丹參酮ⅡA 磺酸鈉對(duì)家兔心臟驟停復(fù)蘇后的影響

陳 芳， 楊 虹*， 成 靜， 高貽鈞， 盧 軍

（1. 武漢市第四醫(yī)院， 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛(ài)醫(yī)院急診科， 湖北 武漢430034； 2. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 湖北 武漢430000）

心臟驟停是世界范圍內(nèi)人類(lèi)主要死亡原因之一[1], 自從20 世紀(jì)60 年代以來(lái), 心肺復(fù)蘇術(shù)逐步得到推廣和普及,患者經(jīng)復(fù)蘇后自主循環(huán)恢復(fù)得到提高, 但存活率依然很低[2]。 心臟驟停后自主循環(huán)恢復(fù)主要的病理生理變化是缺血再灌注損傷, 造成全身炎癥反應(yīng)及凝血功能障礙, 進(jìn)一步形成多器官功能衰竭[3-5]。

丹參酮ⅡA磺酸鈉是由丹參酮ⅡA磺化而來(lái)的水溶性成分。 丹參酮ⅡA是丹參提取物中主要成分[6], 但其水溶性差, 而丹參酮ⅡA磺酸鈉因改變了其生物藥效, 被廣泛用于臨床治療冠心病, 具有廣泛的藥理作用, 如抗炎、 抗氧化應(yīng)激、 抗細(xì)胞凋亡、 抑制心肌細(xì)胞肥大、 保護(hù)心臟內(nèi)皮細(xì)胞等[7-12]。 也有被用于熱射病的研究, 并可在一定程度上減輕多器官損傷[13]。 因此, 本實(shí)驗(yàn)探討丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)家兔心臟驟停復(fù)蘇后的影響。

1 材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)健康家兔24 只, 性別不限, 體質(zhì)量3.0～3.5 kg, 購(gòu)于湖北逸摯誠(chéng)生物科技有限公司, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK （鄂） 2016-0088。 家兔置于溫度（25±1）℃、 相對(duì)濕度（50±10）%, 白天黑夜各12 h 的清潔級(jí)環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周, 自由進(jìn)食飲水。

1.2 試藥 丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液（上海第一生化藥業(yè)有限公司, 批號(hào)1704316）。 腫瘤壞死因子-α （TNF-α） （批號(hào)DY5670）、 白細(xì)胞介素-1β （IL-1β） （批號(hào)DY7464）、 白細(xì)胞介素-6 （IL-6） （批號(hào)DY7984） ELISA 檢測(cè)試劑盒（美國(guó)R＆D 公司）； 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE） （批號(hào)ELK3039）、 S-100B 蛋白（S-100B）（批號(hào)ELK5087） ELISA檢測(cè)試劑盒（武漢科鹿生物科技有限責(zé)任公司）。

1.3 儀器 DXC-800 全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）； 致顫儀及動(dòng)物胸外按壓設(shè)備（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)輔助研發(fā), 動(dòng)物胸外按壓設(shè)備申請(qǐng)專(zhuān)利號(hào)201820076129.4）；SAR-830A 小動(dòng)物呼吸機(jī)（美國(guó)CWE 公司）； mindray Bene-HeartD3 除顫儀監(jiān)護(hù)儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）； 一次性氣管插管導(dǎo)管及配套導(dǎo)絲（河南駝人醫(yī)療器械集團(tuán)有限公司）。

2 方法

2.1 前期準(zhǔn)備 家兔耳緣靜脈穿刺置入24G Y 型靜脈留置針, 置管成功后注射3%戊巴比妥（30 mg/kg） 麻醉, 必要時(shí)追加, 當(dāng)家兔角膜反射與疼痛反射消失, 呼吸、 心率平穩(wěn)時(shí), 視為麻醉成功, 耳緣靜脈留置針用肝素鹽水進(jìn)行封管, 用于給藥和生命體征維護(hù)。 然后, 將家兔固定進(jìn)行胸腹部備皮, 并接上監(jiān)護(hù)儀作常規(guī)Ⅱ?qū)?lián)心電監(jiān)測(cè), 同時(shí)監(jiān)測(cè)心率、 有創(chuàng)動(dòng)脈血壓、 呼吸。

2.2 氣管插管 家兔取仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)面, 頸部自然屈曲, 將粗細(xì)與氣管插管導(dǎo)管配套導(dǎo)絲置入2.5 號(hào)氣管插管導(dǎo)管后, 無(wú)菌石蠟油潤(rùn)滑導(dǎo)管并彎曲, 使其前端彎曲度與兔頸部屈曲角度類(lèi)似。 將氣管插管導(dǎo)管自家兔口角緩慢置入, 當(dāng)其到達(dá)甲狀軟骨上方時(shí)側(cè)耳感受導(dǎo)管氣流, 在最明顯部位取吸氣相輕輕插入導(dǎo)管, 導(dǎo)管遠(yuǎn)端到門(mén)齒的距離為11～12 cm。

2.3 有創(chuàng)動(dòng)脈血壓監(jiān)測(cè) 家兔耳中動(dòng)脈穿刺置入24G Y 型靜脈留置針, 連接三通開(kāi)關(guān), 一端連接含有肝素（5 IU/mL） 抗凝的生理鹽水輸液器, 防止血液凝固； 另一端經(jīng)換能器與心電監(jiān)護(hù)儀相連, 監(jiān)測(cè)血壓變化。

2.4 模型建立 將家兔置入2 個(gè)電極中, 1 個(gè)置入皮下（位于心搏最強(qiáng)點(diǎn)）, 另1 個(gè)置于食管內(nèi), 致顫儀持續(xù)交流電（10 V、 4 mA） 2 min 經(jīng)食管致顫, 成功標(biāo)準(zhǔn)為①電刺激后動(dòng)脈收縮壓逐漸下降至25 mmHg （1 mmHg= 0.133 kPa） 以下； ②血壓監(jiān)測(cè)的動(dòng)脈搏動(dòng)波形消失； ③停止電刺激后心電監(jiān)護(hù)示心電圖波形為室顫、 無(wú)脈性電活動(dòng)。 無(wú)處理心室顫動(dòng)5 min 后, 開(kāi)始應(yīng)用動(dòng)物胸外按壓設(shè)備進(jìn)行機(jī)械胸外按壓, 并同步機(jī)械通氣, 盡早給予雙向波經(jīng)胸體外除顫。 機(jī)械通氣接小型動(dòng)物呼吸機(jī), 初始參數(shù)為頻率45 次/min, 潮氣量10 mL/kg； 復(fù)蘇方式按壓部位為胸骨體正中, 頻率200 次/min, 按壓深度胸廓前后徑的1/3, 按壓-放松比1 ∶1, 開(kāi)始心肺復(fù)蘇時(shí)耳緣靜脈注射腎上腺素0.015 mg/kg, 必要時(shí)每間隔3 min 重復(fù)1 次, 除顫儀準(zhǔn)備完全后若為室顫, 則予非同步雙相波（10 J） 除顫, 若不能轉(zhuǎn)復(fù)為自主心律則再繼續(xù)按壓3 min 后再除顫（10 J）,直至自主循環(huán)恢復(fù), 當(dāng)恢復(fù)竇性心律, 平均動(dòng)脈血壓大于40 mmHg 并至少持續(xù)1 min 以上時(shí), 可視為復(fù)蘇成功； 經(jīng)上述程序搶救15 min 自主循環(huán)仍未能恢復(fù)者為復(fù)蘇失敗,移除出所在組別。 然后, 對(duì)自主循環(huán)恢復(fù)的家兔進(jìn)行心電、血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè), 自主呼吸微弱者進(jìn)行機(jī)械通氣, 恢復(fù)后拔除所有導(dǎo)管, 放回籠中飼養(yǎng)； 對(duì)于不能自主飲水、 進(jìn)食者, 在自主循環(huán)恢復(fù)后每12 h 經(jīng)耳緣靜脈緩慢補(bǔ)充5%葡萄糖氯化鈉溶液（20 mL/kg）, 觀(guān)察終點(diǎn)為72 h。

2.5 分組 將24 只家兔隨機(jī)分為以下2 組： ①心臟驟停復(fù)蘇組（12 只）, 家兔麻醉后進(jìn)行氣管插管、 心電監(jiān)護(hù)、有創(chuàng)血壓監(jiān)測(cè), 并作致顫及心肺復(fù)蘇建模, 成功后觀(guān)察至72 h； ②丹參酮ⅡA磺酸鈉組（12 只）, 家兔麻醉后進(jìn)行氣管插管、 心電監(jiān)護(hù)、 有創(chuàng)血壓監(jiān)測(cè), 并作致顫及心肺復(fù)蘇建模, 成功后立即耳緣靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉（40 mg/kg）, 觀(guān)察至72 h。

2.6 指標(biāo)檢測(cè) 于心臟驟停前及自主循環(huán)恢復(fù)后12、 24、72 h 采血, ELISA 法檢測(cè)血清TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 NSE、S-100B 水平, 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清Cr、 BUN、 ALT、AST、 CK-MB、 cTnI 水平。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 20.0 進(jìn)行處理, 數(shù)據(jù)以s） 表示, 組間比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析。 P ＜0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)TNF-α、 IL-1β、 IL-6 水平的影響 表1 顯示, 心臟驟停復(fù)蘇組自主循環(huán)恢復(fù)后12、 24、72 h IL-6、 TNF-α、 IL-1β 水平顯著高于心臟驟停前（P＜0.05）； 丹參酮ⅡA磺酸鈉組同一時(shí)間點(diǎn)三者水平顯著低于心臟驟停復(fù)蘇組（P＜0.05）。

表1 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對(duì)TNF-α、 IL-1β、 IL-6 水平的影響， n=12）

表1 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對(duì)TNF-α、 IL-1β、 IL-6 水平的影響， n=12）

注：與心臟驟停前比較,*P＜0.05；與心臟驟停復(fù)蘇組同時(shí)間點(diǎn)比較,＃P＜0.05

images/BZ_216_236_1938_2244_1987.png心臟驟停復(fù)蘇組 心臟驟停前 19.81±4.36 22.81±3.54 58.26±5.12自主循環(huán)恢復(fù)后12 h 81.67±4.19* 105.76±6.10* 256.16±8.78*自主循環(huán)恢復(fù)后24 h 145.11±5.96* 164.26±6.11* 317.51±10.72*自主循環(huán)恢復(fù)后72 h 110.53±4.29* 108.77±2.31* 272.13±7.23*丹參酮ⅡA 磺酸鈉組 心臟驟停前 18.70±1.74 25.11±2.92 54.26±6.14自主循環(huán)恢復(fù)后12 h 62.01±4.89＃ 81.40±6.79＃ 206.19±8.77＃自主循環(huán)恢復(fù)后24 h 105.91±7.92＃ 120.68±8.78＃ 269.63±8.77＃自主循環(huán)恢復(fù)后72 h 80.79±6.37＃ 75.17±7.81＃ 241.30±8.27＃

3.2 丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)NSE、 S-100B 水平的影響 圖1可見(jiàn), 心臟驟停復(fù)蘇組中自主循環(huán)恢復(fù)后12、 24、 72 h 血清NSE、 S-100B 的水平顯著高于心臟驟停前（P＜0.05）。丹參酮ⅡA磺酸鈉組自主循環(huán)恢復(fù)后12、 24、 72 h 上述腦損傷指標(biāo)水平均比心臟驟停復(fù)蘇組同時(shí)間點(diǎn)的腦損傷指標(biāo)水平明顯降低（P＜0.05）。

3.3 丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)Cr、 BUN、 ALT、 AST、 CK-MB、cTnI 水平的影響 表2 顯示, 心臟驟停復(fù)蘇組自主循環(huán)恢復(fù)后12、 24、 72 h Cr、 BUN、 ALT、 AST、 cTnI 水平顯著高于心臟驟停前（P＜0.05）, 12、 24 h CK-MB 水平顯著降低（P＜0.05）, 72 h CK-MB 水平無(wú)明顯變化（P＞0.05）； 丹參酮ⅡA磺酸鈉組自主循環(huán)恢復(fù)后12、 24、 72 h Cr、 BUN、ALT、 AST 水平均顯著低于心臟驟停復(fù)蘇組（P＜0.05）,12、 24 h CK-MB、 cTnI 水平顯著降低（P＜0.05）, 72 h CKMB、 cTnI 水平無(wú)明顯變化（P＞0.05）。

4 討論

心臟驟停復(fù)蘇后, 機(jī)體經(jīng)歷著一系列改變, 全身炎癥反應(yīng)參與著多器官衰竭的發(fā)生。 其中TNF-α 是炎癥啟動(dòng)因子, 其持續(xù)釋放會(huì)導(dǎo)致其他炎癥因子產(chǎn)生, 如IL-6、 IL-1β、 IL-8 等, 從而形成瀑布效益, 最終導(dǎo)致多器官功能衰竭[14]。 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 家兔心臟驟停復(fù)蘇后, TNF-α、 IL-6、IL-1β 水平明顯升高, 并與時(shí)間呈正比, 復(fù)蘇后24 h 達(dá)高峰, 與前期報(bào)道[15]一致； 丹參酮ⅡA磺酸鈉干預(yù)后, 同時(shí)間點(diǎn)上述炎癥因子水平明顯降低, 表明該成分能減輕心臟驟停復(fù)蘇后的炎癥反應(yīng)。

圖1 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對(duì)NSE、 S-100B 水平的影響

表2 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對(duì)Cr、 BUN、 ALT、 AST、 CK-MB、 cTnI 水平的影響±s， n=12）

表2 丹參酮ⅡA 磺酸鈉對(duì)Cr、 BUN、 ALT、 AST、 CK-MB、 cTnI 水平的影響±s， n=12）

注：與心臟驟停前比較,*P＜0.05；與心臟驟停復(fù)蘇組同時(shí)間點(diǎn)比較,＃P＜0.05

組別 時(shí)間 Cr/（μmol·L-1）BUN/（μmol·L-1）ALT/（U·L-1）AST/（U·L-1）CK-MB/（U·L-1）cTnI/（μg·L-1）心臟驟停復(fù)蘇組 心臟驟停前 51.50±4.62 6.84±1.82 44.21±3.23 36.94±2.16 488.26±37.67 4.95±0.89自主循環(huán)恢復(fù)后12 h 108.18±6.16* 13.73±1.82* 66.24±4.24* 54.57±2.32* 739.53±208.80* 26.14±2.99*自主循環(huán)恢復(fù)后24 h 136.63±4.71* 20.59±1.78* 91.44±4.17* 72.71±2.14* 2380.90±420.87* 41.85±4.29*自主循環(huán)恢復(fù)后72 h 154.04±5.81* 27.45±3.03* 183.74±4.69* 150.02±4.12* 518.98±54.61 16.93±2.23*丹參酮ⅡA 磺酸鈉組 心臟驟停前 54.74±5.15 6.67±1.80 45.48±3.40 38.11±2.14 491.48±53.95 4.23±0.70自主循環(huán)恢復(fù)后12 h 83.65±2.79＃ 8.47±1.41＃ 55.20±2.55＃ 44.86±3.22＃ 569.83±52.38＃ 15.00±1.67＃自主循環(huán)恢復(fù)后24 h 115.79±3.16＃ 15.05±1.11＃ 71.16±3.74＃ 57.86±3.36＃ 1571.07±110.99＃ 32.25±3.15＃自主循環(huán)恢復(fù)后72 h 135.48±3.35＃ 21.18±0.86＃ 155.36±5.75＃ 122.03±3.54＃ 506.10±59.05 11.23±0.90

腦組織有代謝高、 氧耗量大、 低儲(chǔ)備、 對(duì)缺氧耐受性差的特性, 在心臟驟停后短時(shí)間內(nèi)便可發(fā)生其不可逆的損傷[16]。 NSE、 S-100B 既是多種疾病腦損傷的指標(biāo), 也是心臟驟停結(jié)局的預(yù)測(cè)因子, 有研究認(rèn)為心臟驟停后后者更能準(zhǔn)確評(píng)估腦損傷嚴(yán)重程度[17-18]。 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 心臟驟停復(fù)蘇組血清NSE、 S-100B 水平明顯增高, 分別于復(fù)蘇后24、12 h 達(dá)高峰； 丹參酮ⅡA磺酸鈉組各時(shí)間點(diǎn)兩者水平明顯低于心臟驟停復(fù)蘇組, 表明該成分能改善心臟驟停復(fù)蘇后家兔腦損傷。

王金高等[19]報(bào)道, 家兔經(jīng)心臟驟停復(fù)蘇后, 血清Cr、ALT 水平隨復(fù)蘇后時(shí)間推移逐步升高, 在72 h 達(dá)到高峰,與本實(shí)驗(yàn)一致, 但認(rèn)為可能在72 h 之后才出現(xiàn)頂峰值, 只是時(shí)間有限并不能觀(guān)察到。 葛均波等[20]主編的《內(nèi)科學(xué)》中提到, 人類(lèi)CK-MB 水平于心肌發(fā)生損傷后4 h 內(nèi)增高,16～24 h 達(dá)高峰, 3 ～4 d 恢復(fù)正常； cTnI 于心肌發(fā)生損傷后3～4 h 后升高, 11～24 h 達(dá)高峰, 7～10 d 恢復(fù)正常； 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 家兔心臟驟停復(fù)蘇后血清CK-MB 水平于24 h達(dá)到高峰, 72 h 與心臟驟停前相當(dāng), 而cTnI 水平也于24 h達(dá)到高峰, 但72 h 仍未恢復(fù)正常, 兩者變化趨勢(shì)與人體無(wú)異。

另外, 丹參酮ⅡA磺酸鈉組血清Cr、 BUN、 ALT、 AST水平在復(fù)蘇后12、 24、 72 h 明顯低于心臟驟停復(fù)蘇組, 而血清CK-MB、 cTnI 水平在復(fù)蘇后12、 24 h 亦然, 推測(cè)該成分能改善心臟驟停復(fù)蘇后家兔多器官（心、 肝、 腎） 損傷。 但本實(shí)驗(yàn)僅抽取血液指標(biāo)來(lái)評(píng)估丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)心臟驟停復(fù)蘇后家兔的影響, 其行為功能、 器官組織形態(tài)是否有所改善尚不明確, 仍需進(jìn)一步研究。