氣相色譜法測(cè)定小菜蛾性誘劑中3種有效成分

魏曉曉 馬博凱 劉偉麗

(北京市理化分析測(cè)試中心，有機(jī)材料檢測(cè)技術(shù)與質(zhì)量評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100094)

小菜蛾屬于鱗翅目菜蛾科，是危害十字花科蔬菜最重要的害蟲(chóng)之一，分布廣泛，屬于世界性害蟲(chóng)[1-3]。目前，減輕或預(yù)防小菜蛾的危害主要以化學(xué)防治為主。但化學(xué)防治存在易產(chǎn)生抗藥性、污染環(huán)境以及殺傷天敵等弊端[4-6]。近年來(lái)環(huán)境友好型的性誘劑生物防治方法開(kāi)始引起廣泛的關(guān)注。該方法是利用釋放的性誘劑，引誘異性成蟲(chóng)，從而干擾雌雄交配，減少受精卵數(shù)量，從而控制小菜蛾數(shù)量。小菜蛾性誘劑于1974年由Chow從小菜蛾雌蛾腹部提取得到，其主要成分被鑒定為順-11-十六碳烯醛(Z11-16：Ald)和順-11-十六碳烯乙酸酯(Z11-16：Ac)，及微量成分順-11-十六碳烯醇(Z11-16：OH)[7-9]。這幾種成分的配比、劑量對(duì)其田間誘餌效果有很大影響，因此有必要建立小菜蛾性誘劑中各成分含量的檢測(cè)方法。徐妍[10]和杜少芳[11]分別報(bào)道過(guò)用氣相色譜方法測(cè)定梨小食心蟲(chóng)性信息素順-8 -十二碳烯-1-醇乙酸酯的含量，尚未見(jiàn)對(duì)混合成分性信息素定量分析的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)建立了一種氣相色譜方法，可同時(shí)對(duì)小菜蛾性誘劑中3種成分Z11-16：Ald、Z11-16：Ac、Z11-16：OH含量進(jìn)行分析，此方法具有分離效果好，操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，為小菜蛾性誘劑質(zhì)量控制提供了技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀(美國(guó)Agilent公司，配FID檢測(cè)器)；XS205十萬(wàn)分之一分析天平(瑞士Mettler公司)。

順-11-十六碳烯醛(Z11-16：Ald)標(biāo)準(zhǔn)品(阿拉丁化學(xué)試劑有限公司)；順-11-十六碳烯乙酸酯(Z11-16：Ac)、順-11-十六碳烯醇(Z11-16：OH)標(biāo)準(zhǔn)品(南京邦諾生物科技有限公司)；二氯甲烷色譜純(美國(guó)Fisher公司)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱(chēng)取適量順-11-十六碳烯醛、順-11-十六碳烯乙酸酯、順-11-十六碳烯醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用二氯甲烷溶解、定容，制備3物質(zhì)質(zhì)量濃度均為1000μg/mL的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取適量各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，混合于10 mL容量瓶中，定容，配制成200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL系列濃度的順-11-十六碳烯醛、順-11-十六碳烯乙酸酯、順-11-十六碳烯醇3種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 樣品處理

移取100 μL樣品液體，至10 mL容量瓶中，加入二氯甲烷定容，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，供GC測(cè)定。

2.4 色譜條件

Agilent DB-FFAP(30m×0.25 mm×0.25 μm)毛細(xì)管色譜柱；進(jìn)樣口溫度200℃；檢測(cè)器溫度250℃；柱升溫程序：初始溫度100 ℃，升溫速率5 ℃/min，最終溫度230℃，保持5min；載氣為高純氮?dú)?N2)；載氣流速：1mL/min，氫氣流速為30mL/min，空氣流速為400mL/min，分流比20∶1，進(jìn)樣量1 μL。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜柱的選擇

實(shí)驗(yàn)考察了不同色譜柱對(duì)3種性誘劑的分離效果。由表1可知，3號(hào)色譜柱對(duì)3種物質(zhì)的分離效果最佳，能夠?qū)⒈Ａ魰r(shí)間接近的順-11-十六碳烯乙酸酯和順-11-十六碳烯醇完全分開(kāi)，又考慮到待測(cè)3種組分都為極性化合物，故選擇使用Agilent DB-FFAP(30m×0.25 mm×0.25 μm)毛細(xì)管色譜柱。

表1 色譜柱對(duì)性誘劑保留時(shí)間(t)的影響

3.2 色譜條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)在保持其它色譜條件相同的條件下，考察了不同升溫程序?qū)?種性誘劑分析效果。表2給出了不同升溫條件下順-11-十六碳烯乙酸酯和順-11-十六碳烯醇的分離度以及順-11-十六碳烯醛的出峰時(shí)間。表2結(jié)果表明，樣品在色譜后段出峰，因此可以提高初始程序溫度，縮短分析時(shí)間，選擇100℃為初始溫度。升溫速率對(duì)性誘劑的分離度有一定影響，升溫速率越慢，分離度越好，為了保證各組分的分離效率和較短的色譜流出時(shí)間，因此確定如下色譜條件：100 ℃保持2 min，以5 ℃/min的速率升至230 ℃，保持5 min。圖1為此條件下得到的3種性誘劑的色譜圖，可見(jiàn)3種成分的峰形對(duì)稱(chēng)、清晰、基線平穩(wěn)，分離效果良好。

表2 升溫條件對(duì)性誘劑出峰時(shí)間(t)的影響

圖1 小菜蛾性誘劑的氣相色譜圖1.順-11-十六碳烯醛；2.順-11-十六碳烯乙酸酯；3.順-11-十六碳烯醇

3.3 方法的線性關(guān)系和儀器檢出限

用二氯甲烷分別將順-11-十六碳烯醛、順-11-十六碳烯乙酸酯、順-11-十六碳烯醇稀釋為濃度為20～200 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述優(yōu)化分析條件下測(cè)定。以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X, μg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，3種性誘劑在各自的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999。以S/N=3計(jì)算3種性誘劑的檢出限(LOD)，以S/N=10計(jì)算3種性誘劑的定量限(LOQ)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

3.4 方法的加標(biāo)回收率

以二氯甲烷為基體，分別添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行添加回收率和精密度試驗(yàn)。3個(gè)添加水平下，每個(gè)平行測(cè)定6次。結(jié)果如表4所示，不同水平下各待測(cè)物的平均回收率為94.5%～97.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～2.9%，能滿(mǎn)足小菜蛾性誘劑中3種成分的快速檢測(cè)需求。

表4 回收率和精密度檢測(cè)結(jié)果

4 實(shí)際樣品檢測(cè)

按照本實(shí)驗(yàn)建立的方法對(duì)市場(chǎng)上采購(gòu)的某品牌小菜蛾性誘劑中3種成分順-11-十六碳烯醛、順-11-十六碳烯乙酸酯、順-11-十六碳烯醇的含量進(jìn)行了測(cè)定，樣品中3種物質(zhì)含量如表5所示。由表5可知，樣品中添加順-11-十六碳烯醇含量最低，順-11-十六碳烯酯含量居中，順-11-十六碳烯醛含量最高。

表5 小菜蛾性誘劑中3種成分的濃度 μg/mL

5 結(jié)論

本研究建立了氣相色譜方法快速測(cè)定小菜蛾性誘劑中3種成分。該方法操作簡(jiǎn)單、分離效果好、線性關(guān)系良好、精密度和準(zhǔn)確度高，能夠滿(mǎn)足小菜蛾誘芯中3種成分的檢測(cè)要求，可為研發(fā)高效小菜蛾性誘劑及小菜蛾性誘劑的質(zhì)量控制提供技術(shù)支持。