HPLC法同時(shí)快速測(cè)定醬油中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜

廖敏，侯嬌艷，劉亞琴，張竹陽，萬鳳英

(德陽市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，四川 德陽 618000)

醬油是以大豆、面粉等糧食作物為主要原料的傳統(tǒng)調(diào)味品[1]。為了保持醬油的鮮度，延長(zhǎng)其保存期，常在醬油中添加苯甲酸鈉、山梨酸鉀等食品防腐劑[2], 但用量過多會(huì)對(duì)人體有一定的毒害作用。而安賽蜜是醬油中常用于改善口感的一種甜味劑。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜是目前我國(guó)食品中常用的幾種人工合成防腐劑和甜味劑。對(duì)于食品添加劑的用量，我國(guó)均有嚴(yán)格的規(guī)定。GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定醬油中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜的使用限量均為1.0 g/kg，而糖精鈉則不允許在醬油中添加使用。目前對(duì)醬油中防腐劑和甜味劑的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、離子色譜法[3]。其中，液相色譜法對(duì)樣品前處理有多種方法，比如加亞鐵氰化鉀-乙酸鋅沉淀劑、分散液液微萃取、固相萃取等。而本方法采用純水提取樣品，簡(jiǎn)化樣品前處理，加快了分析速度，操作簡(jiǎn)易，靈敏度高，回收率好，建立了簡(jiǎn)便、有效的測(cè)定方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑

苯甲酸質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL，山梨酸質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL，糖精鈉質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL，安賽蜜質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL：購(gòu)于中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；甲醇(色譜純)；乙酸銨(分析純)；實(shí)驗(yàn)室用水為超純水系統(tǒng)制備。

1.1.2 乙酸銨溶液

稱取1.54 g乙酸銨，加水溶解并定容至1000 mL。

1.1.3 儀器

高效液相色譜儀(配有島津LC-20AT泵、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-10Asvp柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器PDA)、超聲清洗儀。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液工作的配制

1.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用移液槍準(zhǔn)確量取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5 mL到50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。此溶液濃度為0.1 mg/mL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

臨用前用水將0.1 mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋，配成質(zhì)量濃度為0.01，0.025，0.05，0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相為0.02 mol/L乙酸銨-甲醇(體積比為95∶5)；流速為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；進(jìn)樣量為10 μL。

1.4 樣品處理

稱取大約2 g樣品(精確到0.0001 g)，置于50 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，濾液待上機(jī)測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

由二極管陣列檢測(cè)器獲得的光譜圖可知，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的最大吸收波長(zhǎng)在190～250 nm之間，綜合考慮4種化合物在紫外區(qū)的檢測(cè)靈敏度，本實(shí)驗(yàn)選擇230 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相和流速的選擇

依據(jù)國(guó)標(biāo)GB 5009.28—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》采用的流動(dòng)相為0.02 mol/L乙酸銨溶液-甲醇(體積比為95∶5)；流速為1.0 mL/min。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)此方法對(duì)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的分離效果很好，能實(shí)現(xiàn)基線分離，靈敏度高，方法簡(jiǎn)單，故采取此法。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg/mL)液相色譜Fig.1 Liquid chromatography of the mixed standard solution (0.1 mg/mL)

2.3 線性范圍和檢出限

按所選擇的色譜條件下對(duì)一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜測(cè)定，以各組分的質(zhì)量濃度和峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限見表1。

表1 線性關(guān)系和檢出限Table 1 Linear relations and detection limits

由表1可知，各組分的線性方程、相關(guān)系數(shù)良好。

2.4 方法的回收率和精密度

按1.4的方法制備加標(biāo)樣品，在線性范圍內(nèi)加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。每個(gè)樣品平行測(cè)定6次，計(jì)算4種添加劑的回收率和精密度，結(jié)果見表2。平均回收率在90%～104%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%，測(cè)定結(jié)果令人滿意。

表2 回收率和精密度(n=6)Table 2 Recovery rate and precision (n=6)

續(xù) 表

3 結(jié)論

食品添加劑作為一種非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，少量添加即可改善食品外觀、風(fēng)味和組織結(jié)構(gòu)[4]，但超量或違規(guī)使用添加劑的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。為了保證食品安全，國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直在進(jìn)行著不懈的探索[5]。目前，我國(guó)醬油每年生產(chǎn)量超過600萬噸，約占世界總產(chǎn)量的60%[6]。為確保其安全，需要建立高效、快捷的食品添加劑檢測(cè)方法。而本方法通過高效液相色譜同時(shí)測(cè)定醬油中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜，回收率在90%～104%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%，簡(jiǎn)化了樣品前處理，具有操作快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適合醬油中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的檢測(cè)。