決明子水煎提取工藝優(yōu)化及其顆粒劑中指標(biāo)成分量值轉(zhuǎn)化研究*

薛佩蕓 ，陳 萍 ，2，郭 冬

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046； 2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003）

決明子為豆科決明屬植物決明Cassia obtusifoliaL.或小決明Cassia toraL.的干燥成熟種子，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，稱(chēng)之“能治諸眼疾，久眼益精光，輕身”。決明子味甘、苦、咸，性微寒，歸肝、大腸經(jīng)，有清熱明目、潤(rùn)腸通便功效[1]，主要用于治療目赤腫痛、畏光多淚、頭痛眩暈、視暗不明、大便秘結(jié)等癥，也是防治肥胖癥、高脂血癥、便秘等的藥食兩用佳品[2-5]。由于市場(chǎng)上其配方顆粒存在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不明確、質(zhì)量不均一、劑量不統(tǒng)一等問(wèn)題[6]，現(xiàn)通過(guò)L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化決明子水煎提取工藝條件，以出膏率、橙黃決明素及大黃酚含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立其含量測(cè)定方法，開(kāi)展配方顆粒制備工藝研究，比較飲片-提取液-干粉-配方顆粒間指標(biāo)成分量值轉(zhuǎn)化的相關(guān)性，探索配方顆粒質(zhì)量一致性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BT25S型電子分析天平、BS210S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器<北京>有限公司）；ZLG型中藥浸膏專(zhuān)用離心噴霧干燥機(jī)（浙江錢(qián)江偉岸干燥設(shè)備有限公司）；GZL100-25L型干法制粒機(jī)（石家莊科源機(jī)械設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

橙黃決明素對(duì)照品（批號(hào)為111900-201605，含量為98.3%）、大黃酚對(duì)照品（批號(hào)為110796-201621，純度為99.2%），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；磷酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；水為純凈水，其他試劑均為分析純。決明子飲片 3批（批號(hào)分別為 171002，171201，180401）均購(gòu)于陜西興盛德中藥飲片有限公司，經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院楊智峰教授鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Welchrom C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B），梯度洗脫，0～15 min（38%A），15～30 min（38%A→90%A），30～40 min（90%A），40～45 min（90%A → 38%A）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2 溶液制備

混合對(duì)照品溶液：取橙黃決明素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品各適量，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1，V∶V）溶液，制成每 1 mL 含橙黃決明素 131.65 μg、大黃酚246.80 μg的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液：稱(chēng)取決明子飲片（批號(hào)為171002）9份（1～9號(hào)），每份50.0 g，按正交試驗(yàn)方案進(jìn)行提取，定容至1 000 mL；精密吸取1～9號(hào)水煎液各20 mL，加鹽酸1.0 mL，水浴加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1，V/V）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中并定容，搖勻，濾過(guò)，即得。

陰性對(duì)照溶液：精密吸取水20 mL，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法“加鹽酸1.0 mL”起同法制備。

2.1.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：分別精密吸取2.1.2項(xiàng)下3種溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果橙黃決明素和大黃酚峰的保留時(shí)間分別為18.436，31.877 min，分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于7 800，拖尾因子為0.95～1.05。詳見(jiàn)圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.1.2項(xiàng)下對(duì)照品0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置 10 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1，V/V）溶液定容，精密吸取10 μL，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，重復(fù)2次。以各成分的峰面積平均值（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得橙黃決明素回歸方程為Y1=79.628 39X1-36.251 51，R2=0.999 96（n=6），質(zhì)量濃度線性范圍為1.3165～32.9125μg/mL；大黃酚回歸方程為Y2=25.758 86X2-20.043 53，R2=0.999 96（n=6），質(zhì)量濃度線性范圍為2.468 0～61.700 0 μg/mL。

精密度試驗(yàn)：精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果橙黃決明素及大黃酚峰面積的RSD分別為0.23%及0.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別精密吸取同一供試品(批號(hào)為171002)溶液10 μL，室溫下按2.1.1項(xiàng)下色譜條件分別于 0，2，4，8，12，20，24 h 時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果橙黃決明素及大黃酚峰面積的RSD分別為0.79%及0.96%（n=7），表明供試品溶液室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品(批號(hào)為 171002)水煎液6份，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果橙黃決明素及大黃酚峰面積的RSD分別為1.48%及2.71%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的同一樣品水煎液（含量：橙黃決明素0.073%，大黃酚0.028%）6份，每份5 mL，分別精密加入適量橙黃決明素對(duì)照品及大黃酚對(duì)照品，以2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 出膏率測(cè)定

精密吸取1～9號(hào)水煎液100 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于烘箱105℃干燥至恒重，冷卻后迅速精密稱(chēng)定，計(jì)算出膏率：出膏率y（%）=（m1/100×V）/m2×100%（m1為干浸膏質(zhì)量，V為樣品溶液體積，m2為飲片質(zhì)量）。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3 提取工藝優(yōu)化

2.3.1 單因素試驗(yàn)

吸水率：稱(chēng)取決明子飲片（批號(hào)為171002）2份，每份50.0 g，置燒杯中，加水至剛好沒(méi)過(guò)飲片（約200 mL），計(jì)時(shí)，隨時(shí)觀察，3 h內(nèi)每間隔20 min計(jì)量1次，計(jì)算吸水率，結(jié)果為80.0%，故在煎煮前應(yīng)浸泡1 h左右，故選擇0，30，60 min作為正交試驗(yàn)浸泡時(shí)間。繼續(xù)浸泡過(guò)夜，得吸水率為200.0%，則最少應(yīng)加水5倍，故選擇加水量6，8，10倍作為正交試驗(yàn)加水量因素的3個(gè)水平。

提取時(shí)間：稱(chēng)取決明子飲片（批號(hào)為171002）6份，每份50.0 g置圓底燒瓶中，加入10倍量純化水，分別加熱回流 30，60，90，120，150，180 min，濾過(guò)，合并濾液，以水定容至500 mL。按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液制備項(xiàng)下方法“精密吸取1～9號(hào)水煎液各20 mL”起，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定；按2.2項(xiàng)下方法計(jì)算出膏率，結(jié)果90 min后最高，橙黃決明素及大黃酚含量均趨于穩(wěn)定，故選擇回流60，90，120 min作為正交試驗(yàn)提取時(shí)間因素的3個(gè)水平。

2.3.2 正交試驗(yàn)

因素水平：以預(yù)試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，并以出膏率及橙黃決明素和大黃酚含量為考察指標(biāo)，選擇浸泡時(shí)間（因素A）、加水量（因素B）、提取時(shí)間（因素C）及提取次數(shù)（因素D）作為影響因素進(jìn)行工藝優(yōu)化[7-9]，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 因素水平表

正交設(shè)計(jì)及結(jié)果：采用L9（34）正交設(shè)計(jì)表優(yōu)化提取工藝，試驗(yàn)安排及結(jié)果見(jiàn)表3。

方差分析：出膏率影響因素影響強(qiáng)度為D>B>C>A，其中因素D具有顯著性，最佳條件為A3B3C2D3；由于A無(wú)顯著性，綜合考慮選擇A2，因此確定最優(yōu)組合為A2B3C2D3，即浸泡0.5 h，加10倍量水，煎 3次，每次 1.5h。方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

驗(yàn)證試驗(yàn)：稱(chēng)取決明子飲片3份，每份50.0 g，依據(jù)最佳工藝條件A2B3C2D3進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果見(jiàn)表5，可見(jiàn)，該提取工藝穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。

2.4 配方顆粒制備及中試數(shù)據(jù)[10-13]

取3批決明子飲片各10.0 kg，加入10倍量水浸泡0.5 h，煎煮1.5 h，濾過(guò)，藥渣再加入10倍量水，煎煮1.5 h，濾過(guò)，合并濾液，于60℃減壓濃縮至相對(duì)密度為1.04～1.31 g/mL后進(jìn)行噴霧干燥，得噴干粉。以噴干粉 -糊精（1∶1，m/m）混合，干法制粒，過(guò) 14目篩整粒，再過(guò)65目篩篩除未成型的粉末進(jìn)行二次制粒。最終得粒度在10～80目的3批決明子配方顆粒。中試數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。

表5 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（%）

表6 配方顆粒中試數(shù)據(jù)結(jié)果（kg）

2.5 指標(biāo)成分量值傳遞

2.5.1 橙黃決明素及大黃酚量值轉(zhuǎn)化

稱(chēng)取飲片0.5 g，精密稱(chēng)定，按2015年版《中國(guó)藥典（一部）》決明子飲片含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備飲片供試品溶液；精密量取提取液20 mL，按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備項(xiàng)下方法“加鹽酸1.0 mL”起同法制備提取液供試品溶液；稱(chēng)取干粉配方顆粒各0.2 g，精密稱(chēng)定，加入10 mL熱水，超聲處理30 min，按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液制備項(xiàng)下方法“加鹽酸1.0 mL”起分別同法制備干粉供試品溶液和配方顆粒供試品溶液。取各供試品溶液適量，按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定橙黃決明素及大黃酚含量及轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 飲片→中間體→配方顆粒指標(biāo)成分量值轉(zhuǎn)化結(jié)果（%）

2.5.2 量值轉(zhuǎn)化分析

假設(shè)成型工藝研究中各環(huán)節(jié)中無(wú)損失，比較決明子飲片-提取液-干粉-配方顆粒間指標(biāo)成分量值轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。由表7可知，由飲片到配方顆粒成品，橙黃決明素總轉(zhuǎn)移率約為78%，在制備工藝全過(guò)程中橙黃決明素含量較穩(wěn)定，轉(zhuǎn)移率高，一致性好；大黃酚總轉(zhuǎn)移率在13%左右，主要由于飲片→提取液大黃酚轉(zhuǎn)移率較低（約15%）。綜上所述，決明子飲片-提取液-干粉-配方顆粒間指標(biāo)成分的量值轉(zhuǎn)化過(guò)程較好地保留了原飲片成分。

3 討論

在選擇指標(biāo)成分時(shí)，參考2015年版《中國(guó)藥典（一部）》，以橙黃決明素及大黃酚作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，飲片→提取液→干粉→配方顆粒間橙黃決明素及大黃酚含量考察，水煎工藝大黃酚損失大，確定以橙黃決明素、出膏率作為配方顆粒質(zhì)量控制指標(biāo)。

本試驗(yàn)中考察了淀粉、糊精2種輔料，結(jié)果糊精比淀粉流動(dòng)性、成型性更好，不易吸濕，故選擇糊精作為輔料。通過(guò)干粉與糊精比例多次配伍考察，最終確定干粉比糊精（1 ∶1，m/m）制粒，效果最佳。

量值轉(zhuǎn)化將傳統(tǒng)的中藥湯劑制備成中藥配方顆粒后，由于劑型發(fā)生明顯改變，可能影響指標(biāo)成分的量值轉(zhuǎn)化。本研究中通過(guò)考察飲片-提取液-干粉-配方顆粒中指標(biāo)成分的量值轉(zhuǎn)化，追溯各工藝過(guò)程中指標(biāo)成分的含量及轉(zhuǎn)移率，評(píng)價(jià)了配方顆粒制備工藝的均一性，也為配方顆粒替代傳統(tǒng)湯劑研究提供了借鑒。