高危型HPV感染與宮頸癌前病變及宮頸癌的關(guān)系△

林琳，傅亞均，林安平#

1重慶兩江新區(qū)第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，重慶401121

2重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦科，重慶400010

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，是一個(gè)主要的公共衛(wèi)生問題，尤其是發(fā)展中國(guó)家的年輕婦女，宮頸癌可由宮頸癌前病變進(jìn)展而來(lái)，嚴(yán)重影響女性身體健康[1]。研究顯示，全球?qū)m頸癌發(fā)病率在女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌，排名第二，每年新發(fā)病例高達(dá)50萬(wàn)[2]，中國(guó)宮頸癌發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居首位，其中，浸潤(rùn)性宮頸癌好發(fā)于45～55歲，宮頸原位癌好發(fā)于30～35歲[3]。有學(xué)者表示，高危型人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素[4]。HPV的類型、感染數(shù)量均與宮頸癌前病變和宮頸癌密切相關(guān)。HPV是一種乳頭瘤空泡病毒A屬，屬于多空病毒科，是一種球形DNA病毒，黏膜鱗狀上皮和人類表皮是易感區(qū)域。研究顯示，HPV對(duì)其他動(dòng)物無(wú)致病性，只感染人類，迄今為止已分離出130多種類型，是宮頸癌前病變和宮頸癌的主要致病因素[5-6]。不同HPV分型的致癌危險(xiǎn)性或致病力大小有一定差異，且不同HPV亞型分布特征不同。因此，本研究為探討高危型HPV感染與宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年10月至2018年6月重慶兩江新區(qū)第一人民醫(yī)院及重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院收治的宮頸癌及宮頸癌前病變患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合宮頸癌前病變或?qū)m頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7-8]；既往未服用免疫抑制劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他婦科惡性腫瘤及免疫性疾?。虎诩韧邮苓^宮頸手術(shù)；③哺乳期、妊娠期婦女。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入200例宮頸癌及宮頸癌前病變患者，其中宮頸癌患者51例（作為宮頸癌組），年齡25～51歲，平均年齡為（38.94±4.32）歲；組織學(xué)類型：鱗狀細(xì)胞癌45例，腺癌6例；宮頸癌前病變患者149例（作為癌前病變組），年齡25～50歲，平均年齡為（38.35±4.27）歲。兩組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)方法

1.2.1 標(biāo)本采集患者取截石位，先置入陰道鏡，然后使用無(wú)菌醫(yī)用棉球在陰道鏡下擦除宮頸表面黏液，放入細(xì)胞刷，深度為1.0～1.5 cm，輕輕旋轉(zhuǎn)8～10圈后，將細(xì)胞刷放置于液基細(xì)胞洗脫液中充分震動(dòng)，將液體離心取脫落細(xì)胞，制成細(xì)胞涂片備用。此外，使用活檢鉗取適量宮頸組織，于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 高危型HPV檢測(cè)[9]標(biāo)本采集完成后，使用Step Oue Plus熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀對(duì)患者進(jìn)行高危型HPV檢測(cè)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。

1.2.3 高危型HPV相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)[10]取液氮保存的宮頸組織50 mg，通過反轉(zhuǎn)錄試劑盒與信使RNA（messenger RNA，mRNA）抽提合成互補(bǔ)DNA（complementary DNA，cDNA）第一鏈，再通過PCR擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行熒光定量檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.2.4 高危型HPV病毒載量檢測(cè)[11]首先檢測(cè)系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過同一儀器對(duì)每例標(biāo)本進(jìn)行計(jì)算，每個(gè)HPV陽(yáng)性標(biāo)本會(huì)生成一個(gè)定量值，再通過每例宮頸組織標(biāo)本的β球蛋白濃度進(jìn)行計(jì)算，從而確定病毒載量。

1.2.5 高危型HPV亞型檢測(cè)[12]取宮頸組織抽提基因組RNA后，加熱分解為單鏈核苷酸，采用RNA探針與DNA單鏈的結(jié)合，生成RNA-DNA雜交體，通過免疫吸附柱時(shí)，RNA-DNA雜交體被特異性抗體固定于微孔壁或試管壁上，將RNA-DNA雜交體與第二抗體結(jié)合，使信號(hào)放大，采用堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光，從而判斷以下6種高危型HPV亞型：HPV16、18、31、45、58、52。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV檢出情況比較

200例患者中共檢出高危型HPV感染患者164例，其中癌前病變組檢出高危型HPV感染患者116例，檢出率為77.85%（116/149），宮頸癌組檢出高危型HPV感染患者48例，檢出率94.12%（48/51），癌前病變組患者高危型HPV感染檢出率明顯低于宮頸癌組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.810，P＜0.01）。癌前病變組患者高危型HPV相對(duì)表達(dá)量為（210.47±37.92）ng/L，明顯低于宮頸癌組患者的（325.92±61.46）ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.799，P＜0.01）。癌前病變組患者高危型HPV的病毒載量為（624.82±121.54）RLU/CO，明顯低于宮頸癌組患者的（913.87±164.83）RLU/CO，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.316，P＜0.01）。

2.2 高危型HPV亞型分布情況

高危型HPV亞型檢測(cè)結(jié)果顯示，HPV16型57例，HPV18型34例，HPV31型23例，HPV45型28例，HPV58型16例，HPV52型6例。所有高危型HPV感染患者中，亞型分布以HPV16、HPV18為主，分別占34.75%（57/164）、20.73%（34/164）。癌前病變組患者不同高危型HPV亞型陽(yáng)性率均明顯低于宮頸癌組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者高危型HPV亞型分布情況比較

3 討論

宮頸癌是臨床常見的婦科惡性腫瘤，起源于子宮頸上皮內(nèi)瘤變，多發(fā)于中年女性。隨著人們生活習(xí)慣的改變，宮頸癌發(fā)病率明顯升高，且越來(lái)越趨于年輕化。近年來(lái)，女性首次性生活年齡不斷減小，多數(shù)年輕女性生殖功能尚未完全發(fā)育，首次性生活年齡過小、多次流產(chǎn)或性生活過于頻繁等因素均可能損傷宮頸，從而提高宮頸感染的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致宮頸炎，甚至引發(fā)宮頸癌。宮頸癌患者分期不同，其預(yù)后也有顯著差異。宮頸癌前病變治愈率較高，其進(jìn)展為宮頸癌的時(shí)間較長(zhǎng)，而早期宮頸癌患者預(yù)后較好，5年生存率較高，若治療不及時(shí)，宮頸癌進(jìn)展至晚期后，患者的預(yù)后較差，遠(yuǎn)期生存質(zhì)量較低[13]。因此，早診斷、早治療是預(yù)防或治療宮頸癌的有效手段。

研究顯示，HPV感染是宮頸癌前病變和宮頸癌的致病因素[14]，而HPV感染特別是高危型HPV持續(xù)感染極易引發(fā)宮頸癌前病變或?qū)m頸癌。HPV感染的主要傳播方式為性傳播，女性HPV的感染率高于男性，在有性生活經(jīng)歷的女性中，80%可能發(fā)生HPV感染，其中大部分感染者無(wú)臨床癥狀，可在10個(gè)月左右自然清除，但約10%患者可能發(fā)生HPV持續(xù)感染，從而引發(fā)宮頸癌前病變及宮頸癌[15]。研究顯示，高危型HPV感染是宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必需條件[16]，因此，分析HPV感染在宮頸癌前病變和宮頸癌中的分布情況，可為HPV感染的防治提供依據(jù)，對(duì)宮頸癌患者治療過程中的隨訪及預(yù)后工作也具有重要的意義。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌前病變患者高危型HPV檢出率為77.85%，明顯低于宮頸癌患者的94.12%，HPV的相對(duì)表達(dá)量和病毒載量也均明顯低于宮頸癌患者。這可能是因?yàn)榛颊咴诟腥綡PV后，病毒DNA可與宿主細(xì)胞DNA結(jié)合，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)固，從而抑制抑癌基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生，與譚秋梅等[17]的研究結(jié)果一致。

HPV感染可根據(jù)HPV亞型致癌危險(xiǎn)性大小或致病力大小的不同，分為低危型和高危型兩種類型，其中高危型HPV亞型主要包含HPV16、18、31、33、45、52和58等[18]。研究證實(shí)，高危型HPV感染是發(fā)生宮頸癌前病變及宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素[19]。本研究結(jié)果顯示，高危型HPV亞型以HPV16、HPV18為主，分別占34.75%、20.73%，將兩組患者不同亞型陽(yáng)性率進(jìn)行對(duì)比，宮癌前病變組患者不同高危型HPV亞型陽(yáng)性率均明顯低于宮頸癌組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明宮頸癌患者高危型HPV感染發(fā)生率明顯更高，進(jìn)一步證實(shí)高危型HPV感染是發(fā)生宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素，與陽(yáng)宇[20]的研究結(jié)果一致。因此，早期檢測(cè)HPV感染情況對(duì)預(yù)防宮頸癌具有重要意義。

綜上所述，宮頸癌前病變及宮頸癌與高危型HPV感染密切相關(guān)，高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌前病變及宮頸癌主要致病因素，因此，早期檢測(cè)HPV感染情況對(duì)預(yù)防宮頸癌前病變及宮頸癌具有重要意義。