STAT 3、versican在膽囊癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系

胡晟，劉永國，陳翔

重慶市第四人民醫(yī)院肝膽外科，重慶400014

膽囊癌患者的預(yù)后較差，且生活質(zhì)量明顯下降[1-2]。在對膽囊癌病情進(jìn)展的內(nèi)在機(jī)理進(jìn)行研究的過程中發(fā)現(xiàn)，腫瘤調(diào)控蛋白的改變在膽囊癌病情進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白和轉(zhuǎn)錄激活物3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表達(dá)上調(diào)，能夠通過提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)腫瘤信號通路的激活程度，提高腫瘤基因的轉(zhuǎn)錄激活程度，進(jìn)而促進(jìn)膽囊上皮細(xì)胞的早期異常分裂[3]。多能蛋白聚糖（versican）的表達(dá)，能夠通過提高膽囊癌細(xì)胞對鄰近間質(zhì)組織成分的黏附和浸潤能力，促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移[4]。本研究對膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行分析，并探討其與患者臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2017年7月重慶市第四人民醫(yī)院收治的膽囊癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合人民衛(wèi)生出版社《外科學(xué)》第8版中膽囊癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查確診為膽囊癌；③年齡≤79歲；④TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡性腫瘤；②獲取標(biāo)本前，患者具有放化療史。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入膽囊癌患者58例作為膽囊癌組。另外，選取同期因膽囊息肉于重慶市第四人民醫(yī)院行手術(shù)切除的膽囊息肉患者80例作為膽囊息肉組，所有患者均符合人民衛(wèi)生出版社《外科學(xué)》第8版中膽囊息肉的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。膽囊癌組患者中，男28例，女30例；年齡47～76歲，平均（58.6±8.0）歲；組織學(xué)分化程度：高分化16例，中分化23例，低分化19例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例；TNM分期：I期14例，Ⅱ期23例，Ⅲ期21例。膽囊息肉組患者中，男40例，女 40例；年齡 43～79歲，平均（59.2±13.0）歲。收集膽囊癌組患者的膽囊癌組織標(biāo)本進(jìn)行研究，并選取膽囊息肉組患者的膽囊息肉組織標(biāo)本作為對照。

1.2 檢測方法

采用免疫組化染色法檢測膽囊癌組織和膽囊息肉組織中STAT3、versican蛋白的表達(dá)。采用二甲苯將組織石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，5%雙氧水常溫孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；5%山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗（購自英國Abcam公司，濃度1∶500），4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；滴加生物素標(biāo)記的二抗（購自北京康泰生物，濃度1∶1000），37℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；滴加第二代辣根過氧化物酶標(biāo)記的工作液體，37℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色后采用乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化染色評分標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、黃色、棕黃色、褐色或黑色顆粒為STAT3蛋白陽性表達(dá)，以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色、橙色、棕色或褐色顆粒為versican蛋白陽性表達(dá)。根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評分：0分，未染色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，褐色、黑色。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評分：1分，陽性細(xì)胞所占比例≤10%；2分，陽性細(xì)胞所占比例為11%～50%；3分，陽性細(xì)胞所占比例為51%～75%；4分，陽性細(xì)胞所占比例≥76%。將著色程度與陽性細(xì)胞所占比例評分相乘，最終得分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 STAT 3蛋白、versican蛋白表達(dá)情況的比較

膽囊癌組織中STAT3蛋白、versican蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于膽囊息肉組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同組織中STAT 3蛋白、Versican蛋白陽性表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 膽囊癌組織中STAT 3蛋白、versican蛋白表達(dá)與膽囊癌患者臨床特征的關(guān)系

TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.100、4.592，P＜0.05）；不同分化程度膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。TNM分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膽囊癌患者膽囊癌組織中versican蛋白的陽性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.196、5.100、7.067，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT 3蛋白、versican蛋白的陽性表達(dá)情況（ n=58）

3 討論

膽道系統(tǒng)基礎(chǔ)性疾病、膽囊息肉或有膽囊癌家族史等因素，均能夠促進(jìn)膽囊癌的發(fā)生[6]。已有研究顯示，膽囊癌患者的5年生存率不足40%，膽囊癌患者接受綜合性治療方案治療后，總體生存時間不足38個月[7-9]。目前，臨床仍缺乏對膽囊癌患者病情評估的腫瘤相關(guān)指標(biāo)。本研究通過對膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行分析，旨在揭示膽囊癌疾病進(jìn)展機(jī)制的同時，為臨床上膽囊癌的病情評估提供新的參考指標(biāo)。

STAT3是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)因子，其表達(dá)水平升高時能夠通過激活下游絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子（signal transducer and activator of tranions，STAT）信號通路，提高腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游的基因激活程度[10]。已有研究表明，STAT3能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞紡錘體的異常分裂，增加腫瘤基因錯配修復(fù)的風(fēng)險[11]。versican是腫瘤細(xì)胞間糖蛋白黏附因子，能夠通過提高腫瘤細(xì)胞的黏附和浸潤能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，從而為腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散提供前提。相關(guān)研究對STAT3表達(dá)與膽囊癌的關(guān)系進(jìn)行探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比于膽囊結(jié)石良性組織，膽囊癌病灶組織中STAT3蛋白表達(dá)水平明顯升高，但缺乏對versican表達(dá)的分析研究[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，膽囊癌組織中STAT3蛋白、versican蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于膽囊息肉組織（P＜0.01），提示STAT3、versican蛋白可能與膽囊癌的發(fā)生有關(guān)。李福利等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在膽囊癌患者中，versican的陽性表達(dá)率明顯升高，相比于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，在發(fā)生明顯腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，versican蛋白的陽性表達(dá)率可進(jìn)一步上升。本研究在探討STAT3、versican蛋白表達(dá)與膽囊癌患者臨床特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.05），提示STAT3蛋白表達(dá)能夠影響到膽囊癌患者的病情進(jìn)展。但本研究并未發(fā)現(xiàn)不同分化程度膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3的表達(dá)差異。本研究還發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移膽囊癌患者膽囊癌組織中versican蛋白的陽性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.05），提示versican的表達(dá)與膽囊癌患者病情進(jìn)展同樣密切相關(guān)，分析其原因可能與以下兩點有關(guān)[15-16]：①STAT3表達(dá)水平增高，能夠影響到腫瘤細(xì)胞基因錯配修復(fù)能力，導(dǎo)致癌基因的異常激活；②versican水平增高，能夠提高腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特征的惡化程度，加劇腫瘤細(xì)胞浸潤能力的改變。因此，臨床上可以通過檢測STAT3、versican等指標(biāo)，對膽囊癌患者的臨床病情進(jìn)行評估。

綜上所述，膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的陽性表達(dá)率均明顯升高，而且STAT3、versican蛋白的表達(dá)均與膽囊癌患者的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。希望后續(xù)研究能夠繼續(xù)深入探討STAT3、versican蛋白表達(dá)與膽囊癌患者臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。