3種測(cè)定輸血器中鄰苯二甲酸二乙酯溶出量方法比較

蘭婉玲，劉興蘭，朱 茜，高小艷，游延軍，張 磊

（四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，四川 成都 610097）

一次性使用輸血器多采用聚氯乙烯（PVC）材料，PVC類(lèi)產(chǎn)品在加工中均會(huì)加入一定量增塑劑，現(xiàn)臨床使用的增塑劑多為鄰苯二甲酸二乙酯（DEHP），部分增塑劑可能溶出并進(jìn)入血液中[1]?，F(xiàn)行一次性使用輸血器標(biāo)準(zhǔn)GB8369-2005[2]中并未制訂DEHP溶出量的檢測(cè)方法，GB14232.1-2004[3](“傳統(tǒng)型血袋”標(biāo)準(zhǔn))中對(duì)血袋DEHP有測(cè)定方法和限度要求。YY/T 0927-2014[4]指南中提到，可采用氣相色譜（GC）法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）法、紫外-可見(jiàn)分光光度（UV）法檢測(cè)DEHP的溶出量[5-9]。本研究中采用上述3種檢測(cè)方法，對(duì)四川省評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)的8家企業(yè)一次性使用輸血器中增塑劑DEHP的溶出量進(jìn)行測(cè)定，為增修輸血器中DEHP的檢測(cè)方法提供參考，并可推廣到所有含DEHP增塑劑輸液輸血類(lèi)產(chǎn)品中DEHP溶出量的測(cè)定。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

Carry 100型紫外分析儀（美國(guó)Varian公司）；GC-2010型氣相色譜儀（日本Shimadzu公司）；Thermo Trace GC Ultra/Tsq Quantum Xls型氣相色譜-質(zhì)譜儀（美國(guó)Thermo Fisher公司）；一次性使用輸血器（國(guó)內(nèi)8家生產(chǎn)企業(yè)，42批次，詳見(jiàn)表 1）。

表1 試驗(yàn)用輸血器來(lái)源

1.2 試劑

DEHP對(duì)照品（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號(hào)為C16173000，含量為98.5% ）；甲醇、乙醇、正己烷為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外-可見(jiàn)分光光度法

2.1.1 測(cè)定波長(zhǎng)

經(jīng)全波長(zhǎng)掃描，確定測(cè)定波長(zhǎng)為272 nm。

2.1.2 溶液制備

取DEHP對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，以無(wú)水乙醇制成對(duì)照品溶液。用質(zhì)量濃度為0.937 3～0.937 8 g/mL的乙醇作為浸提液，取適量，分別加入3支輸血器中（加至約總?cè)萘康?0%），在37℃下浸泡1 h，取出，收集浸提液混合，搖勻，即得供試品溶液。以乙醇作為陰性對(duì)照溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性考察：取2.1.2項(xiàng)下3種溶液各適量，按2.1.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。詳見(jiàn)圖1。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與DEHP對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明專(zhuān)屬性良好。

線(xiàn)性關(guān)系考察：取DEHP對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，取無(wú)水乙醇制成質(zhì)量濃度為 119.200，59.590，35.760，23.837，11.920 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，精密量取10 μL，按2.1.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄吸光度。以DEHP 質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y1=0.003 1X1-0.000 6，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，DEHP 質(zhì)量濃度在11.92～119.20μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.1.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按2.1.1項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄吸光度。結(jié)果的RSD為2.90%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.1.2項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)為151011）適量，分別于室溫下放置 0，10，20，24，48 h 時(shí)按2.1.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄吸光度。結(jié)果的RSD為3.28%（n=5），表明供試品溶液室溫放置48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取樣品（批號(hào)為151011）適量，按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄吸光度并計(jì)算含量。結(jié)果的RSD為4.68%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2 GC法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5 柱（30 m ×0.32 mm，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度90℃，以20℃ /min的速率升溫至200℃、保持1 min，以20℃ /min的速率升溫至240℃、保持2min，以20℃/min的速率升溫至270℃，保持2min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：280℃；進(jìn)樣量：1.0μL。

2.2.2 溶液制備

取DEHP對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置50 mL容量瓶中，加正己烷定容，即得質(zhì)量濃度為595.925 μg/mL的對(duì)照品溶液。以正己烷作為陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性考察：取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液和2.1.2項(xiàng)下供試品溶液各適量，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。詳見(jiàn)圖2。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與DEHP對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明專(zhuān)屬性良好。

圖1 紫外-可見(jiàn)分光光譜圖

圖2 氣相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察：取DEHP對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加正己烷制成質(zhì)量濃度為 119.200，59.590，35.760，23.837，11.920 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，精密量取1 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以DEHP 質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y2=1 097.5X2-3 127.1，r=0.999 6(n=5)。結(jié)果表明，DEHP 質(zhì)量濃度在11.920～119.200 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為1.73%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為151011）適量，共6份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的DEHP對(duì)照品溶液，按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 GC加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.3 GC/MS法

2.3.1 試驗(yàn)條件

色譜柱：TR-5MS 柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；離子源溫度：230℃；電子能量：70 eV；程序升溫：初始溫度150℃、保持1 min，再以20℃ /min的速率升溫至280℃、保持7 min；進(jìn)樣口溫度：280℃；進(jìn)樣體積：1 μL；測(cè)定方式：SIM 定量；定量離子：m/z149。

2.3.2 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液和2.1.2項(xiàng)下供試品溶液各適量，按2.3.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄質(zhì)譜圖。詳見(jiàn)圖3。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在與DEHP對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明專(zhuān)屬性良好。

線(xiàn)性關(guān)系考察：取DEHP對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，取正己烷制成質(zhì)量濃度為 2.38，1.19，0.60，0.06，0.03μg/mL的系列對(duì)照品溶液，精密量取1μL，按2.3.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度。以DEHP質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、離子信號(hào)強(qiáng)度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y3=2×106X3+7 713.5，r=0.999 7(n=5)。結(jié)果表明，DEHP質(zhì)量濃度在0.03～2.38 μg/mL范圍內(nèi)與離子信號(hào)強(qiáng)度線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖3 氣相色譜-質(zhì)譜圖

精密度試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按2.3.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度。結(jié)果的RSD為3.07%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為151011）適量，共6份，分別加入一定質(zhì)量濃度的DEHP對(duì)照品溶液，按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.3.1項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄離子信號(hào)強(qiáng)度并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4 樣品測(cè)定

取42批樣品各適量，分別按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按上述3種試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3次，計(jì)算樣品含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

一次性使用輸血器里DEHP的溶出量是與輸血器PVC粒料中DEHP的加入量有關(guān)，不同企業(yè)的輸血器產(chǎn)品配方不完全一樣，由本研究結(jié)果可知，8家企業(yè)的DEHP增塑劑加入比例差異不大。

采用同一個(gè)對(duì)照品，3種不同測(cè)定方法測(cè)定同一供試品溶液，UV法測(cè)試的數(shù)據(jù)與GC和GC/MS法的結(jié)果差異較大。分析原因大致如下：鄰苯二甲酸酯是一類(lèi)增塑劑，其結(jié)構(gòu)相似，DEHP及其他鄰苯二甲酸酯類(lèi)成分在272 nm[4]波長(zhǎng)處均有吸收，測(cè)定結(jié)果為在272 nm波長(zhǎng)處有紫外吸收的所有成分，故導(dǎo)致UV檢測(cè)結(jié)果虛高。

表3 GC/MS加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表4 8家生產(chǎn)企業(yè)一次性使用輸血器中DEHP溶出量試驗(yàn)結(jié)果

在GC和GC/MS法中，首先，兩者對(duì)供試品的分離行為是一致的，MS采用了高速電子束撞擊氣態(tài)分子，把電離出來(lái)的離子加速導(dǎo)入質(zhì)量分析器中，然后按碎片離子的質(zhì)荷比大小順序進(jìn)行收集和記錄，得MS圖，可以定性和定量，可以分離與DEHP類(lèi)似成分的其他鄰苯二甲酸酯成分，增加了鑒定功能。只要GC優(yōu)化色譜條件，樣品中物質(zhì)分離度好，GC與GC/MS的結(jié)果基本一致。氣相色譜儀比氣相色譜/質(zhì)譜儀價(jià)格便宜很多，氣相色譜儀的普及度要高于質(zhì)譜，可在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定采用GC/MS法用于鑒定存在鄰苯二甲酸酯類(lèi)的化合物，從檢測(cè)限分析，建議測(cè)定常量采用GC法，測(cè)定遷移量微量采用GC/MS法。

據(jù)文獻(xiàn)[10-16]報(bào)道，DEHP增塑劑具有生殖毒性、致癌和致畸性，對(duì)血液系統(tǒng)有影響，有肝臟毒性。所以在使用以DEHP為增塑劑的PVC產(chǎn)品時(shí)，往往需要控制DEHP加入量，以控制產(chǎn)品中DEHP的溶出量。紫外-可見(jiàn)分光光度法在安全性評(píng)價(jià)上可作為一個(gè)警示，具體精準(zhǔn)分析還需采用GC法和GC/MS法的數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。

臨床目前使用的輸液器、輸血器及血袋產(chǎn)品大多為以DEHP為增塑劑的PVC材質(zhì)的產(chǎn)品，現(xiàn)行有效的血袋標(biāo)準(zhǔn)（GB14232.1-2004標(biāo)準(zhǔn)方法）的測(cè)定方法為紫外-可見(jiàn)分光光度法，輸血器（GB8369-2005）和輸液器（GB8368-2005）在標(biāo)準(zhǔn)中并未設(shè)置DEHP的指標(biāo)，本研究中僅以一次性使用輸血器為例說(shuō)明，結(jié)果3種方法下DEHP遷移量出現(xiàn)完全不同的結(jié)果，建議在輸血器和輸液器標(biāo)準(zhǔn)中以適宜的方法增加DEHP遷移量的指標(biāo)控制，修訂血袋中DEHP對(duì)應(yīng)的方法和指標(biāo)，真實(shí)地反映產(chǎn)品特性和產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)，以免虛高的數(shù)據(jù)引起老百姓對(duì)使用產(chǎn)品的恐慌，造成不必要且不良的社會(huì)影響。