耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾的影響

劉曉斌，馬俊杰，王華民，李斌峰，馬珍珍，郝少君，孫建華，張正臣

0 引言

耳復(fù)康口服液系我院院內(nèi)制劑，組方由人參、紅花、酸棗仁、骨碎補、路路通、石菖蒲、枸杞、麥冬等組成，臨床應(yīng)用效果良好。研究顯示，耳復(fù)康口服液可改善腎上腺素致小鼠微循環(huán)障礙，對腎上腺素致急性血瘀癥小鼠微循環(huán)障礙模型毛細血管開放數(shù)及血流情況有很好的改善作用，可改善慶大霉素致聾豚鼠的聽力障礙[1-4]，而其對順鉑所致豚鼠耳聾是否存在保護作用，其機制如何，值得進一步研究。本文探討耳復(fù)康口服液對順鉑所致豚鼠耳聾的影響，為耳復(fù)康口服液在臨床上治療耳鳴耳聾提供實驗依據(jù)[5-7]。

1 實驗材料

1.1 藥品及試劑 耳復(fù)康口服液，由人參、紅花、川芎、麝香、酸棗仁、石菖蒲、骨碎補、路路通、杞果、麥冬組成；功能主治：益氣活血化瘀、醒腦通竅、祛風通絡(luò)、滋陰潛陽。主要用于耳鳴、耳聾及氣虛血瘀性中風；生產(chǎn)廠家：中國人民解放軍第三七一醫(yī)院；用法用量：口服，1～2支/次，3次/d；規(guī)格：10 ml/支；生產(chǎn)批號：20150706。耳聾左慈丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批準文號：國藥準字Z11020011)。豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號：20180101SR)，丙二醛(MDA)測試盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號：20180101SR)。

1.2 儀器 耳聲發(fā)射檢測儀(河南邁松醫(yī)用設(shè)備制造有限公司，注冊證號：豫械注準字20152210139)；順鉑(齊魯制藥有限公司，批準文號：國藥準字H37021358)。

1.3 動物 Hartley豚鼠，雌雄各半，級別：普通級，合格證編號：37009700000359，提供單位：濟南金豐實驗動物有限公司，許可證號：SCXK(魯)20140006，實驗動物使用許可證編號：SYXK(豫)2015-0005。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法 將72只健康豚鼠隨機分為空白組，模型組，陽性(耳聾左慈丸)組，耳復(fù)康大、中、小劑量組，每組12只，除空白組外，其余各組均給予腹腔注射順鉑注射液4 mg/kg，連續(xù)3 d。第4天采用ABR閾值測定對模型復(fù)制情況進行評價。造模成功后，除空白組及模型組外，耳聾左慈丸組給藥劑量2.7 g/kg(相當于人臨床劑量的9倍)，耳復(fù)康大、中、小劑量組給藥劑量18、9、4.5 ml/kg(相當于人臨床劑量的18、9、4.5倍)給予相應(yīng)劑量灌胃給藥，所有組別均每天灌胃給藥，1次/d，各組灌胃均持續(xù)14 d。于末次給藥后取豚鼠耳蝸。表觀指標：聽覺耳動反射；聽力病理指標：耳蝸組織；生化指標：SOD、MDA。

2.2 結(jié)果 聽覺耳動反射又稱普賴厄反射，表現(xiàn)為耳廓豎起以應(yīng)答刺激的聲音。分別于造模后第3天、給藥第14天，距豚鼠30 cm處用力擊掌發(fā)出掌聲作為刺激聲，以此觀察豚鼠耳廓豎起抖動情況。每次檢測擊掌5次，每次擊掌間隔5 s，檢測期間保持周圍環(huán)境安靜無明顯雜音以保證檢測不被影響。按照耳廓豎起抖動的強弱程度，將其強度分為4個等級：陰性(-)：耳廓完全無抖動，耳廓反射消失；弱陽性(+)：耳廓抖動微弱，耳廓反射閾值重度提高；中陽性(++)：耳廓抖動較明顯，耳廓反射閾值輕度提高；強陽性(+++)：耳廓抖動非常明顯，耳廓反射閾值幾乎無變化。

2.2.1 耳復(fù)康口服液對順鉑所致豚鼠耳聾的影響 ①造模后第3天，各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響：各組給予順鉑注射液3 d后，采用聽覺耳動反射(普賴厄反射)觀察豚鼠耳廓豎起抖動情況，結(jié)果見表1。Ridit檢驗顯示，與空白組比較，各組豚鼠耳廓抖動微弱(P<0.01)，說明造模成功。

表1 造模后第3天各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響

②給藥第14天，各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響：各組給予順鉑注射液14 d后，采用聽覺耳動反射(普賴厄反射)觀察豚鼠耳廓豎起抖動情況，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，經(jīng)Ridit檢驗，與空白組相比，模型組動物耳廓反射顯著減弱(P<0.01)，說明模型制作成功。給藥14 d后，與模型組相比，陽性組和耳復(fù)康大、中、小劑量均可顯著改善順鉑致豚鼠聽覺耳動反射情況(P<0.01)。

表2 給藥第14天各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響

2.2.2 耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型TEOAE的影響 與空白組相比，模型組豚鼠總反應(yīng)能量升高，說明模型制作成功(P<0.01)。與模型組相比，陽性組及耳復(fù)康大、中劑量組豚鼠聽力總反應(yīng)能量顯著改善(P<0.01)，耳復(fù)康小劑量組豚鼠聽力總反應(yīng)能量明顯改善(P<0.05)，見表3。

2.2.3 耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型MDA、SOD的影響 與空白組相比，模型組SOD水平降低(P<0.01)，MDA水平升高(P<0.01)，說明模型制作成功。與模型組相比，陽性組及耳復(fù)康大、中劑量組SOD水平升高(P<0.01)，耳復(fù)康小劑量組SOD水平升高(P<0.05)；與模型組相比，陽性組、耳復(fù)康大劑量組MDA水平降低(P<0.01)，耳復(fù)康中、小劑量組MDA水平降低(P<0.05)，見表4。

2.2.4 耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型耳蝸組織病理切片的影響 空白組：毛細胞胞核與細胞漿形態(tài)基本正常，未見病理改變；模型組：毛細胞胞漿空泡樣變，個別細胞固縮；陽性組：毛細胞胞核飽滿，無空泡樣變性，毛細胞未見明顯病理改變；耳復(fù)康大劑量組：毛細胞形態(tài)正常，未見病理改變；耳復(fù)康中劑量組：少量毛細胞胞漿空泡樣變；耳復(fù)康小劑量組：少量毛細胞胞漿空泡樣變，個別細胞固縮。見圖1。

表3 耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型TEOAE的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

表4 耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型MDA、SOD的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

圖1 耳復(fù)康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型耳蝸組織病理切片的影響(HE，400×)

3 討論

順鉑是療效顯著的廣譜化療藥之一，其不良反應(yīng)較大[8-10]。對耳的毒副作用雖然出現(xiàn)較遲[11-13]，但目前沒有較好的防治辦法[14]，因此，探尋克服其耳毒性作用的方法至關(guān)重要。

隨著年齡的增長，體內(nèi)的氧代謝減慢，產(chǎn)生的自由基增多，過多的自由基損傷耳蝸細胞，造成聽力的下降和逐漸消失。在抗氧化酶系統(tǒng)中，SOD是重要的一員，可以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)生的氧自由基，測定血清SOD活性，可以反映機體的自由基清除能力。測定耳蝸SOD活性，可以反映SOD對耳蝸的保護作用。MDA是氧化反應(yīng)產(chǎn)生大量脂質(zhì)過氧化物的重要產(chǎn)物之一，反映機體自由基的生成水平和組織損傷程度，常與SOD共同作為研究自由基的指標。

耳復(fù)康口服液由人參、紅花、麝香、骨碎補、路路通等中藥組成。諸藥合用，具有益氣、活血化瘀、醒腦通竅、祛風通絡(luò)、滋陰潛陽的功效。腎中真陽真陰皆得補益，陽蒸陰化，腎氣充盈，則耳聾自除。本研究結(jié)果顯示，順鉑誘導(dǎo)豚鼠發(fā)生耳聾后，耳復(fù)康口服液的干預(yù)能夠降低模型豚鼠的反應(yīng)[15-18]。耳復(fù)康大、中、小劑量均可顯著改善順鉑致豚鼠聽覺耳動反射情況；3種劑量均可改善豚鼠聽力總反應(yīng)能量，升高血清SOD水平，降低MDA水平，改善耳蝸病理組織。

綜上所述，耳復(fù)康口服液能改善豚鼠聽覺耳動反射，降低血清中MDA水平，提高SOD水平，能改善耳蝸病理組織。初步認為耳復(fù)康口服液能對抗順鉑所致豚鼠耳聾的情況。

致謝：本實驗在河南中醫(yī)藥大學苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝！