蜂膠對小鼠缺氧耐受力的實驗研究

李 萍,汪 平,董藝霖,劉夢燕,孫 薇*

（吉林大學(xué)藥學(xué)院·吉林長春·130021）

氧氣對人體很重要，特別是身體各個部分的器官都不能離開氧氣的供應(yīng)，其對氧氣有不同量的需求，比如心臟、肺部、大腦等重要器官，它們一旦缺少氧氣，將不能正常工作。缺氧是對好氧生物的一種激發(fā)性刺激，當(dāng)生物體內(nèi)氧氣的供應(yīng)量或利用率下降時，生物便會出現(xiàn)缺氧的狀況，從而影響生物器官的各種代謝，主要表現(xiàn)為機體的氧化供能嚴重降低。慢性缺氧會導(dǎo)致多種慢性疾病，甚至可能會對生物機體造成長期傷害，而急性缺氧可能會造成好氧生物產(chǎn)生窒息反應(yīng)甚至死亡。

鑒于以上缺氧反應(yīng)對機體造成的影響，如何預(yù)防或者減少缺氧造成的傷害也就至關(guān)重要，如何提高缺氧耐受力成為了一個重要的研究課題。提高缺氧耐受力是指在特定條件下，當(dāng)環(huán)境中的氧氣減少時，人體各個器官對氧氣需求量減少的同時，又不影響各個器官的正常工作，保證各個器官發(fā)揮正常的功能，使機體保持健康。在當(dāng)今社會，有一些職業(yè)人員的工作是在比較缺氧的環(huán)境中，比如從事高空作業(yè)以及高原勘察的人員，他們在工作時，隨著海拔高度的不斷上升，周圍環(huán)境的氣壓也會呈下降趨勢，周圍環(huán)境的氧氣含量也會降低，工作人員便很容易出現(xiàn)缺氧的情況，因而提高缺氧耐受力也就有著十分重要的醫(yī)學(xué)和社會意義。

已報道能夠提高缺氧耐受性的中藥有很多，比如丹參、麥冬、阿膠等。蜂膠外形呈現(xiàn)膠狀，它具有特殊芳香氣味。主要是由蜜蜂進行加工而獲得。蜜蜂一般在特定樹木上進行采集，獲得樹脂，再將樹脂混入舌腺、蠟腺等腺體的分泌物中,進行一系列的加工，最后獲得蜂膠。蜂膠已被發(fā)現(xiàn)的藥理活性十分廣泛，比如，具有降血糖[1]、抗腦缺血再灌注損傷[2]、抗腫瘤[3]以及抗炎[4]等作用。本實驗旨在研究蜂膠對小鼠缺氧耐受力的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

蜂膠購自山東舜生堂中藥飲片有限公司，將蜂膠研磨成細粉。體重為18～22g的SPF級ICR雄性小鼠〔生產(chǎn)許可證號：SCXK-（吉）2011-0004〕、 小鼠基礎(chǔ)飼料〔生產(chǎn)許可證號：SCXK-（吉）2010-0001〕，長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。清潔級動物室環(huán)境設(shè)施合格證號：吉動設(shè)字10-1005號，實驗動物使用許可證號：SYXK（吉）2010-0011，溫度 20～22℃，濕度55%～65%。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物分組

小鼠灌胃劑量分別按照12.5、25.0、50.0mg/kg設(shè)置蜂膠粉末低劑量組、中劑量組、高劑量組，精密稱取蜂膠粉末31.25、62.5、125.0 mg，在各組蜂膠粉末中加入0.5%羧甲基纖維素鈉，每組均加至50mL；陰性對照組不加蜂膠粉末，而是直接加0.5%羧甲基纖維素鈉50mL。對各組小鼠采用灌胃方式進行給藥，每組灌胃劑量均為 0.02 mL/(g·d)，連續(xù)灌胃 30d。

1.2.2 常壓耐缺氧實驗

連續(xù)經(jīng)口灌胃給予各劑量組受試物30d，對照組給予同體積0.5%羧甲基纖維素鈉。于最后1次給予受試物1 h后，立即將各組小鼠放入盛有5 g鈉石灰的廣口瓶內(nèi)（1只/瓶），取適量凡士林涂抹瓶口，蓋嚴，確保密閉之后開始計時，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察并記錄小鼠因缺氧而死亡的時間，并進行統(tǒng)計分析。

1.2.3 急性腦缺血性缺氧實驗

連續(xù)經(jīng)口灌胃給予各劑量組受試物30d，對照組給予同體積0.5%羧甲基纖維素鈉。于末次給予受試物1 h后，在乙醚淺麻醉下，各組動物自頸部斷頭，用秒表記錄小鼠斷頭后張口喘息至停止的時間。

1.3 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

用spss11.5軟件對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析，P＜0.05表示有顯著差異，證明該數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蜂膠對小鼠體重的影響：

給予蜂膠粉末30d，各組小鼠體重與陰性對照組比較無顯著差異（P＞0.05），結(jié)果見表1.

表1 蜂膠對小鼠體重的影響

2.2 蜂膠對常壓耐缺氧實驗結(jié)果：

低劑量組小鼠常壓缺氧存活時間與陰性對照組比較無差異（P＞0.05），中、高劑量組小鼠常壓缺氧條件下的存活時間與陰性對照組有顯著性差異（P＜0.05和P＜0.01）。結(jié)果表明，中、高劑量的蜂膠能延長小鼠常壓耐缺氧的存活時間，結(jié)果見表2。

表2 蜂膠對常壓耐缺氧實驗結(jié)果

2.3 蜂膠對急性腦缺血性缺氧實驗結(jié)果：

分別給予小鼠3種不同劑量的蜂膠粉末，連續(xù)30d，小鼠斷頭后張口喘息停止時間，中、高劑量組與陰性對照組相比較有顯著性差異（P＜0.05）,低劑量組與陰性對照組比較無差異（P＞0.05），結(jié)果見表3。

表3 蜂膠對急性腦缺血性缺氧實驗結(jié)果

2.4 結(jié)論

本實驗中設(shè)置的中劑量組(25.0mg/kg)、高劑量組(50.0mg/kg)的蜂膠粉末可顯著延長常壓耐缺氧耐受時間，同樣在急性腦缺血性缺氧實驗中，蜂膠粉末中劑量組(25.0mg/kg)、高劑量組(50.0mg/kg)的小鼠的耐受時間也相應(yīng)的有所延長，同時其對小鼠的體重?zé)o顯著影響，說明蜂膠具有良好的抗缺氧能力。

3 討論

引起缺氧反應(yīng)的原因有很多，比如環(huán)境中氧氣量減少引起的缺氧反應(yīng)、過度使用人體器官使氧氣消耗速度增加引起的缺氧反應(yīng)、因生病使相應(yīng)器官產(chǎn)生病理作用引起的缺氧反應(yīng)等等。引起缺氧反應(yīng)會造成循環(huán)血液中氧含量下降，導(dǎo)致機體細胞氧供應(yīng)不足，使機體呈現(xiàn)一種病理狀態(tài)[5]，機體免疫力也會相應(yīng)下降。蜂膠含有多種化學(xué)成分，其中主要成分包括黃酮類、酚酸類和萜烯類[6]，蜂膠的功效也十分的廣泛，有研究表明[7]，蜂膠總黃酮可顯著降低丙二醛（MDA）的含量，增強超氧化物歧化酶（SOD）的活力，在改善缺氧耐受力的同時，可以調(diào)節(jié)自由基水平，改善心肌組織的抗氧化能力。

本研究采用兩種缺氧狀態(tài)的小鼠模型，經(jīng)口灌胃給藥30d，通過觀察各組小鼠在缺氧狀態(tài)下的存活時間和體重變化，驗證蜂膠的抗缺氧作用。實驗結(jié)果表明，蜂膠粉末中劑量組(25.0mg/kg)、高劑量組(50.0mg/kg)能使常壓缺氧和急性腦缺血性缺氧小鼠的存活時間延長，同時蜂膠粉末對小鼠體重并不會產(chǎn)生影響，這些都表明蜂膠粉末具有小鼠缺氧耐受力的作用。潘燕[8]等人在研究蜂膠黃酮對小鼠缺血再灌注后心肌線粒體自由基損傷時發(fā)現(xiàn)，與力竭對照組相比，力竭給藥組的SOD、GSH-Px、T-AOC在力竭后的不同時刻均明顯升高，MDA含量明顯下降，其原因可能與增強機體缺氧耐受力、提高抗氧化能力有關(guān)。而本實驗結(jié)果提示，提高缺氧耐受力可能與減輕腦缺血再灌注損傷有關(guān)，其作用機理有待進一步研究取證。