苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的制備及相關(guān)評(píng)價(jià)

孫欽勇，馮中，咸鑫，杜麗平，高帆俐，張朝，禹珊珊，張貴民（魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，國家手性制藥工程技術(shù)研究中心，山東 臨沂 273400）

苯甲酸利扎曲普坦對(duì)5-羥色胺受體1B（5-HT1B）和1D（5-HT1D）亞型具有高度的親和力，可抑制三叉神經(jīng)疼痛通路中神經(jīng)肽的釋放和傳遞，是第2代曲普坦類治療偏頭痛藥物[1]。苯甲酸利扎曲普坦為白色至類白色結(jié)晶固體，水中易溶，苦味強(qiáng)烈，其口腔崩解片由Merck公司研制，1998年在荷蘭上市，臨床用于治療急性偏頭痛發(fā)作，具有起效快、療效好、安全方便的優(yōu)點(diǎn)。

口腔崩解片（orally disintegrating tablet，ODT）在口腔中能快速崩解，隨吞咽動(dòng)作進(jìn)入消化道，對(duì)不能吞咽的昏迷患者、吞咽功能發(fā)育不全的兒童及吞咽功能減退的老人具有較好的依從性。口腔崩解片還具有服用方便、起效快、生物利用度高、對(duì)消化道黏膜刺激性小等特點(diǎn)[2]。羥丙基-β-環(huán)糊精（hydroxypropyl-β-cyclodextrin，HP-β-CD），為略呈錐形的中空?qǐng)A筒立體環(huán)狀結(jié)構(gòu)，能夠包絡(luò)各種客體分子，藥物進(jìn)入環(huán)糊精空腔后，其構(gòu)象發(fā)生改變，使藥物附著于包合物中，掩蓋藥物的不良?xì)馕?，提高藥物穩(wěn)定性和生物利用度[3-6]。本研究通過HP-β-CD包合苯甲酸利扎曲普坦來掩蓋其苦味，同時(shí)優(yōu)化其口腔崩解片的處方，加快起效速度。

1 儀器與試藥

CPR-18型8沖旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)（意大利BONAPACE）；TMG 1/6型混合制粒機(jī)（德國Glatt）；Quadro Comil U5型錐式整粒機(jī)（IDEX Corperation，USA）；UV分光光度計(jì)（V-630，Jasco，Japan）；粉末流動(dòng)性檢測(cè)儀、振實(shí)密度測(cè)定儀、脆碎度儀、System 860DL型溶出儀、HDT-400C硬度儀（美國Logan）；游標(biāo)卡尺（美國SATA）；DT50型自動(dòng)崩解儀（瑞士Sotax）。

苯甲酸利扎曲普坦對(duì)照品（上海一研生物科技有限公司，含量：99.9%，批號(hào)：17321301）；苯甲酸利扎曲普坦原料藥（魯南制藥集團(tuán)股份有限公司）；羥丙基-β-環(huán)糊精（河南瑞仁生物工程有限公司）；甘露醇（江蘇倍達(dá)醫(yī)藥科技有限公司）；交聯(lián)聚維酮（PVPP，美國阿施蘭德，批號(hào)：0002230813）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，明臺(tái)化工股份有限公司，批號(hào)：5190800005267）；乳糖（DFE，批號(hào)：104BX94）；滑石粉、硬脂酸鎂（Peter Greven，批號(hào)：518022299）；其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 苯甲酸利扎曲普坦含量測(cè)定

2.1.1 供試品溶液的配制 取10片苯甲酸利扎曲普坦口崩片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于苯甲酸利扎曲普坦5 mg），加0.1 mol·L－1鹽酸溶液制成含苯甲酸利扎曲普坦20 μg·mL－1的溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制 取適量苯甲酸利扎曲普坦對(duì)照品，加0.1 mol·L－1鹽酸溶液制成含苯甲酸利扎曲普坦29 μg·mL－1的溶液，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.1.3 空白溶液的配制 按照處方量制備不含苯甲酸利扎曲普坦的空白片劑，照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備空白溶液。

2.1.4 專屬性試驗(yàn) 取空白溶液（0.1 mol·L－1鹽酸溶液）、對(duì)照品溶液、供試品溶液，分別在260～300 nm波長處掃描，結(jié)果在281 nm處出現(xiàn)最大吸收峰，且空白溶液在（281±5）nm處未出現(xiàn)相同的吸收峰，故選擇281 nm為測(cè)定波長[7]。

2.1.5 線性關(guān)系考察 取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，濾膜過濾，加0.1 mol·L－1鹽酸溶液制成5.80、11.60、23.20、29.00、34.80 μg·mL－1系列質(zhì)量濃度線性溶液，在281 nm處測(cè)定吸光度，進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果苯甲酸利扎普坦質(zhì)量濃度在5.80～34.80 μg·mL－1與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y＝0.014 87X＋0.001 47，r＝0.9999。

2.1.6 精密度考察 取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，濾膜過濾，連續(xù)測(cè)定6次，吸光度的RSD為0.34%，表明本方法儀器精密度良好。

2.1.7 回收試驗(yàn) 稱取陰性空白片劑粉未適量，置于量瓶中，精密加入苯甲酸利扎曲普坦對(duì)照品適量，制成質(zhì)量濃度相當(dāng)于80%、100%、120%樣品溶液，測(cè)定吸光度，結(jié)果平均回收率均＜100.3%，RSD均＜0.60%（n＝3）。

2.2 苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的制備

2.2.1 苯甲酸利扎曲普坦的HP-β-CD包合物的制備 苯甲酸利扎曲普坦與舌頭上的味蕾受體結(jié)合從而產(chǎn)生苦味，HP-β-CD可以阻止苯甲酸利扎曲普坦與苦味受體結(jié)合，從而切斷信號(hào)傳導(dǎo)掩蓋苦味。通過研磨法制備苯甲酸利扎曲普坦HP-β-CD包合物，在室溫條件下，稱取苯甲酸利扎曲普坦原料藥和HP-β-CD，按照1∶1、1∶2、1∶3的摩爾比混合，加入少量水（使苯甲酸利扎曲普坦與HP-β-CD更好地混合）置于研缽中研磨15 min，烘箱40℃干燥12 h。將物料粉碎后過200目篩網(wǎng)，備用。包合物收率（%）＝包合物收得量/（HP-β-CD投入量＋苯甲酸利扎曲普坦投入量）×100%。

2.2.2 苯甲酸利扎曲普坦HP-β-CD包合物的評(píng)價(jià)照紫外-可見分光光度法在281 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算苯甲酸利扎曲普坦的包封率，包封率（%）＝（包合物苯甲酸利扎曲普坦含量×包合物收得量）/苯甲酸利扎曲普坦投入量×100%，結(jié)果見表1。

表1 苯甲酸利扎曲普坦與HP-β-CD不同配比的包封率Tab 1 Entrapment rate of rizatriptan benzoate and HP-β-CD at different ratios

選擇22～28歲的6名健康男性志愿者進(jìn)行口味測(cè)評(píng)，每個(gè)志愿者口含苯甲酸利扎曲普坦原料藥約2 mg，包合比分別為1∶1、1∶2、1∶3的包合物各30 s，記錄苦味水平。測(cè)試前用水沖洗口腔兩次以免產(chǎn)生偏差，測(cè)試不同樣品的時(shí)間間隔不少于30 min。苦味水平評(píng)分：0＝強(qiáng)烈苦味，1＝中等苦味，2＝輕微苦味，3＝無苦味，6位志愿者分別以ABCDEF表示，評(píng)價(jià)結(jié)果見表2。

表2 苯甲酸利扎曲普坦與HP-β-CD不同配比苦味評(píng)估結(jié)果Tab 2 Evaluation of bitterness of rizatriptan benzoate and HP-β-CD at different ratios

結(jié)果顯示，苯甲酸利扎曲普坦與HP-β-CD按1∶3混合時(shí)，包合物的包封率高，所得包合物無味，掩味效果好。按照其他包合比例所制包合物均有不同程度的苦味、包封率低。因此選擇苯甲酸利扎曲普坦與HP-β-CD的包合比為1∶3。

2.2.3 口腔崩解片的處方優(yōu)化 口腔崩解片的特點(diǎn)是能夠迅速崩解，溶出速度快?？谇槐澜馄挠捕扰c崩解時(shí)限常成負(fù)相關(guān)，所以在滿足口腔崩解片崩解時(shí)限盡可能小的同時(shí)要保證其硬度盡可能大。片劑的硬度過小，會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)難度大，同時(shí)口腔崩解片的脆碎度容易不合格[8]。因此根據(jù)口腔崩解片的崩解時(shí)限和硬度結(jié)果，對(duì)處方進(jìn)行優(yōu)化。本實(shí)驗(yàn)以CMC-Na、甘露醇、乳糖、PVPP、滑石粉、硬脂酸鎂為輔料直接壓片，其中甘露醇為填充劑，PVPP為超級(jí)崩解劑，CMC-Na為黏合劑，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果這3個(gè)因素對(duì)口腔崩解片的外觀、片重、厚度、脆碎度、含量等影響偏小，對(duì)硬度及崩解時(shí)限影響較大。采用BBD設(shè)計(jì)法以甘露醇（A）、CMC-Na（B）和PVPP（C）的用量百分比3個(gè)因素作為考察因素，分別用代碼－1、0、1表示3個(gè)因素的低、中、高3個(gè)水平，以口腔崩解片的硬度（Y1）和崩解時(shí)限（Y2）為主要考察指標(biāo)，對(duì)該口腔崩解片的處方進(jìn)行優(yōu)化，3個(gè)影響因素及其水平見表3。

表3 BBD設(shè)計(jì)因素水平表Tab 3 Factor and level for BBD design

根據(jù)BBD設(shè)計(jì)的處方制備苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片，除硬脂酸鎂外，所有物料過60目篩后以50 r·min－1混合10 min，再加入過80目篩的硬脂酸鎂50 r·min－1混合5 min。使用8 mm平?jīng)_頭以10 kN的壓力直接壓片，目標(biāo)片重為150 mg。結(jié)果見表4。

表4 各因素對(duì)苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的影響Tab 4 Influence of various factors on rizatriptan benzoate orally disintegrating tablet

將硬度和崩解時(shí)限作為優(yōu)化因素，使其具有最大硬度和最小崩解時(shí)限，得到的響應(yīng)面見圖1，崩解時(shí)限和硬度的擬合方程為Y1和Y2，Y1＝53.53＋0.69A－3.01B＋8.89C－1.00AB＋0.56AC－0.70BC－2.10A2－1.51B2－5.32C2，Y2＝48.81－1.45A－14.20B＋1.78C＋4.62AB＋0.64AC＋2.55BC＋1.24A2＋8.15B2－0.87C2。

圖1 硬度和崩解時(shí)限響應(yīng)面圖Fig 1 Response surface diagram of hardness and disintegration time limit

通過雙側(cè)方差分析（ANOVA）對(duì)硬度（Y1）和崩解時(shí)限（Y2）的F值和P值進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果見表5。2個(gè)模型的P值均小于0.05（顯著）；失擬項(xiàng)值均大于0.05（不顯著），說明模型的預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)際結(jié)果有較好的擬合度，能用于自制口腔崩解片的處方篩選。因素B、C對(duì)片劑的度有顯著性影響；因素A、B和C對(duì)崩解時(shí)限有顯著性影響。因素C對(duì)硬度的影響最大（F值895.94），因素B對(duì)崩解時(shí)限的影響最大（F值1017.69）。AB的相互作用對(duì)硬度具有協(xié)同作用（P＝0.0483），AB、BC的相互作用對(duì)崩解時(shí)限具有協(xié)同作用（P分別為0.0002，0.0049）。

表5 BBD實(shí)驗(yàn)回歸模型的方差分析Tab 5 Variance analysis in regression models with BBD test

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果模擬苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的最優(yōu)配方，實(shí)驗(yàn)函數(shù)的最大期望值為0.807%。當(dāng)獲得最優(yōu)的結(jié)果時(shí)，甘露醇為35.46%，PVPP為4.60%，CMC-Na為4.74%，硬度為56.0526 N，崩解時(shí)限為46.73 s，這一實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦m用于直壓法制備苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片硬度最大化和崩解時(shí)限最小化的要求。最終確定苯甲酸利扎曲普坦的處方為：苯甲酸利扎曲普坦包合物41.35 mg、甘露醇53.19 mg、PVPP 6.9 mg、CMC-Na 7.11 mg、乳糖36.95 mg、滑石粉3.00 mg、硬脂酸鎂1.50 mg。

2.3 最佳處方工藝驗(yàn)證

2.3.1 粉末流動(dòng)性 生產(chǎn)片劑時(shí)，需要確定混粉從進(jìn)料斗到達(dá)模沖過程中是否具有連續(xù)且均勻的流動(dòng)性，即需要表征混粉的流動(dòng)性[9]。根據(jù)最優(yōu)處方稱取苯甲酸利扎曲普坦和其他輔料，按照“2.2.3”中方法混合。從混粉中準(zhǔn)確稱取重量（W），緩慢的地將其轉(zhuǎn)移到量筒中，測(cè)量初始體積（V1），設(shè)置振動(dòng)頻率100次·min－1，振動(dòng)次數(shù)500次，測(cè)量體積（V2）。計(jì)算堆密度（ρb）和振實(shí)密度（ρbt）：ρb＝W/V1；ρbt＝W/V2。

休止角反映粉粒間動(dòng)態(tài)的摩擦系數(shù)大小，休止角越大，摩擦系數(shù)越大，粉末的流動(dòng)性越差。Tanθ＝H/R，其中為θ為休止角，R為圓錐形樁的半徑，H為圓椎形樁的高度。結(jié)果如表6所示，3批自制批的混粉均具有良好的流動(dòng)性（休止角＜30°，卡爾指數(shù)≤12）。

表6 粉末流動(dòng)性評(píng)價(jià)結(jié)果Tab 6 Powder blending

2.3.2 物理特性檢測(cè) 按照“2.2.3”項(xiàng)下處方優(yōu)化工藝，自制3批苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片，對(duì)該口腔崩解片的崩解時(shí)限、硬度、脆碎度、含量等特性進(jìn)行考察，同時(shí)對(duì)苦味水平進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果見表7。結(jié)果顯示口腔崩解片外觀光滑、平整，3批自制片批間差異較小，無苦味，各參數(shù)均在范圍內(nèi)，能夠達(dá)到苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的制備要求。

表7 自制苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的物理特性及含量測(cè)定結(jié)果Tab 7 Physical property and content of rizatriptan benzoate orally disintegrating tablet

2.3.3 體外溶出檢測(cè) 采用溶出測(cè)定第二法（槳法），分別以0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液、水為溶出介質(zhì)，溫度（37±2）℃，攪拌漿轉(zhuǎn)速75 r·min－1，分別于2、5、10、15、30 min取樣5 mL，同時(shí)補(bǔ)充等量同溫的溶出介質(zhì)，測(cè)定自制批口腔崩解片溶出度，結(jié)果如圖2所示。3批自制批藥物的溶出率均大于85%，且批間差異較小，藥物溶出快。

圖2 不同介質(zhì)中體外溶出曲線對(duì)比（n＝6）Fig 2 In vitro dissolution profiles in different media（n＝6）

2.4 初步穩(wěn)定性研究

將片劑包裝在玻璃小瓶中，在溫度（40.0±2）℃、濕度（75±5）%恒溫恒濕箱中考察3個(gè)月，分別于0、1、2、3個(gè)月取樣檢測(cè)片劑外觀性狀、崩解時(shí)限、含量和體外藥物溶出度等，結(jié)果見表8。在儲(chǔ)存過程中，片劑的外觀性狀、體外崩解時(shí)限、藥物含量和藥物溶出度均無顯著性差異，表明該口腔崩解片的穩(wěn)定性良好。

表8 加速條件下的穩(wěn)定性考察結(jié)果Tab 8 Stability under accelerated conditions

3 結(jié)論

本研究通過研磨法制備苯甲酸利扎曲普坦包合物，結(jié)果表明苯甲酸利扎曲普坦與HP-β-CD的摩爾比為1∶3時(shí)所制的包合物無苦味，證明包合能遮蓋苯甲酸利扎曲普坦的不良味道。苯甲酸利扎曲普坦用于治療急性偏頭痛，吸收速率越快越有利于發(fā)揮其功效，自制苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片的崩解速度快、掩味效果好、服用方便，能更快地發(fā)揮藥效。硬度是影響崩解速度和溶出度的重要因素，而崩解速度和溶出度會(huì)對(duì)生物利用度產(chǎn)生影響，崩解時(shí)限與片劑的機(jī)械強(qiáng)度成正比，為加快口腔崩解片的崩解，通常將硬度設(shè)計(jì)較低?？谇槐澜馄睦硐氡澜鈺r(shí)限通常不大于1 min，因此需要降低生產(chǎn)的硬度，但硬度過小在生產(chǎn)中會(huì)遇到一些挑戰(zhàn)，因此口腔崩解片的制備工藝須在機(jī)械強(qiáng)度和崩解時(shí)限之間進(jìn)行平衡。本實(shí)驗(yàn)通過BBD實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇填充劑、崩解劑和黏合劑為影響因素對(duì)口腔崩解片的硬度和崩解時(shí)限進(jìn)行優(yōu)化，選擇最優(yōu)的處方。根據(jù)優(yōu)化處方制備的苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片，粉末流動(dòng)性良好，工藝穩(wěn)定，所得崩解片的溶出度高，穩(wěn)定性良好，可為苯甲酸利扎曲普坦口腔崩解片制備提供參考。