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心干一科,北京 100048)

    急性冠狀動脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)是指冠狀動脈不穩(wěn)定斑塊破裂并形成血栓引起心肌急性缺血的臨床綜合征,可增加心血管疾病患者死亡率,因而早期診斷ACS對提高治療效果具有重要意義[1]。ACS發(fā)生過程涉及炎癥反應(yīng)與細(xì)胞凋亡過程,其中炎癥反應(yīng)可促進(jìn)動脈管壁粥樣硬化進(jìn)展,進(jìn)而引起心肌供血不足,研究顯示冠狀動脈粥樣硬化相關(guān)炎癥因子可用于診斷ACS并取得一定效果[2]。微RNAs(microRNAs,miRNAs)是一種內(nèi)源性非編碼RNA,可作為診斷多種心血管疾病的重要標(biāo)志物[3]。研究表明心肌細(xì)胞中miR-27a呈高表達(dá)并可影響細(xì)胞增殖及凋亡過程[4]。miR-34a在急性心肌梗死患者中表達(dá)水平明顯升高,并與冠狀動脈粥樣硬化引起的心肌缺血及心臟重構(gòu)過程密切相關(guān)[5]。關(guān)于miR-27a、miR-34a表達(dá)與ACS發(fā)生和發(fā)展過程的研究較少見報道,本研究主要探討ACS患者血清miR-27a、miR-34a表達(dá)及其與冠狀動脈病變程度的關(guān)系,為進(jìn)一步揭示ACS發(fā)病機(jī)制及提高診療效果提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 選取2016年7月至2018年2月于解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心進(jìn)行冠狀動脈造影術(shù)的患者為研究對象,其中ACS患者86例為ACS組,所有患者均經(jīng)冠狀動脈造影檢查證實(shí)且符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],均行SYNTAX評分,并根據(jù)冠狀動脈病變程度分為輕度病變組(22例)、中度病變組(27例)、重度病變組(37例)[7]。穩(wěn)定型心絞痛(stable angina petoris,SAP)患者70例為SAP組,所有患者均經(jīng)冠狀動脈造影檢查證實(shí)且符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。同時選取經(jīng)冠狀動脈造影檢查正常的72名志愿者為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):受試者均符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);受試者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):肝腎功能嚴(yán)重?fù)p傷者;慢性感染性或風(fēng)濕性疾病者;患有自身免疫性疾病者;急性心力衰竭患者;合并其他惡性腫瘤患者;心腦血管疾病患者;合并造血系統(tǒng)疾病患者。

    1.2方法

    1.2.1標(biāo)本采集 所有受試者入組后均于次日凌晨分別抽取空腹靜脈血2 mL,3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min(離心半徑10 cm)后吸取血清,置于-20 ℃冰箱保存待測。

    1.2.2實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測血清miR-27a與miR-34a表達(dá)水平 按照Trizol試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn),編號:ALH011)說明書提取總RNA,將RNA反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA,采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測血清 miR-27a與miR-34a表達(dá)水平。反應(yīng)體系為20 L:SYBR Green Ⅰ qPCR Master Mix 10 L,上下游引物各0.5 L,互補(bǔ)DNA模板2 L,雙蒸水6.6 L,ROX Reference Dye(50×)0.4 L,其中引物合成見表1。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 30 s;95 ℃ 10 s;60 ℃ 30 s 72 ℃ 30 s,共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后收集數(shù)據(jù),并對所得數(shù)據(jù)Ct值進(jìn)行分析,miR-27a、miR-34a均以U6為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt算法計算miR-27a與miR-34a的相對表達(dá)量。

    表1 實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)引物序列

    1.3觀察指標(biāo) 所有受試者均檢測收縮壓、舒張壓水平,并統(tǒng)計患高血壓者、有吸煙史者,采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測三酰甘油(triacylglycerol,TG)與總膽固醇(total cholesterol,TC)水平,直接法檢測高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)與低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平,試劑盒均購自上海盈公生物技術(shù)有限公司。采用葡萄糖氧化酶法檢測所有受試者空腹血糖(fasting blood glucose,F(xiàn)BG),應(yīng)用HF-240全自動血糖分析儀(泰安市泰諾科貿(mào)有限公司)檢測糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin,HBA1c),采用增強(qiáng)免疫比濁法檢測高敏C反應(yīng)蛋白(high sensitive C-reactive protein,hs-CRP)水平。

    2 結(jié) 果

    2.1各組一般資料比較 ACS組與SAP組患者TC、LDL-C、TG、FBG、HBA1c及hs-CRP水平顯著高于對照組(P<0.05),且ACS組顯著高于SAP組(P<0.05),而HDL-C顯著低于對照組(P<0.05),三組受試者性別、年齡、高血壓、吸煙史、收縮壓、舒張壓比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    2.2各組血清miR-27a、miR-34a表達(dá)水平比較 各組血清miR-27a、miR-34a表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。ACS組和SAP組患者血清miR-27a、miR-34a表達(dá)水平顯著高于對照組(P<0.05),且ACS組顯著高于SAP組(P<0.05),見表3。

    2.3miR-27a、miR-34a與ACS患者臨床指標(biāo)的關(guān)系 Pearson法分析結(jié)果顯示miR-27a與患者血清TC、LDL-C、HBA1c、hs-CRP均呈正相關(guān)(P<0.05),而與TG、FBG無明顯相關(guān)性(P>0.05);miR-34a與TC、HBA1c、hs-CRP呈正相關(guān)(P<0.05),而與LDL-C、TG、FBG無明顯相關(guān)性(P>0.05);miR-27a、miR-34a均與HDL-C呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),見表4。

    2.4ACS患者冠狀動脈病變程度與miR-27a、miR-34a 表達(dá)的關(guān)系 不同病變程度組miR-27a、miR-34a比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。重度病變組與中度病變組ACS患者血清miR-27a、miR-34a 表達(dá)水平均顯著高于輕度病變組(P<0.05),且重度病變組顯著高于中度病變組(P<0.05),見表5。

    表2 各組受試者一般資料比較

    對照組:健康體檢者;SAP:穩(wěn)定型心絞痛;ACS:急性冠狀動脈綜合征;TC:總膽固醇;LDL-C:低密度脂蛋白膽固醇;HDL-C:高密度脂蛋白膽固醇;TG:三酰甘油;FBG:空腹血糖;HBA1c:糖化血紅蛋白;hs-CRP:高敏C反應(yīng)蛋白;△為χ2值,余為F值;a與對照組比較,P<0.05;b與SAP組比較,P<0.05

    組別例數(shù)miR-27amiR-34a對照組721.12±0.371.05±0.15SAP組701.73±0.28a1.52±0.25aACS組862.21±0.72ab2.01±0.67abF值88.51892.548P值<0.001<0.001

    SAP:穩(wěn)定型心絞痛;ACS:急性冠狀動脈綜合征;對照組:健康體檢者;a與對照組比較,P<0.05;b與SAP組比較,P<0.05

    表4 miR-27a、miR-34a與ACS患者臨床指標(biāo)的關(guān)系

    ACS:急性冠狀動脈綜合征;TC:總膽固醇;LDL-C:低密度脂蛋白膽固醇;HDL-C:高密度脂蛋白膽固醇;TG:三酰甘油;FBG:空腹血糖;HBA1c:糖化血紅蛋白;hs-CRP:高敏C反應(yīng)蛋白

    組別例數(shù)miR-27amiR-34a輕度病變組221.22±0.201.35±0.23中度病變組271.85±0.62a1.61±0.27b重度病變組372.23±0.37ab2.20±0.37abF值37.05459.358P值<0.001<0.001

    ACS:急性冠狀動脈綜合征;a與輕度病變組比較,P<0.05;b與中度病變組比較,P<0.05

    2.5影響ACS患者冠狀動脈病變程度的有序Logistic回歸分析 將影響ACS患者冠狀動脈病變程度的相關(guān)因素進(jìn)行有序Logistic回歸分析,多因素分析結(jié)果顯示,血清miR-27a、miR-34a表達(dá)水平均為ACS患者冠狀脈病變的影響因素,見表6、表7。

    ACS:急性冠狀動脈綜合征;TC:總膽固醇;HBA1c:糖化血紅蛋白;hs-CRP:高敏C反應(yīng)蛋白

    表7 影響ACS患者冠狀動脈病變程度的 有序Logistic回歸分析

    ACS:急性冠狀動脈綜合征;TC:總膽固醇;HBA1c:糖化血紅蛋白;hs-CRP:高敏C反應(yīng)蛋白

    3 討 論

    ACS主要以冠狀動脈斑塊不穩(wěn)定、易破裂、血小板凝聚為病理基礎(chǔ),研究表明細(xì)胞凋亡與易損斑塊穩(wěn)定性及ACS發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)[9]。miRNA 可通過調(diào)控下游基因表達(dá)進(jìn)而參與多種生理病理過程,研究表明部分miRNA可參與心肌細(xì)胞生長、重構(gòu)及凋亡過程[10]。因此,本研究檢測ACS患者血清miR-27a、miR-34a表達(dá)并分析其與冠狀動脈病變的關(guān)系,旨在為監(jiān)測病情進(jìn)展及治療方案提供新思路。

    miR-27a可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期等過程而發(fā)揮癌基因作用導(dǎo)致病情惡化,研究表明心肌細(xì)胞中miR-27a呈高表達(dá)并參與心力衰竭、心肌肥厚等多種心肌疾病發(fā)生及發(fā)展過程[11-12]。研究顯示miR-27a可通過抑制凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)提高caspase-3等促凋亡因子表達(dá)水平進(jìn)而參與心肌細(xì)胞凋亡過程[13-14]。本研究結(jié)果顯示ACS組和SAP組患者血清miR-27a表達(dá)水平顯著高于對照組,且ACS組顯著高于SAP組,說明ACS患者血清miR-27a表達(dá)水平明顯升高,并與ACS疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。分析原因可能為miR-27a通過提高促凋亡因子表達(dá)水平,并降低抗凋亡因子表達(dá)進(jìn)而參與ACS發(fā)生過程。ACS與炎癥反應(yīng)密切相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)miR-34a可通過調(diào)控冠狀動脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)過程而促進(jìn)冠心病的發(fā)生[15]。研究表明miR-34a可調(diào)控血小板形成過程,而血小板激活可導(dǎo)致血栓形成引發(fā)冠心病[16-17]。近年來研究發(fā)現(xiàn),miR-34a表達(dá)水平降低可促使靶基因Bcl-2表達(dá)水平升高,進(jìn)而抑制動脈粥樣硬化過程中的細(xì)胞凋亡[18]。本研究結(jié)果顯示,ACS組和SAP組患者血清miR-34a表達(dá)水平顯著高于對照組,且ACS組顯著高于SAP組,說明ACS患者血清miR-34a表達(dá)水平明顯升高并可參與ACS發(fā)生過程。推測ACS患者血清miR-27a 表達(dá)水平升高可抑制Bcl-2表達(dá)并提高miR-34a表達(dá)水平進(jìn)而參與ACS發(fā)生過程。同時本研究結(jié)果顯示miR-27a與miR-34a表達(dá)呈正相關(guān)且均與HDL-C呈負(fù)相關(guān),miR-27a與TC、LDL-C、HBA1c、hs-CRP呈正相關(guān),miR-34a與TC、HBA1c、hs-CRP 呈正相關(guān),說明miR-27a、miR-34a 與ACS患者脂質(zhì)代謝及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。提示miR-27a與miR-34a發(fā)揮協(xié)同作用并可通過參與細(xì)胞凋亡調(diào)控過程促使動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定進(jìn)而促進(jìn)ACS發(fā)生及發(fā)展過程。

    ACS患者冠狀動脈病變嚴(yán)重程度不同,SYNTAX 積分可有效評價冠狀動脈病變嚴(yán)重程度,研究顯示SYNTAX積分增加表示患者血運(yùn)重建與不良心臟事件發(fā)生率增加[19-20]。本研究對所有ACS患者均進(jìn)行SYNTAX評分并劃分不同等級,將ACS患者分為輕度病變組、中度病變組、重度病變組,并檢測不同病變程度患者血清miR-27a與miR-34a 表達(dá)水平,結(jié)果顯示重度病變組和中度病變組ACS患者血清miR-27a、miR-34a表達(dá)水平均顯著高于輕度病變組,且重度病變組高于中度病變組,說明隨著ACS患者冠狀動脈病變嚴(yán)重程度加劇血清miR-27a、miR-34a表達(dá)水平顯著升高,提示miR-27a、miR-34a可有效評價ACS患者冠狀動脈病變程度。同時本研究進(jìn)一步分析影響ACS患者冠狀動脈病變的相關(guān)因素,Logistic回歸分析顯示血清miR-27a、miR-34a 均為ACS患者冠狀脈病變嚴(yán)重程度的影響因素。本研究結(jié)果揭示miR-27a與miR-34a 在ACS發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮調(diào)控作用,并可作為評估ACS患者冠狀動脈病變程度的重要指標(biāo)。但本研究僅從miR-27a與miR-34a表達(dá)水平方面初步分析其與ACS發(fā)生及冠狀動脈病變程度的關(guān)系,具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

    綜上所述,ACS患者血清miR-27a與miR-34a表達(dá)水平均顯著升高并與冠狀動脈病變程度有關(guān),有助于實(shí)時監(jiān)測ACS患者病情進(jìn)展。

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