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    6周有氧運(yùn)動對肥胖大鼠下丘腦瘦素表達(dá)影響的研究

    2019-08-02 06:51:34張荷玲
    運(yùn)動 2019年1期
    關(guān)鍵詞:下丘腦瘦素高脂

    張荷玲,閆 凱

    (山西大學(xué)體育學(xué)院,山西 太原 030006)

    21世紀(jì)以來,肥胖逐漸成為流行病之一,預(yù)防和治療肥胖,已經(jīng)成為當(dāng)今國際社會備受重視的問題。截止到2013年,全球肥胖人口總數(shù)已超過21億,而我國目前肥胖和超重人數(shù)就位列美國之后,處于全球第二。肥胖能夠?qū)е露喾N疾病的發(fā)生,如高血壓,高血脂及冠心病等。瘦素可以作為肥胖人口的一個重要的心血管疾病標(biāo)記,并且用于評估個人代謝風(fēng)險。

    下丘腦是內(nèi)分泌的高級活動中樞,通過一系列激素的基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)控機(jī)體的內(nèi)分泌,還能夠參與調(diào)節(jié)自主神經(jīng)系統(tǒng),比如體溫,水鹽平衡,睡眠,攝食等多種行為。研究表明,Leptin還是一種多靶器官,參與體內(nèi)多種代謝調(diào)節(jié),Leptin發(fā)揮它的中樞作用會通過與下丘腦OB-R結(jié)合,影響神經(jīng)內(nèi)分泌激素的分泌,從而引起一系列的生理反應(yīng)并且作用于肥胖機(jī)體。已有研究表明,肥胖的發(fā)生與瘦素有著密切的聯(lián)系,瘦素是由脂肪細(xì)胞產(chǎn)生,在與特異性受體結(jié)合后,通過中樞作用發(fā)揮它的生物學(xué)特性。

    本研究著重研究有氧運(yùn)動對肥胖大鼠下丘腦瘦素表達(dá)的影響,通過免疫組織化學(xué)的方法測定有氧運(yùn)動對肥胖大鼠下丘腦瘦素陽性細(xì)胞數(shù)量的影響,探索有氧運(yùn)動對下丘腦瘦素表達(dá)的調(diào)控機(jī)制,為運(yùn)動減肥提供更多的有價值的參考信息。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    從軍事科學(xué)院購進(jìn)實(shí)驗(yàn)大鼠60只,統(tǒng)一為雌性,體重質(zhì)量在180~200g,每6只一籠進(jìn)行飼養(yǎng),自由飲食。先喂養(yǎng)1周,讓大鼠先適應(yīng)這個環(huán)境。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求隨機(jī)分組,分為普通對照組和高脂模型組,其中普通對照組10只,高脂模型組50只。普通對照組給予基礎(chǔ)飼料;高脂模型組給予高熱量飼料。飲食自由進(jìn)行,不加限制。每周記錄體重及體長的變化,并記錄每日的飲食量。8周后,挑選符合實(shí)驗(yàn)要求的肥胖大鼠,隨機(jī)分組,每組6只,建立肥胖大鼠游泳模型。普通組的喂養(yǎng)飼料為購進(jìn)的普通鼠糧,熱量大概為15 kj/g,高脂組的飼料在基礎(chǔ)飼料中需要額外加入蔗糖、豬油、雞蛋黃、食鹽等,熱量為21kj/g。

    1.2 動物分組

    選取符合實(shí)驗(yàn)要求高脂模型組的大鼠隨機(jī)分為肥胖對照組(A1)、6周運(yùn)動后即刻組(B1)、6周運(yùn)動后3h組(B2)3組,每組6只;普通對照組的選取6只符合要求的分為正常對照組(A2),總共4組,每組6只。

    1.3 運(yùn)動和控食計劃

    A1:高脂飼料飼養(yǎng)大鼠,不運(yùn)動。A2:普通飼料飼養(yǎng)大鼠,不運(yùn)動。B1:游泳訓(xùn)練6周即刻取材組,第1周的飲食不需要人為干預(yù),自主進(jìn)食。從第2周開始,大鼠每天的飲食量要限制,需降到前1個星期每天平均飲食量的80%,同樣也是自由飲食。第3個星期和第四個星期的飲食量相同,都是降到第1個星期每天飲食量的75%。第5個星期和第6個星期的飲食量則降為第1個星期日均進(jìn)食的70%。進(jìn)行游泳訓(xùn)練42 d,每周要有連續(xù)6 d的游泳訓(xùn)練,休息1 d,每天要按時有1 h的游泳訓(xùn)練。B2:實(shí)驗(yàn)方案同B1組,在最終的有氧訓(xùn)練結(jié)束后讓大鼠休息3h并按時取材。

    先讓大鼠進(jìn)行3d的適應(yīng)性有氧訓(xùn)練,游泳時間依次增加,到第4 d的時候,游泳訓(xùn)練正常開始,為每天1 h。泳池中的水保持恒溫,在30℃左右。游泳訓(xùn)練期間,大鼠要按照分組正常飲食。

    1.4 樣本的采集

    按實(shí)驗(yàn)分組依次將肥胖對照組,6周后即刻組,6周后3 h組和正常對照組將相對應(yīng)的大鼠的頭部用手術(shù)刀取下,然后馬上用工具將大鼠的顱骨打開,把腦組織分離頭部,然后把下丘腦與其他組織分開,即時放在冰上,然后存入提前準(zhǔn)備好凍存管中,最終需要用液態(tài)氮冷藏以備實(shí)驗(yàn)所需。

    1.5 免疫組化實(shí)驗(yàn)方法

    1.5.1 主要試劑5%BSA封閉液;二抗:生物素化山羊抗兔I gG;SABC:鏈霉親和素——生物素——過氧化物酶復(fù)合物;免疫組化專用PBS;枸櫞酸鹽緩沖液。

    1.5.2 主要儀器電熱恒溫水浴鍋、恒溫箱、搖擺箱等。

    1.5.3 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法采用博士德生物科技有限公司提供的免疫組化方法,并結(jié)合已有經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,主要有以下步驟:(1)將切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟至水;(2)進(jìn)行熱抗原修復(fù);(3)滴加IgG,孵育30 min;再滴加SABC,并孵育30 min;(4)滴加顯色試劑;(4)制作完成后光學(xué)顯微鏡下40倍觀察,能夠觀測到下丘腦細(xì)胞中有棕褐色陽性顆粒。

    1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    每個切片取5個視野,對視野內(nèi)染色成功的陽性細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計量數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示,對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和組間t檢驗(yàn),P<0.05為有顯著性差異,P<0.01為非常顯著性差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    由表1可知,肥胖對照組的陽性細(xì)胞數(shù)量高于正常對照組并有顯著性差異(P<0.05),運(yùn)動后即可組和運(yùn)動后3 h組與正常對照組均有非常顯著性差異(P<0.01),運(yùn)動后即刻組和運(yùn)動后3h組陽性細(xì)胞數(shù)量均高于肥胖對照組,且有顯著性差異(P<0.05);運(yùn)動后即刻組與運(yùn)動后3 h組相比較,沒有顯著性差異。

    表1 下丘腦陽性細(xì)胞數(shù) ±s

    表1 下丘腦陽性細(xì)胞數(shù) ±s

    注:*表示與正常對照組相比較P<0.05,**表示P<0.01;#表示與肥胖對照組相比,P< 0.05。

    組別 陽性細(xì)胞/個16.8±4.02 21.5±5.26*31.1±8.61**#28.5±7.85**#正常對照組肥胖對照組運(yùn)動后即刻組運(yùn)動后3 h組

    2.2 分析與討論

    2.2.1 肥胖對大鼠下丘腦瘦素細(xì)胞表達(dá)量的影響大鼠肥胖后,會導(dǎo)致其下丘腦瘦素陽性細(xì)胞數(shù)量的明顯增高,不僅如此,許多研究表明,肥胖還會導(dǎo)致體內(nèi)瘦素水平的升高。并且由于肥胖引起的中樞過多瘦素能使大鼠從正常生理轉(zhuǎn)向肥胖相關(guān)性的高血壓。周芯 通過對肥胖大鼠的血清瘦素進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn),肥胖組的大鼠血清濃度顯著高于正常組,這在多篇文獻(xiàn)報道中均有闡述,可見體脂量的增多可以增加體內(nèi)瘦素的分泌量,從而作用于機(jī)體,影響攝食和能量消耗。劉志誠通過對肥胖患者血清瘦素測定表明,單純性肥胖患者血清瘦素顯著高于正常水平,并由此推出該肥胖患者患有高瘦素敗血癥 。在經(jīng)過治療后,肥胖大鼠的血清瘦素水平明顯降低,而下丘腦OB-Rb基因表達(dá)水平升高,有效改善了機(jī)體的瘦素抵抗?fàn)顟B(tài) 。而有進(jìn)一步的研究表明,高脂膳食誘導(dǎo)的瘦素抵抗多發(fā)生在紅肌,并且能夠降低紅肌的脂肪代謝 。在本實(shí)驗(yàn)中,由高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠,其下丘腦瘦素陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增高,可見下丘腦已經(jīng)對機(jī)體肥胖作出相應(yīng)的生理反應(yīng),但我們認(rèn)為由于某些因素,雖然下丘腦瘦素細(xì)胞的表達(dá)量增高,但并沒有真正的作用于機(jī)體,這里應(yīng)該是由于肥胖造成了機(jī)體的瘦素抵抗。

    2.2.2 運(yùn)動對下丘腦瘦素細(xì)胞表達(dá)量的影響已有研究表明,運(yùn)動可以有效降低血清瘦素和增加脂聯(lián)素水平,從而證明有氧運(yùn)動治療肥胖的積極作用 ,并且正常有氧運(yùn)動中大鼠海馬區(qū)瘦素水平和瘦素受體表達(dá)與海馬區(qū)胰島素生長因子Ⅰ的水平呈正相關(guān) 。8周的游泳訓(xùn)練可以有效提高瘦素受體基因表達(dá)量的增加,使瘦素和受體結(jié)合效率提高,從而減輕瘦素抵抗 。也有研究者通過測定最大攝氧量判斷運(yùn)動強(qiáng)度的方法或進(jìn)行通過力竭運(yùn)動,觀察體內(nèi)瘦素含量,證實(shí)要真正改變體內(nèi)瘦素的水平,短時間的運(yùn)動訓(xùn)練并不會有顯著作用 。在本實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)過六周的游泳運(yùn)動訓(xùn)練后,即刻組大鼠下丘腦瘦素陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加,并且在運(yùn)動后3h其陽性細(xì)胞數(shù)量與即刻組沒有明顯差異,可見六周的有氧運(yùn)動訓(xùn)練能夠明顯改善下丘腦瘦素的表達(dá)量,并且降低了大鼠的體脂,對瘦素抵抗?fàn)顟B(tài)有了明顯的改善。

    3 結(jié) 論

    肥胖大鼠下丘腦瘦素的表達(dá)量明顯增高,但是體重并沒有減輕,這可能和瘦素抵抗有關(guān)系;運(yùn)動結(jié)合控食能夠有效增加下丘腦瘦素細(xì)胞的表達(dá)量,并使機(jī)體的體重恢復(fù)正常,從而機(jī)體達(dá)到減肥的目的。

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