新型腫瘤標志物TSGF和Hsp90α與非小細胞肺癌的臨床相關性分析

鄭 爽 金 毅 王 振

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是一種低分化類型的肺癌，其主要特點是增殖速度快，惡性程度高，病變轉(zhuǎn)移早，生存率低，且晚期病變預后極差。近年來，NSCLC的發(fā)生率和病死率均逐年增加[1]。隨著對NSCLC研究的不斷深入，人們開始從不同的領域?qū)SCLC的早期診療進行深入的探索，其中對新型腫瘤標志物的研究也已經(jīng)展開，并取得了初步的研究成果。

熱休克蛋白(heat shock proteins，Hsps)是機體在應激條件下合成的一類蛋白質(zhì)分子。Hsp90是HSP家族的一員，其在細胞中含量豐富。有研究證實，Hsp90可以通過與細胞增殖和凋亡有關的多個受體蛋白來影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[2～4]。研究表明，Hsp90 抑制劑對晚期NSCLC患者具有一定的臨床療效[5]。因而，Hsp90α與NSCLC的關系日益受到人們重視。腫瘤特異性生長因子(tumor specific growth factor，TSGF)是幾種得到國際公認腫瘤標志物之一，其作用是促進腫瘤血管的增生，對惡性腫瘤的血管浸潤起到重要作用[6]。TSGF也是目前使用較多的非器官特異性腫瘤標志物。但目前國內(nèi)對其研究成果十分有限。雖然TSGF和Hsp90α的單項檢測都對肺癌都有一定的診斷價值, 但是，其敏感度和準確性不佳。本研究旨在檢測NSCLC患者血清和病變組織中TSGF和Hsp90α的表達水平，探討二者聯(lián)合檢測的意義及其與NSCLC的病理變化和NSCLC 臨床預后的相關性關系。

對象與方法

1.研究對象:收集2013年6月～2017年6月期間經(jīng)筆者醫(yī)院病理科確診的120例NSCLC 患者的血液樣本和切除的肺部病變標本，并選擇50例同期肺部良性病變患者的血液樣本以及30例健康體檢者的血液樣本。采集樣本前，所有患者均未接受其他方案的治療。

2.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)：所有患者空腹，采集靜脈血3ml，離心后，留取出上清液，并將其保存在-20°C的冰箱中備用。采用貝克曼DXC800全自動生化分析儀對上述血清進行酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測。根據(jù)ELISA 試劑盒(TSGF試劑盒由瑞典CanAg公司提供，Hsp90α試劑盒由廈門慧嘉生物科技有限公司提供)的使用說明書所要求的步驟，測定受試者血清樣品中TSGF和Hsp90α的水平。所有操作均在嚴格質(zhì)控下完成。

3.免疫組化染色:肺部病變標本以10%的中性甲醛溶液固定，常規(guī)進行石蠟包埋，連續(xù)切片；二甲苯脫蠟、水化、抗原修復后，進行免疫組化染色。以細胞質(zhì)或細胞膜出現(xiàn)黃至棕褐色顆粒顯色為TSGF和Hsp90α陽性[7]。

4.病例隨訪：通過電話、微信、QQ留言等形式對所有患者進行隨訪，并將患者的所有資料進行記錄和備案?；颊叩纳嫫谑侵笍氖中g(shù)之日到隨訪截止之日(2017年6月30日)或患者死亡之日為止。

5.統(tǒng)計學方法：采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料作χ2檢驗，采用Kaplan-Meier生存曲線法及Log-rank檢驗記錄生存率,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1.各組受試者TSGF和Hsp90α的水平:在NSCLC 患者中，TSGF和Hsp90α的測定值分別為736.38±114.03和241.50±92.14；肺部良性病變的測定值分別為105.22±13.56和75.35±13.10；健康體檢者的測定值分別為24.14±10.13和49.35±12.11。與健康體檢者和肺部良性病變患者比較，NSCLC 患者的TSGF和Hsp90α水平均顯著升高(P<0.05)，詳見表1。

表1 各組受試者TSGF和Hsp90α的水平

與健康體檢者比較，*P<0.05，**P<0.01；與肺部良性病變患者比較，#P<0.05，##P<0.01

2.NSCLC 患者TSGF和Hsp90α水平與病理特征關系:TSGF的水平與NSCLC 的臨床分期和淋巴結(jié)(LN)轉(zhuǎn)移密切相關(P<0.05)；Hsp90α 的水平與所觀察的指標無相關性(P>0.05)，詳見表2。

3.NSCLC 患者TSGF和Hsp90α水平與生存期的關系:生存曲線分析結(jié)果顯示,TSGF陽性的患者較陰性的患者生存時間更短(P<0.01,圖1)，Hsp90α陽性的患者也較陰性的患者生存時間短(P<0.05,圖2)，提示TSGF和Hsp90α水平與NSCLC患者的術(shù)后生存期有關。

表2 NSCLC 患者TSGF和Hsp90α水平與病理特征關系

圖1 TSGF陽性患者的表達水平與患者生存曲線

圖2 Hsp90α陽性患者的表達水平與患者生存曲線

4.在NSCLC組織中TSGF和Hsp90α水平的相關性:在120例NSCLC中， TSGF陽性的NSCLC 有98例，其中Hsp90α水平陽性57例，Hsp90α水平陰性41例；TSGF陰性的NSCLC 有22 例，其中Hsp90α水平陽性9例，Hsp90α水平陰性13 例(χ2=9.1432，P<0.05，r=0.272)。TSGF水平與Hsp90α水平呈正相關(P<0.05)。

討 論

肺癌是目前世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一。調(diào)查顯示，2002年全球男性肺癌的發(fā)生率和病死率分別為35.5/10萬和21.2/10萬，占惡性腫瘤發(fā)病和死亡構(gòu)成比分別為16.6%和22.3%，對患者的生命健康造成威脅[8]。其中，非小細胞肺癌的發(fā)生率約占肺癌總?cè)藬?shù)的80%[9]。HSP蛋白通常以分子伴侶的形式參與相關蛋白的折疊、裝配、細胞內(nèi)運輸及蛋白質(zhì)降解等的過程。有研究證實，在應激環(huán)境下，熱休克蛋白可以迅速升高，以維持細胞的穩(wěn)定性，進而促進細胞的增殖[10～13]。隨著分子生物學的發(fā)展，人們對HSP的結(jié)構(gòu)和功能有了更深入的了解，HSP與腫瘤的關系也得到了越來越多的研究人員的研究和探討。近年來，諸多研究顯示，Hsp90與肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程息息相關[14～16]。另一項大樣本病例研究顯示，肺癌患者的血漿Hsp90水平顯著高于健康者，且該水平會隨著疾病的進展進一步升高[17]。因此，筆者推測Hsp90抑制劑可在治療非小細胞肺癌中顯示出高效的臨床治療效果[18]。此外，有研究證實，TSGF是數(shù)種國際公認的與惡性腫瘤生長相關的糖類物質(zhì)和代謝物(脂蛋白、酶、氨基酸)的統(tǒng)稱，可以作用于惡性腫瘤的血管，對腫瘤周邊毛細血管的增生產(chǎn)生一定的影響，進而會對腫瘤的生長起作用，在對腫瘤的診斷和治療過程中具有較高的指導價值[19，20]。

本研究采用ELISA法對非小細胞肺癌患者的血清和腫瘤組織中TSGF和Hsp90α 的水平進行檢測。結(jié)果顯示，非小細胞肺癌組織中TSGF的水平與NSCLC 的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和術(shù)后生存期具有相關性(P<0.05)。且TSGF的水平與NSCLC 的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和術(shù)后生存期具有相關性(P<0.05)。更為重要的是，筆者還發(fā)現(xiàn)TSGF和Hsp90α的水平呈正相關(P<0.05)，提示在非小細胞肺癌的早期診療過程中，進行血清TSGF和Hsp90α的聯(lián)合檢測有望對疾病的早期確診提供一項更加經(jīng)濟、便利且可靠的檢查手段。