血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17的表達(dá)情況及與胃癌患者疾病特征的關(guān)系

楊光華，高冬冬

駐馬店市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南駐馬店463000

胃癌是全球第4大最常見的惡性腫瘤，病死率居全球第7位[1-2]。早期根治性手術(shù)治療可延長胃癌患者總生存期，臨床療效較好。血清腫瘤標(biāo)志物可為早期診斷胃癌提供參考，提高早期胃癌的臨床療效[3]。Dickkopf相關(guān)蛋白1（Dickkopf-related protein 1，DKK1）是WNT信號(hào)通路的重要調(diào)控因子，可增加胃癌上皮細(xì)胞DNA的突變風(fēng)險(xiǎn)，抑制腫瘤細(xì)胞分化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在胃組織中浸潤[3]；糖類抗原 72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA72-4）是腫瘤細(xì)胞持續(xù)性擴(kuò)增過程中釋放的糖蛋白，可影響腫瘤細(xì)胞的自我擴(kuò)增能力，并對(duì)其擴(kuò)增速度進(jìn)行評(píng)估[4]；促胃液素-17（gastrin-17，GAS-17）是胃底部腺體細(xì)胞分泌的胃腸道激素，胃黏膜上皮細(xì)胞異常病變和腺體細(xì)胞功能異?？梢悦黠@促進(jìn)GAS-17的釋放[5]。本研究旨在探討血清DKK1、CA72-4和GAS-17水平及與胃癌患者基線特征的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年1月至2018年1月駐馬店市中心醫(yī)院收治的90例胃癌患者和90例胃潰瘍患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡19～75歲；②胃癌的診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；③均經(jīng)胃鏡活檢確診為胃癌或胃潰瘍。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性胃癌；②合并急性胃穿孔、大出血；③合并全身感染性疾病、風(fēng)濕性疾病和結(jié)締組織疾??；④精神及認(rèn)知功能障礙；⑤既往接受過放化療和免疫治療。將90例胃癌患者作為胃癌組，90例胃潰瘍患者作為潰瘍組。胃癌組中男52例，女38例；年齡38～75歲，平均年齡為（56.8±12.8）歲；TNM分期：I期23例，Ⅱ期35例，Ⅲ期28例，Ⅳ期4例；分化程度：高分化22例，中分化47例，低分化21例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例。潰瘍組中男47例，女43例；年齡35～75歲，平均年齡為（54.2±14.0）歲。同期選取同期90例健康體檢者作為對(duì)照組，其中男44例，女46例；年齡33～75歲，平均年齡為（55.8±12.4）歲。3組受試者性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均對(duì)本研究均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集3組受試者靜脈血3 ml，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELI-SA）法檢測血清學(xué)指標(biāo)，包括DKK1、CA72-4和GAS-17水平。采用十字交叉法檢測抗原濃度，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）進(jìn)行稀釋，加入至96孔的酶標(biāo)板中，置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，輕輕叩擊酶標(biāo)板甩干。每孔中加入5%的脫脂牛奶200 μl，置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min。加入一抗（羊抗人DKK1、CA72-4和GAS-17抗體）5 ml，4℃放置過夜，PBS沖洗3次，每次5 min，加入二抗，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，每孔中加入100 μl的底物，顯色后用酶標(biāo)儀檢測450 nm處的光密度（optical density，OD）值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比較

3組受試者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。胃癌組患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均高于潰瘍組患者和對(duì)照組受試者，且潰瘍組患者血清CA72-4、GAS-17水平均高于對(duì)照組受試者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 3組受試者血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比較（± s）

表1 3組受試者血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比較（± s）

注：a與潰瘍組比較，P＜0.05；b與對(duì)照組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組（n=90）潰瘍組（n=90）胃癌組（n=90）F值P值DKK1（ng/ml）3.36±0.75 3.59±0.77 6.52±1.80a b 190.666 0.000 CA72-4（U/ml）3.20±1.85 10.33±6.95b 37.83±17.94a b 241.681 0.000 GAS-17（pg/ml）13.20±3.11 16.48±2.79b 19.83±3.20a b 107.134 0.000

2.2 不同基線特征胃癌患者血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比較

TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者的血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均明顯低于TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.309、4.902、10.439，P＜0.01）。分化程度為中高分化胃癌患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均明顯低于分化程度為低分化的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.354、7.607、15.143，P＜0.01）。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者血清DKK1、CA72-4水平均明顯低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.602、2.860，P＜0.01）；但有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者血清GAS-17水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同基線特征胃癌患者的血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平（ n=90）

3 討論

幽門螺桿菌感染可引起胃黏膜上皮細(xì)胞病變，增加胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，特別是合并慢性萎縮性胃炎或胃腸道上皮化生的患者[6-7]。早期診斷在胃癌的治療中具有重要作用[8-9]。尋找有價(jià)值的血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物，對(duì)探討胃癌的發(fā)病機(jī)制和胃癌的早期診斷有重要作用。

DKK1可激活WNT下游信號(hào)通路，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，降低腫瘤細(xì)胞間的黏附程度，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。研究顯示，DKK1可通過提高腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性，提高腫瘤細(xì)胞紡錘體的復(fù)制和分裂速度，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性自我擴(kuò)增[10]。在腫瘤細(xì)胞異常分裂或擴(kuò)增過程中，部分凋亡的腫瘤細(xì)胞膜碎片可明顯促進(jìn)CA72-4的釋放，使外周血CA72-4的水平升高[11]。研究發(fā)現(xiàn)，GAS-17在消化道腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，GAS-17的異常表達(dá)可影響胃黏膜病變細(xì)胞的增殖活性和腫瘤細(xì)胞核的轉(zhuǎn)錄活性[12]。

本研究檢測血清DKK1、CA72-4、GAS-17的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，胃癌組患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均高于潰瘍組患者和對(duì)照組受試者，且潰瘍組患者CA72-4、GAS-17水平均高于對(duì)照組受試者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平升高可能會(huì)促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞病變，這可能是因?yàn)镈KK1水平升高不僅可激活WNT信號(hào)通路，還可提高胃黏膜上皮細(xì)胞的浸潤能力和黏附能力，促進(jìn)胃黏膜上皮病變細(xì)胞對(duì)基底膜組織的浸潤[13]；CA72-4和GAS-17水平升高可導(dǎo)致細(xì)胞異常代謝，從而導(dǎo)致胃腸道激素分泌異常。謝海濤[14]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清CA72-4水平平均可升高30%，而合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或高腫瘤負(fù)荷的患者，CA72-4濃度可進(jìn)一步升高。本研究探討血清DKK1、CA72-4、GAS-17的水平與胃癌患者基線特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，除有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者的血清GAS-17水平無明顯差異外，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化胃癌患者的血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均明顯高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化的胃癌患者，表明上述指標(biāo)的水平變化均可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，這主要是因?yàn)镈KK1、CA72-4、GAS-17水平升高可提高胃黏膜上皮細(xì)胞的黏附和浸潤能力。

綜上所述，胃癌患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平較高，且可能與胃癌的臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。