葉面噴施硒對蘿卜硒吸收及抗氧化能力的影響

朱磊　胡婷　劉德明　向昌國

摘要：以華靈高科筍都四季滿身紅蘿卜為試驗材料，采用盆栽試驗，設置6個施硒組分（0、0.5、2.5、10.0、20.0、40.0 mg/L）分別在葉旺盛生長期、塊根膨大期、成熟期葉面噴施亞硒酸鈉，研究葉面施硒濃度對蘿卜生長、硒吸收和轉化、硒形態(tài)分布以及對蘿卜抗氧化能力的影響。結果表明，2.5 mg/L硒處理提高了蘿卜果實產(chǎn)量，40.0 mg/L硒處理對蘿卜果實生長具有抑制作用。隨著葉面施硒濃度增加，蘿卜葉子和果實中硒含量顯著增加，且含量最高分別達到637、0.63 mg/kg。硒在蘿卜葉子中主要以硒代蛋氨酸（SeMet）形式存在，含量為1.51 mg/kg;蘿卜果實中硒主要以硒代胱氨酸（SeCys2）存在，含量為0.29 mg/kg。與對照組相比，2.5 mg/L處理組谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性增加了106.26%（P<0.05），過氧化物酶（POD）活性增加了14.87%（P<0.05），超氧化物歧化酶（SOD）活性無顯著變化。適宜濃度的外源施硒能夠增加蘿卜產(chǎn)量、提高蘿卜硒含量和增強抗氧化能力。因此，葉面施硒濃度2.5 mg/L為蘿卜最佳施用量。

關鍵詞：亞硒酸鈉;蘿卜;硒形態(tài);抗氧化能力;葉面噴施

中圖分類號： S631.106? 文獻標志碼： A? 文章編號：1002-1302（2019）03-0127-05

硒是人體所必需的微量元素之一[1]，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、增強人體免疫力和拮抗重金屬等生理功能[2-4]。人體缺硒會導致多發(fā)性硬化癥、肌肉萎縮癥、心臟病、免疫系統(tǒng)受損、癌癥和生殖系統(tǒng)疾病等[5]。全球約有29個國家存在缺硒現(xiàn)象[6]，我國有約72%的地區(qū)屬于缺硒地區(qū)，約7億人口有著不同程度的硒攝入量不足的情況[7]。中國營養(yǎng)學會規(guī)定成年人膳食硒攝入量最少為40 μg/d，可耐受最大量為 400 μg/d[8]。

硒不是高等植物所必需的微量元素，但適宜濃度的硒能促進植物生長[9]。適宜濃度的外源施硒能夠促進十字花科植物生長，提高產(chǎn)量，硒濃度過高會對植物產(chǎn)生毒害作用，抑制植物生長[10-12]。這可能是適宜濃度補硒增加了植物對硫元素的的吸收轉運、抗氧化活性，減少了脂質過氧化和食草性昆蟲對植物的迫害[13-15]。硒對植物的毒域范圍取決于物種和環(huán)境，影響植物吸收硒能力的主要因素是基因遺傳其次是非生物因素，如環(huán)境條件（微生物群落）和硫、氮等元素之間的相互作用[16]。硒能夠參與合成硒代半胱氨酸且是一些硒蛋白酶的活性中心[17]。谷胱甘肽過氧化物酶能夠通過降低過氧化氫、有機氫過氧化物、磷脂有機過氧化物含量來增強植物抗氧化能力[18]。研究發(fā)現(xiàn)，適宜濃度外源硒能夠提高植物谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）等抗氧化酶活性從而增強植物的抗氧化能力，防止細胞氧化損傷[19-21]。

近年來，以植物為基料作為富硒源是一種較為安全的補硒方式，植物通過吸收和轉化將無機硒轉為人體能夠吸收的安全有效的有機硒，從而滿足人體日常膳食需求。有研究表明，富硒土壤地區(qū)生長的植物未達到富硒標準可能是土壤本底重金屬含量過高拮抗硒的吸收、土壤中硒活化率較低、不同物種對硒的吸收能力差異等因素造成的[22-24]。蔬菜是人類日常膳食最常見的食物，其中十字花科類的蔬菜具有較強的富硒能力，如芥菜、小白菜、蘿卜等。蘿卜（Raphanus sativus L.）屬一、二年生蔬菜作物，南北方皆可栽培，為重要的經(jīng)濟作物，葉果皆可食用。以蔬菜作為人類補硒來源，研究其對硒的吸收轉化和抗氧化能力，具有非常大的科學意義。

基于植物在天然富硒地區(qū)對硒的吸收效率較低的現(xiàn)象，本研究通過葉面噴施硒來干預富硒地區(qū)植物對硒吸收及利用效率，揭示葉面施硒對蘿卜根際根圍土壤中硒的動態(tài)分布的影響以及硒對蘿卜生長、硒吸收與轉化及抗氧化能力的影響。本試驗通過對蘿卜葉面噴施不同濃度梯度的亞硒酸鈉的方式，探究外源施硒對蘿卜生長、硒吸收轉化和抗氧化能力的影響，從而確定最佳葉面施硒濃度，為富硒蘿卜生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料為盆栽蘿卜（Raphanus sativus L.），品種為華靈高科筍都四季滿身紅。盆栽土壤采自湖南省張家界市永定區(qū)富硒地區(qū)[25]，土壤本底全硒含量為1.67 mg/kg。

1.2 試驗設計

盆栽試驗于2017年10月至2018年1月在張家界市永定區(qū)林產(chǎn)化工工程湖南省重點實驗室進行。試驗共設6個處理，分別為0、0.5、2.5、10.0、20.0、40.0 mg/L，每個處理10個重復。盆栽試驗采用上口內徑為29 cm，下口內徑為19 cm，高為23 cm的不透光圓柱形塑料花盆，每盆裝土10 kg，定苗為4株。分別在蘿卜（葉旺盛生長期、塊根膨大期、成熟期）葉面正反共噴3次亞硒酸鈉溶液，間隔時間為10 d，每次每盆噴施 10 mL，以噴純水為對照組，選陰天或晴天16：00后施硒。2018年1月18日蘿卜成熟，共培養(yǎng)90 d，每盆選擇2株代表性植株，整株收獲。用蒸餾水清洗干凈，拍照記錄，以葉子和果實來檢測蘿卜總硒含量、硒形態(tài)和抗氧化能力。

1.3 測定方法

1.3.1 蘿卜總硒含量測定 參照國家標準（GB 5009.93—2017《食品安全國家標準 食品中硒的測定》）將采集到的蘿卜葉子和果實先用自來水充分洗凈后，再用超純水反復沖洗干凈，放入70 ℃烘箱中烘干，粉碎后過60目篩制成樣品，精確稱取0.200 0 g，加6 mL硝酸冷浸過夜，加2 mL H2O2，電熱板上消解至澄清，再加3 mL 6 mol/L鹽酸消解0.5 h。冷卻后從電熱板取下，定容至25 mL容量瓶，利用SA-10氫化物發(fā)生-原子熒光法測定[26]。

1.3.2 土壤總硒含量測定 參照（NY/T 1104—2006《土壤中全硒的測定》）將蘿卜盆栽所用土壤放入70 ℃烘箱中烘干，粉碎后過60 目篩制成樣品，精確稱取0.200 0 g，加5 mL硝酸冷浸過夜，再加 5 mL 高氯酸，電熱板上消解至澄清，再加3 mL 6 mol/L鹽酸消解0.5 h。冷卻后從電熱板取下，定容至25 mL容量瓶，利用SA-10氫化物發(fā)生-原子熒光法測定。

1.3.3 硒形態(tài)測定 參照文獻[27-28]將冷凍干燥后的蘿卜鮮樣粉碎，過60目篩，取0.500 0 g于離心管中，稱取8 mg鏈霉蛋白酶E溶于10 mL水，加入到離心管中，混勻，37 ℃恒溫水浴振蕩提取24 h。上述提取完成，12 000 r/min離心 10 min，取上清液，過0.22 μm有機濾膜，再利用SA-10液相色譜-原子熒光形態(tài)分析儀（HPLC-HG-AFS）進行測定。

1.3.4 抗氧化能力測定 稱取新鮮蘿卜葉3.000 0 g，在冰冷的生理鹽水中漂洗干凈，用濾紙擦干，在冰水浴中剪碎蘿卜葉子，放入研缽，配置30 mL 0.86%冷生理鹽水作為勻漿介質，倒1/3于研缽使蘿卜葉子充分研碎，制成勻漿，再用剩余2/3冷生理鹽水沖洗殘留在研缽上的蘿卜勻漿，得到10%蘿卜葉子勻漿，在3 000 r/min離心15 min取上清液測定谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，分別在412、420、550 nm波長條件下測定其吸光度，顯色過程和計算方法均參照南京建成試劑盒說明方法來進行，以上3種抗氧化酶活性測定均重復3次，結果取平均值。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用軟件Excel 2010、Origin 8.5軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，SAS 9.2 Duncans新負極差法進行多重比較。

轉移系數(shù)（TF）是元素轉移到植物體內及在植株不同部位間轉移的效率。本研究以蘿卜果實和葉片硒含量的比值來表示轉移系數(shù)的大小。蘿卜硒轉移系數(shù)=蘿卜果實硒含量/蘿卜葉片硒含量。

2 結果與分析

2.1 葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜生長發(fā)育的影響

葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜生長的影響結果如圖1所示，結果表明，0（對照組）、0.5、2.5 mg/L硒處理組的蘿卜葉色蔥綠，果實壯碩，長勢較好。而10.0、20.0、40.0 mg/L硒處理組蘿卜葉片微卷，且40.0 mg/L處理組果實矮小，切開果肉發(fā)紫，出現(xiàn)一定的病變癥狀。

葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜生物量的影響如圖2所示，結果表明，與對照組相比，0.5、2.5 mg/L硒處理組果實生物量有一定的提高，分別增加了7.49%、7.61%;40.0 mg/L硒處理組果實的生物量降低了38.91%，但與對照差異不顯著。隨著葉面噴施亞硒酸鈉的濃度增加，蘿卜葉生物量無顯著變化，但蘿卜果實生物量呈降低趨勢，且40.0 mg/L處理組蘿卜果實生物量與0.5、2.5 mg/L硒處理組相比顯著降低。

2.2 葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜總硒含量的影響

隨著葉面噴施硒濃度增加，蘿卜葉和果實中硒含量均呈明顯的增加趨勢（圖3）。蘿卜葉對硒的積累明顯高于果實，40.0 mg/L處理組葉子和果實中硒含量達到6.37、0.63 mg/kg，是對照組的蘿卜葉子硒含量的33.5倍和果實硒含量的7倍。不同施硒濃度處理間硒含量表現(xiàn)出明顯差異，其中0.5 mg/L處理組與對照組相比葉和果實中硒含量略有提升，但差異不顯著，2.5、10.0、20.0、40.0 mg/L處理組處理后蘿卜葉和果實硒含量顯著高于對照組分（P<0.05），其中40.0 mg/L處理組效果最為明顯，這說明隨著外源施硒濃度的增加，蘿卜葉和果實對硒的富集能力增強，葉面施硒能夠有效提高蘿卜葉、果實中硒含量，蘿卜對硒具有較好的吸收和富集能力。對照組和硒處理組中葉硒含量均高于果實，說明葉面施硒后蘿卜對硒的吸收轉化主要存在于葉中，只有部分轉運至蘿卜果實。

如表1所示，隨著葉面噴施硒濃度的增加，蘿卜硒轉移系數(shù)呈下降趨勢，表明較低濃度的硒能夠高效地被植物吸收轉運，但當施硒濃度過高時植物對硒的轉運率會降低。

2.3 葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜盆栽土壤中硒轉運的影響

如圖4所示，葉面噴施亞硒酸鈉各處理中，除10.0 mg/L處理以外其他各處理間蘿卜生長根際土壤硒含量均無顯著差異。在10.0 mg/L硒處理條件下，根際土壤硒含量顯著降低，說明該濃度促進根部生長，使得根部從土壤中硒吸收的能力增強。0.5、2.5、10.0 mg/L硒處理條件下根圍土壤硒含量顯著低于對照組。在2.5 mg/L硒處理條件下，根際土壤硒含量顯著高于根圍土壤硒含量（P=0.0231<0.05）而0.5、10.0、20.0、40.0 mg/L 硒處理組根際土壤硒含量與根圍土壤硒含量沒有顯著差異，這說明2.5 mg/L硒處理蘿卜植株生長旺盛、根系發(fā)達，從根圍吸收硒的能力較強。但當外源硒濃度過高時，抑制了蘿卜對根圍土壤中硒含量的吸收和轉運。

2.4 葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜硒形態(tài)的影響

蘿卜葉中硒主要以SeMet、SeCys2、Se （Ⅳ）3種形式存在（圖5、表2、表3），其中SeMet含量達1.51 mg/kg，SeCys2含量0.47 mg/kg，Se （Ⅳ）含量0.08 mg/kg;蘿卜果實中硒主要以SeMet、SeCys2等2種形式存在，其中SeCys2含量 0.29 mg/kg，SeMet含量達0.10 mg/kg， 且沒有四價硒存在，說明蘿卜從葉中吸收無機硒在體內進行轉化變?yōu)橛袡C硒。

2.5 葉面噴施亞硒酸鈉對蘿卜抗氧化能力的影響

6個處理組的蘿卜葉片中GSH-Px、POD、SOD的活性差異見圖6，可以看出與對照組相比，蘿卜葉中GSH-Px活性隨著施硒濃度升高有著顯著變化，0.5、2.5 mg/L硒處理先增大，10.0、20.0、40.0 mg/L硒處理又有明顯的下降趨勢?？梢娺m宜濃度的硒能夠促進GSH-Px合成，從而提高酶的活性，但是過量的硒可能會破壞植物體內的代謝平衡，本研究中，與對照組相比，2.5 mg/L硒處理組葉片中GSH-Px活性增加了106.26%（P<0.05），40.0 mg/L處理組葉中 GSH-Px 活性降低了5.86%。這可能是高濃度的硒影響了 GSH-Px 合成的誘導信號，從而破壞了植物體內環(huán)境平衡，導致GSH-Px活性降低。

與對照組相比，POD活性在0.5、2.5 mg/L硒處理條件下顯著增加，分別增加了10.46%、14.87%（P<0.05）;在100、20.0、40.0 mg/L硒處理組有一定的降低趨勢。與對照組相比，總SOD活性在0.5、2.5、10.0、20.0 mg/L硒處理下有一定的上升趨勢，無顯著性差異，但是在40.0 mg/L硒處理組卻顯著降低了40.49%（P<0.05）。本研究中POD、SOD活性沒有隨著外源施硒濃度的增加而出現(xiàn)顯著性變化趨勢，可能是由于POD的輔酶因子是鐵，SOD的輔酶因子是鐵、錳、銅、鋅，外源硒通過影響輔酶因子的吸收和在分布，從而調節(jié)抗氧化酶活性。因此對POD、SOD 2種酶活性的影響不是十分顯著。

3 討論與結論

硒不是植物必需微量元素，但一定濃度的硒能夠影響植物的生長發(fā)育、果實品質和產(chǎn)量[29-30]。本試驗中，葉面噴施2.5 mg/L的亞硒酸鈉對蘿卜果實有增產(chǎn)作用，隨著噴施濃度的升高，產(chǎn)量下降，果實顏色發(fā)紫，有明顯的病變現(xiàn)象?？梢娞}卜的產(chǎn)量受施硒濃度的影響，適量的施硒濃度能夠促進蘿卜生長，提高產(chǎn)量，但是過量的硒則會抑制蘿卜生長，還可能出現(xiàn)病變。該結果與硒對小麥和油菜[31]、苜蓿[32]生物量影響的研究結果一致。

蘿卜葉和果實中硒吸收富集量隨著外源施硒濃度增加而增加，并未出現(xiàn)對硒吸收同化的抑制作用，但蘿卜對硒的轉移系數(shù)是逐漸降低的，這與硒在小麥[33]、紫甘薯[34]中富集規(guī)律一致，說明高等植物對硒的吸收富集機制是相當復雜的，值得進一步研究。蘿卜不同部位吸收硒的能力有差異，本研究發(fā)現(xiàn)硒主要累積在蘿卜葉中，果實中轉移量較少。這與在甜菜、大麥、番茄上的研究結果[35-36]一致，植物的可食用部位富硒能力低于非食用部位。研究發(fā)現(xiàn)，十字花科蕪菁甘藍硒吸收含量和土壤本底中硒含量沒有顯著的相關性[37]。本試驗所用盆栽土壤本底硒含量為1.67 mg/kg，但對照組蘿卜葉和果實中硒含量較低，說明在自然土壤條件下蘿卜對硒的吸收和轉運能力較低，可能是由于土壤中有效態(tài)硒含量較低等因素導致[23]。并且不同種屬的植物在同環(huán)境下硒富集能力也是有差異的[24]。通過葉面施硒能夠顯著提高蘿卜對硒的吸收富集能力，因此不同植物對硒的富集能力是由外源施硒方式、施硒濃度、生長環(huán)境有效硒含量和植物種類等多重因素共同決定的。

大多數(shù)植物性硒源中有機硒主要以硒代蛋氨酸形式存在的[38]。葉用萵苣以四價硒作為硒源，發(fā)現(xiàn)約有1/3轉化為硒代蛋氨酸[39]。本試驗中蘿卜葉中有機硒主要以硒代蛋氨酸為主，含量為1.51 mg/kg，而蘿卜果實中有機硒為硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸，其中硒代胱氨酸的含量達 0.29 mg/kg，未檢出四價硒，說明葉面噴施亞硒酸鈉經(jīng)蘿卜轉化吸收變?yōu)橛袡C硒存在于蘿卜果實中。

硒能夠通過影響抗氧化酶活性從而增強植物的抗氧化能力。硒作為植物生長有益的元素之一，參與合成谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px），通過調節(jié)植物內環(huán)境離子平衡，來提高過氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性[40]。三葉草施加低濃度（1～5 μmol/L）硒能夠提高SOD、POD活性，高濃度（10～30 μmol/L）條件則會出現(xiàn)降低[41]。本研究中在一定硒濃度范圍內，能夠不同程度提高3種抗氧化酶（GSH-Px、POD、SOD）的活性。隨著施硒濃度的增加，GSH-Px、POD、SOD活性呈現(xiàn)明顯的先增大后降低的趨勢，40 mg/L硒處理組時3種酶活明顯降低，可能是由于當硒濃度過高會對植物產(chǎn)生毒害作用，導致抗氧化酶活性出現(xiàn)明顯降低。因此，適宜濃度的外源施硒能夠提高GSH-Px、POD、SOD酶活性，從而增強植物的抗氧化能力。

外源葉面施硒能夠促進生長在土壤有效硒含量較低的環(huán)境中的蘿卜吸收富集硒。綜合本研究結果發(fā)現(xiàn)，葉面噴施25 mg/L硒處理有利于促進蘿卜生長，提高蘿卜硒含量，增強抗氧化能力。40.0 mg/L硒處理會抑制蘿卜生長，降低其抗氧化能力，出現(xiàn)病變癥狀，導致植物產(chǎn)量、品質降低。植物雖然處在富硒環(huán)境土壤中但其對土壤中硒的吸收和轉運受植物種類和生長環(huán)境等因素的影響，導致植物對硒的吸收轉化差異化，因此結合外源葉面施硒能夠較好地達到植物富硒要求。

參考文獻：

[1]Rayman M P. The importance of selenium to human health[J]. Lancet，2000，356（9225）：233-241.

[2]Hoffmann F W，Hashimoto A C，Shafer L A，et al. Dietary selenium modulates activation and differentiation of CD4+ T cells in mice through a mechanism involving cellular free thiols[J]. Journal of Nutrition，2010，140（6）：1155-1161.

[3]Ferguson L R，Karunasinghe N，Zhu S T，et al. Selenium and its role in the maintenance of genomic stability[J]. Mutation Research，2012，733（1/2）：100-110.

[4]Yong F，Zi X，Yi S，et al. Protection mechanism of Se-containing protein hydrolysates from Se-enriched rice on Pb2+-induced apoptosis in PC12 and RAW264.7 cells[J]. Food Chemistry，2017，219：391-398.

[5]El-Ramady H，Abdalla N，Alshaal T A，et al. Selenium in soils under climate change，implication for human health[J]. Environmental Chemistry Letters，2015，13（1）：1-19.

[6]Yuan L，Yin X，Zhu Y，et al. Selenium in plants and soils，and selenosis in Enshi，China：implications for selenium biofortification[M]//Phytoremediation and biofortification. Dordrecht：Springer，2012：7-31.

[7]Gao J，Liu Y，Huang Y，et al. Daily selenium intake in a moderate selenium deficiency area of Suzhou，China[J]. Food Chemistry，2011，126（3）：1088-1093.

[8]中國營養(yǎng)學會. 中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量：2013版[M]. 北京：科學出版社，2014：48-51.

[9]Hamilton S J. Review of selenium toxicity in the aquatic food chain[J]. Science of the Total Environment，2004，326（1/2/3）：1-31.

[10]Terry N，Zayed A M，de Souza M P，et al. Selenium in higher plants[J]. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology，2000，51：401-432.

[11]Cappa J J，Yetter C，F(xiàn)akra S，et al. Evolution of selenium hyperaccumulation in Stanleya（Brassicaceae）as inferred from phylogeny，physiology and X-ray microprobe analysis[J]. New Phytologist，2015，205（2）：583-595.

[12]段曼莉，付冬冬，王松山，等. 亞硒酸鹽對四種蔬菜生長、吸收及轉運硒的影響[J]. 環(huán)境科學學報，2011，31（3）：658-665.

[13]Boldrin P F，de Figueiredo M A，Yang Yong And luo，hongmei，et al. Selenium promotes Sulfur accumulation and plant growth in wheat （Triticum aestivum）[J]. Physiologia Plantarum，2016，158（1）：80-91.

[14]Hartikainen H，Xue T L，Piironen V. Selenium as an anti-oxidant and pro-oxidant in ryegrass[J]. Plant and Soil，2000，225（1/2）：193-200.

[15]Allah A，F(xiàn) E，Abeer，et al. Mitigation of cadmium induced stress in tomato（Solanum lycopersicum L.） by selenium[J]. Pakistan J Bot，2016，48（3）：953-961.

[16]Wiesner-Reinhold M，Schreiner M，Baldermann S，et al. Mechanisms of selenium enrichment and measurement in brassicaceous vegetables，and their application to human health[J]. Frontiers in Plant Science，2017，8：1365.

[17]Broadley M R. Selenium in human health and disease[J]. Antioxidants & Redox Signaling，2011，14（7）：1337-1383.

[18]Brigelius-Flohé R，Maiorino M. Glutathione peroxidases[J]. Biochimica et Biophysica Acta，2013，1830（5）：3289-3303.

[19]Castillo-Godina R G，F(xiàn)oroughbakhch-Pournavab R . Effect of selenium on elemental concentration and antioxidant enzymatic activity of tomato plants[J]. Journal of Agricultural Science，2016，18（1）：233-244.

[20]Balakhnina T I，Nadezhkina E S. Effect of selenium on growth and antioxidant capacity of Triticum aestivum L. during development of lead-induced oxidative stress[J]. Russian Journal of Plant Physiology，2017，64（2）：215-223.

[21]Habibi G. Effect of drought stress and Selenium spraying on photosynthesis and antioxidant activity of spring barley[J]. Acta Agriculturae Slovenica，2013，101（1）：31-39.

[22]于 洋. 富硒區(qū)蔬菜根-土微界面過程鎘的物理化學作用及生物有效性特征[D]. 海口：海南大學，2015.

[23]趙 妍，宗良綱，曹 丹，等. 江蘇省典型茶園土壤硒分布特性及其有效性研究[J]. 農業(yè)環(huán)境科學學報，2011，30（12）：2467-2474.

[24]De Temmerman L，Waegeneers N，Thiry C，et al. Selenium content of Belgian cultivated soils and its uptake by field crops and vegetables[J]. Science of the Total Environment，2014，468-469：77-82.

[25]胡 婷，李文芳，聶亞文，等. 張家界市土壤硒分布規(guī)律和富硒作物研究[J]. 農業(yè)現(xiàn)代化研究，2014，35（6）：821-824.

[26]胡 婷，李文芳，向昌國，等. 氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定植物樣品中的硒[J]. 分析科學學報，2015，31（4）：579-582.

[27]王鐵良，張會芳，魏亮亮，等. 高效液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用技術測定富硒大米中的5種硒形態(tài)[J]. 食品安全質量檢測學報，2017，8（6）：2185-2190.

[28]胡 婷. 張家界市富硒植物中硒形態(tài)分布及種植規(guī)劃研究[D]. 吉首：吉首大學，2015.

[29]劉群龍，郝燕燕，吳國良，等. 外源硒對碭山酥梨果實品質和硒含量的影響[J]. 河南農業(yè)科學，2015，44（8）：113-117.

[30]張 琳，孫炎鑫，廖上強. 葉面噴施硒對生菜長勢和品質的影響[J]. 現(xiàn)代農業(yè)科技，2017（12）：61-62.

[31]付小麗. 不同硒源對小麥和油菜生長及硒累積的影響[D]. 武漢：華中農業(yè)大學，2013.

[32]Owusu-Sekyere A，Kontturi J，Hajiboland R A，et al. Influence of selenium （Se） on carbohydrate metabolism，nodulation and growth in alfalfa （Medicago sativa L.）[J]. Plant and Soil，2013，373（1/2）：541-552.

[33]劉 慶，田 俠，史衍璽. 施硒對小麥籽粒硒富集、轉化及蛋白質與礦質元素含量的影響[J]. 作物學報，2016，42（5）：778-783.

[34]侯 松，田 俠，劉 慶. 葉面噴施硒對紫甘薯硒吸收、分配及品質的影響[J]. 作物學報，2018（3）：1-8.

[35]Hamilton J W，Beath O A. Selenium uptake and conversion by certain crop plants[J]. Agronomy Journal，1963，55（6）：528-531.

[36]Wan H F，Mikkelsen R L，Page A L. Selenium uptake by some agricultural crops from central California soils[J]. Journal of Environmental Quality，1988，17（2）：269-272.

[37]Arthur M A，Woodbury P B，Schneider R E，et al. Uptake and accumulation of selenium by terrestrial plants growing on a coal fly ash landfill.Part 2.Forage and root crops[J]. Environmental Toxicology & Chemistry，1992，11（9）：1289-1299.

[38]Sargent M. Food-chain selenium and human health：spotlight on speciation[J]. The British Journal of Nutrition，2008，100（2）：238-253.

[39]Do N E，Aureli F，Damato M，et al. Selenium bioaccessibility and speciation in selenium-enriched lettuce：investigation of the selenocompounds liberated after in vitro simulated human digestion using two-dimensional HPLC-ICP-MS[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry，2017，65（43）：3031-3038.

[40]El-Ramady H，Abdalla N，Alshaal T，et al. Selenium and its role in higher plants[J]//Pollutants in Buildings，Water and Living Organisms. Cham：Springer，2015：235-296.

[41]Kong L A，Wang M，Bi D L. Selenium modulates the activities of antioxidant enzymes，osmotic homeostasis and promotes the growth of sorrel seedlings under salt stress[J]. Plant Growth Regulation，2005，45（2）：155-163.呂孫建，袁雪梅，劉 莉，等. 寬譜噬菌體NTHP01的生理特征及噬菌作用[J]. 江蘇農業(yè)科學，2019，47（3）：132-135.