參蛤益肺膠囊對(duì)COPD穩(wěn)定期大鼠血清bFGF水平及支氣管平滑肌厚度的影響*

廖冬梅 鐘紅衛(wèi) 雷章恒△ 陳遠(yuǎn)霞

1西南醫(yī)科大學(xué)，四川瀘州 6460002西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川瀘州 646000

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)是一種常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，以持續(xù)呼吸癥狀和氣流受限為特征，通常是由于明顯暴露于有毒顆粒或氣體引起的氣道和(或)肺泡異常所導(dǎo)致[1]。隨著全球環(huán)境污染加重，人口老齡化，COPD的發(fā)病率及死亡率呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，極大地加重患者和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，針對(duì)COPD的防治研究顯得格外重要。近年來(lái)研究[2-3]指出，中醫(yī)藥治療COPD具有不錯(cuò)的臨床療效。本研究觀察了參蛤益肺膠囊治療COPD穩(wěn)定期大鼠對(duì)血清堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)水平及支氣管平滑肌厚度的影響，旨在為中藥制劑防治COPD奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠50只，其中雌鼠25只，體重(230±10)g；雄鼠25只，體重(290±10)g。遵照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施(GB 14925-2010)》，遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利與倫理原則，研究方案獲得西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

417R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)eppendorf公司)，Bx-50光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司)，ML204/02電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，-80℃冰箱(日本SANYO公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品

大鼠bFGF ELISA試劑盒(上海泛科實(shí)業(yè)有限公司，SBJ-R0562)，參蛤益肺膠囊(西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)20160604，0.33 g/粒)，茶堿緩釋片(廣州邁特興華制藥廠，批號(hào)20160118，0.1 g/片)，3%戊巴比妥(Sigma公司，批號(hào)05042137)。

1.4 造模方法

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，從50只清潔級(jí)SD大鼠中，分別挑選出5只雌鼠和5只雄鼠作為空白組(N組)，剩下的40只進(jìn)行COPD穩(wěn)定期大鼠造模。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室研究經(jīng)驗(yàn)，采用被動(dòng)吸入香煙煙霧聯(lián)合肺炎克雷伯氏桿菌感染的方法建立COPD穩(wěn)定期大鼠模型。造模第1周至第3周，經(jīng)大鼠鼻腔滴入0.1 mL肺炎克雷伯桿菌液(6×108CFU/mL)，每5天進(jìn)行1次。第1周至第6周，將大鼠置于煙熏箱被動(dòng)吸入香煙煙霧，每天1次，每次30 min。

1.5 分組及給藥

造模成功后，以雌雄各半為原則，隨機(jī)將40只大鼠分為4組：模型組(M組)、常規(guī)劑量參蛤益肺膠囊治療組(A組)、高劑量參蛤益肺膠囊治療組(B組)、茶堿緩釋片治療組(C組)各10只。A組、B組、C組大鼠每日給藥劑量分別為0.62 g/kg、0.42 g/kg、0.02 g/kg，將每日給藥量與50 mL0.9%氯化鈉溶液充分混合后進(jìn)行灌胃處理；N組及M組大鼠以50 mL0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行灌胃處理。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)

將各組大鼠分為2組，分別于造模12周及18周后進(jìn)行血清bFGF水平檢測(cè)及支氣管平滑肌厚度測(cè)定。取材前所有大鼠禁食12 h，麻醉后采集腹主動(dòng)脈血，將其靜置于4℃冰箱4 h，取出后以3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，將其血清置于-80℃冰箱內(nèi)保存待測(cè)，運(yùn)用ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。取材后迅速處死大鼠、開(kāi)胸、取出大鼠的右肺并分離出中葉，肺組織經(jīng)常規(guī)固定、HE染色后采用顯微鏡觀察，運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量支氣管平滑肌厚度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血清bFGF水平比較

造模12周及18周后，M組、A組、B組、C組大鼠血清bFGF水平均明顯高于N組(P<0.05)；A組、B組、C組大鼠血清bFGF水平均明顯低于M組(P<0.05)；B組大鼠血清bFGF水平明顯低于A組、C組(P<0.05)；A組與C組大鼠血清bFGF水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。造模18周后B組大鼠血清bFGF水平明顯低于12周后(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清bFGF水平比較

與N組比較，*P<0.05；與M組比較，△P<0.05；與B組比較，▲P<0.05；與12周后比較，□P<0.05

2.2 支氣管平滑肌厚度比較

造模12周及18周后，M組、A組、B組、C組大鼠支氣管平滑肌厚度均明顯高于N組(P<0.05)；A組、B組、C組大鼠支氣管平滑肌厚度均明顯低于M組(P<0.05)；B組大鼠支氣管平滑肌厚度明顯低于A組、C組(P<0.05)；A組與C組大鼠支氣管平滑肌厚度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。造模18周后B組大鼠支氣管平滑肌厚度明顯低于12周后(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠支氣管平滑肌厚度比較

與N組比較，*P<0.05；與M組比較，△P<0.05；與B組比較，▲P<0.05；與12周后比較，□P<0.05

3 討論

血清bFGF是一種多肽分子，具有廣泛生物活性，絲裂原活性明顯，能促進(jìn)多種細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化。血清bFGF可通過(guò)趨化作用使單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)到損傷局部參與炎癥反應(yīng)，同時(shí)也趨化成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞參與局部損傷的修復(fù)和重建。研究[4-5]指出，在COPD發(fā)病過(guò)程中，bFGF參與炎癥反應(yīng)和損傷修復(fù)，引起氣道黏膜炎癥反應(yīng)加重、黏膜下膠原沉積和平滑肌細(xì)胞增生、肥厚，導(dǎo)致氣道重塑，因此可作為COPD病情監(jiān)測(cè)的重要觀察指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)COPD穩(wěn)定期大鼠模型的建立采用被動(dòng)吸入香煙煙霧聯(lián)合肺炎克雷伯氏桿菌感染的方法，更符合COPD穩(wěn)定期的病情特點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示，造模12周及18周后比較各組大鼠血清bFGF水平及支氣管平滑肌厚度，M組、A組、B組、C組大鼠均明顯高于N組，提示造模成功；A組、B組、C組均明顯低于M組，提示茶堿緩釋片、參蛤益肺膠囊常規(guī)劑量及高劑量均對(duì)COPD穩(wěn)定期大鼠有治療作用；B組大鼠明顯低于A組、C組，提示高劑量參蛤益肺膠囊的治療效果優(yōu)于茶堿緩釋片及常規(guī)劑量參蛤益肺膠囊治療；造模18周后B組大鼠明顯低于12周后，提示隨著治療時(shí)間延長(zhǎng)，高劑量參蛤益肺膠囊治療效果進(jìn)一步提升，可有效緩解病情進(jìn)展。

根據(jù)本病臨床表現(xiàn)，可歸屬于中醫(yī)“肺脹”范疇，古代醫(yī)家對(duì)其病因病機(jī)進(jìn)行了詳細(xì)描述，《諸病源候論·咳嗽病諸侯·咳逆短氣候》曰：“肺虛為微寒所傷，則咳嗽，嗽則氣還于肺間，則肺脹；肺脹則氣逆。而肺本虛，氣為不足，復(fù)為邪所乘，壅痞不能宣暢，故咳逆短乏氣也?！薄秹凼辣Ｔぬ荡吩疲骸胺蚊洿瓭M，胸高氣急，兩脅搧動(dòng)，陷下作坑，兩鼻竅張，悶亂嗽渴，聲啊不鳴，痰涎潮塞。”肺脹的病理性質(zhì)多屬標(biāo)實(shí)本虛，標(biāo)實(shí)為痰濁、水飲、瘀血和氣滯，本虛為肺、脾、腎氣虛，晚期則氣虛及陽(yáng)，或陰陽(yáng)兩虛。本病穩(wěn)定期病因病機(jī)為肺脾腎虛、痰瘀互結(jié)，治療應(yīng)以益氣、活血、化痰為原則[6]。參蛤益肺膠囊是西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)中藥制劑，源自明代朱肅《普濟(jì)方》的蛤蚧散加減，由蛤蚧、紅參、川芎、三七等藥物組成，具有補(bǔ)肺益腎、化瘀祛痰、納氣平喘、標(biāo)本兼治之功[7]。

綜上所述，參蛤益肺膠囊可降低COPD穩(wěn)定期大鼠血清bFGF水平，減少支氣管平滑肌厚度，高劑量參蛤益肺膠囊療效更為顯著。