• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    電針刺激后大鼠血清對成骨細(xì)胞OPG、RANKL mRNA及其蛋白表達的影響

    2019-07-30 02:22:18金俊健
    上海針灸雜志 2019年7期
    關(guān)鍵詞:骨細(xì)胞成骨細(xì)胞骨質(zhì)疏松癥

    金俊健

    電針刺激后大鼠血清對成骨細(xì)胞OPG、RANKL mRNA及其蛋白表達的影響

    金俊健

    (臨海市第二人民醫(yī)院,臨海 317016)

    觀察電針刺激去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的血清對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的骨形成因子骨保護素(osteoprotegerin, OPG)和骨吸收因子(receptor activator for nuclear factor-kB ligand, RANKL)mRNA表達及其蛋白濃度的影響。將45只雌性SD大鼠,隨機分為空白組(A組)、模型組(B組)、電針刺激組(C組),每組15只。除A組外,B組、C組均切除雙側(cè)卵巢。造模成功后,C組給予電針刺激,B組正常飼養(yǎng),A組不做任何處理,常規(guī)正常飼養(yǎng)。12周后,采用水合氯醛麻醉各組大鼠,心臟采血,經(jīng)過處理后加到體外培養(yǎng)的大鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中。采用堿性磷酸酶(ALP)檢測成骨細(xì)胞活性,RT-qPCR法檢測大鼠血清對OPG、RANKL mRNA表達的影響,ELISA法檢測大鼠血清對OPG、RANKL蛋白濃度的影響。各組大鼠血清處理成骨細(xì)胞后,與A組比較,B組ALP的活性明顯降低(<0.05),C組電刺激后成骨細(xì)胞內(nèi)ALP的活性明顯增加(<0.05)。與B組比較,A組及C組OPG mRNA表達及其蛋白濃度表達明顯降低(<0.05);與A組比較,C組OPG mRNA表達及其蛋白濃度均明顯降低(<0.05)。與B組比較,C組及A組RANKL mRNA表達及其蛋白濃度表達明顯降低(<0.05);與A組比較,C組RANKL mRNA及蛋白濃度明顯降低(<0.05)。C組大鼠骨密度明顯高于B組(<0.05)。電刺激后的大鼠血清可以提升ALP、OPG水平,降低RANKL水平,其治療骨質(zhì)疏松癥的機制可能與此有關(guān)。

    針刺療法;電針;骨質(zhì)疏松;成骨細(xì)胞;骨保護素;骨吸收因子;大鼠

    隨著我國人口老齡化現(xiàn)象的加劇,患骨質(zhì)疏松癥的人數(shù)在逐年增加[1],其嚴(yán)重威脅人們的身體健康及生存生活質(zhì)量[2],因此積極尋找有效的防治方法具有重要意義。中醫(yī)是我國的瑰寶,其中應(yīng)用針灸療法治療一些疾病具有顯著療效,近年來發(fā)現(xiàn)針灸治療骨質(zhì)疏松癥具有一定的治療效果[3],并且通過電針刺激法治療骨質(zhì)疏松癥也已經(jīng)成為國內(nèi)外專家學(xué)者的研究點。在骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展過程中,OPG、RANKL系統(tǒng)在成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞相互調(diào)節(jié)的過程中起著重要作用。本文旨在通過研究電針刺激后的大鼠血清對體外培養(yǎng)的大鼠成骨細(xì)胞OPG、RANKL蛋白及mRNA表達的影響,探討電針刺激療法治療骨質(zhì)疏松癥的機制。

    1 材料和方法

    1.1 實驗動物與分組

    采用3月齡SD大鼠45只(90 d),雌性,體質(zhì)量為(280±20)g;SD乳鼠10只,購自北京維通利華實驗技術(shù)有限公司[許可證號SCXK(京)2011-0011],飼養(yǎng)溫度為25℃~27℃,濕度保持在50%~70%。實驗對動物的處理方法符合中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》。實驗地點為臨海市第二人民醫(yī)院動物實驗中心。動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,將45只大鼠隨機分為空白組(A組)15只和造模組30只。造模成功后,造模組再隨機分為2組,模型組(B組)15只,電針刺激組(C組)15只。

    1.2 主要試劑與儀器

    10%水合氯醛(山東嘉穎化工科技有限公司);胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基、胰酶、雙抗(Gibico,美國);大鼠OPG、RANKL ELISA試劑盒(中國武漢博士德生物工程有限公司);堿性磷酸酶(ALP)試劑盒(南京建成生物工程研究所);RT-PCR試劑盒(日本,Takara)。

    電針儀(廣州市健玲醫(yī)療器械有限公司);多功能酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad公司);恒溫箱(北京長安儀器廠);二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermo Scientific);低溫離心機型(美國Sigma公司);大鼠成骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基(武漢普諾賽生命科技有限公司);PCR儀(美國ABI公司);微量移液器等。

    1.3 模型建立[4]

    大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3 mL/kg)進行麻醉,固定于手術(shù)臺上,經(jīng)背部正中切口入路切除雙側(cè)卵巢后,逐層關(guān)閉,縫合肌肉、皮膚。乙醇消毒后,術(shù)后肌肉注射青霉素預(yù)防感染。術(shù)后第2天連續(xù)3 d做陰道細(xì)胞涂片,經(jīng)證實卵巢切除完全,采用QDR4500A型雙能X線骨密度測定儀測定大鼠骨密度(BMD,美國歐力士),采用放射免疫法測定血清雌二醇(BE,試劑盒購自上海信帆生物科技有限公司),大鼠BMD及BE明顯降低,復(fù)制骨質(zhì)疏松癥模型成功。

    A組不做任何處理,常規(guī)飼養(yǎng)。

    B組造模成功后,常規(guī)飼養(yǎng)。

    C組模型成功后,參照丁巖等[5]電針刺激方法干預(yù)大鼠,選背部L1-4夾脊、環(huán)跳(右側(cè))、足三里穴進行針刺。針刺深度為6~8 mm,針身接刺激儀指數(shù)曲線波3 Hz,強度控制在局部可見輕微肌肉收縮,留針刺激20 min。隔日1次,持續(xù)12周。

    1.4 大鼠成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)

    將SD乳鼠置于75%乙醇中浸泡,在無菌條件下取下顱骨(除去骨膜、結(jié)締組織),用PBS清洗3次后將顱骨剪碎成約1 mm3。將骨片轉(zhuǎn)到裝有0.25%胰酶培養(yǎng)瓶中,消化完畢后去掉上清液;再用0.1%的Ⅱ型膠原酶消化收集合并上清液,終止消化,并將其用200目濾網(wǎng)過濾3次,1000 r/min離心10 min,棄掉上清,加入培養(yǎng)基制成細(xì)胞混懸液,接種于培養(yǎng)瓶,于5% CO2培養(yǎng)箱中37℃條件下培養(yǎng),每3 d換液1次,直到80%細(xì)胞融合。細(xì)胞進行常規(guī)消化、傳代,收集第二代細(xì)胞用于實驗。

    1.5 成骨細(xì)胞的血清處理方法

    10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉各組大鼠后,心臟取血,冷置1 h,2500 r/min離心25 min,棄去沉淀物,保留上層血清。將上層血清采用56℃水浴滅活30 min,并用0.22mm的濾網(wǎng)抽濾除菌。將各組制備的血清按照10%的比例加入成骨細(xì)胞中培養(yǎng)3 d。

    1.6 觀察指標(biāo)

    1.6.1 ALP活性檢測

    收集各組血清處理后的成骨細(xì)胞上清液,按照試劑盒說明書操作,檢測ALP活性。

    1.6.2 RT-qPCR法檢測成骨細(xì)胞OPG、RANKLmRNA表達的影響

    收集各組血清處理后的成骨細(xì)胞上清液,提取細(xì)胞總RNA,于PCR儀中行逆轉(zhuǎn)錄,按照預(yù)先設(shè)定熒光定量PCR反應(yīng)程序進行擴增,計算OPG、RANKL基因與GAPDH基因擴增條帶表達量的比值表示。

    1.6.3 ELISA法檢測成骨細(xì)胞OPG、RANKL蛋白濃度的影響

    收集各組血清處理后的成骨細(xì)胞上清液,嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

    1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

    所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計處理。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間比較采用檢驗。以<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠骨密度測定

    A組大鼠的骨密度值為(0.22±0.06)g/cm2,B組大鼠的骨密度值為(0.12±0.05)g/cm2,C組大鼠的骨密度值為(0.16±0.06))g/cm2,3組大鼠骨密度值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(=11.603,=0.000),其中A組骨密度明顯高于B組及C組(=6.811、3.406,均<0.05),C組明顯高于B組(=3.406,<0.05)。

    2.2 各組大鼠血清對成骨細(xì)胞ALP活性的影響

    表1 各組大鼠成骨細(xì)胞ALP活性比較 (±s,U/gprot)

    注:與B組比較1)<0.05

    3組成骨細(xì)胞ALP活性比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(=476.75,<0.01)。其中A組、C組大鼠成骨細(xì)胞ALP的活性均明顯高于B組(=39.127,<0.05;=36.359,<0.05)。詳見表1、圖1。

    注:與A組比較*P<0.05;與B組比較#P<0.05

    2.3 各組大鼠血清OPG、RANKL mRNA表達比較

    與B組比較,A組及C組OPG mRNA表達明顯降低(=55.578、34.064,<0.05),與A組比較,C組OPG mRNA表達明顯降低(=21.514,<0.05)。與B組比較,A組及C組RANKL mRNA表達明顯升高(=47.881、52.234,<0.05),與A組比較,C組RANKL mRNA表達顯著升高(=4.353,<0.05)。與B組比較,A組及C組OPG/RANKL比值明顯升高(=18.006、7.982,<0.05),與A組比較, C組OPG/RANKL比值明顯降低(=10.024,<0.05)。詳見表2。

    表2 各組大鼠成骨細(xì)胞OPG、RANKL mRNA表達比較 (±s)

    注:與A組比較1)<0.05;與B組比較2)<0.05

    2.4 各組大鼠血清OPG、RANKL蛋白濃度比較

    表3 各組大鼠成骨細(xì)胞OPG、RANKL蛋白濃度表達比較 (±s)

    注:與A組比較1)<0.05;與B組比較2)<0.05

    相較于B組,A組及C組RANKL蛋白濃度均明顯升高(=70.048、57.418,均<0.05);與A組比較,C組RANKL蛋白濃度顯著降低(=12.630,<0.05)。與B組比較,A組及C組OPG蛋白濃度明顯降低(=30.168,<0.05;= 21.589,<0.05);與A組比較,C組OPG蛋白濃度顯著降低(=8.580,<0.05)。與B組比較,A組及C組OPG/ RANKL比值均明顯升高(=24.186,<0.05;=9.315,<0.05);與A組比較,C組OPG/RANKL比值明顯降低(=14.871,<0.05)。詳見表3。

    3 討論

    有研究報道,通過探究生化、骨密度、生物力學(xué)、蛋白和基因等一些指標(biāo),表明針灸、電針刺激可以治療骨質(zhì)疏松癥[6-9]。電刺激對成骨細(xì)胞有增殖的作用,可以影響骨的重建,而治療骨質(zhì)疏松癥[10]。電刺激治療骨質(zhì)疏松癥的機制可能是,調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞骨破壞,促進成骨細(xì)胞的增殖與分化,影響骨的代謝,從而起到促進骨形成、抑制骨吸收,達到預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥的效果[11]。成骨細(xì)胞在骨組織的生長、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用,可以合成、分泌骨基質(zhì),因此促進成骨細(xì)胞的成骨功能是防治骨質(zhì)疏松癥的主要療法之一。本實驗通過電針刺激血清學(xué)的方法,在蛋白及基因水平上進一步探究其對成骨細(xì)胞的骨形成及骨吸收的影響。

    ALP是成骨細(xì)胞分化的一種酶蛋白,是成骨細(xì)胞分化的早期指標(biāo),成骨細(xì)胞分化越多ALP的表達就越多,ALP活性越高成骨細(xì)胞的形成越好,是骨形成指標(biāo)。本實驗結(jié)果顯示,B組大鼠血清作用于體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞時相較于A組,ALP的活性明顯下降,電針刺激后可以增加ALP的活性,提示電針刺激療法能促進成骨細(xì)胞的分化,促進骨形成。

    OPG、RANKL屬于腫瘤壞死因子(TNF)家族,由成骨細(xì)胞表達,是破骨細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)的信號因子,通過調(diào)控OPG、RANKL的表達可以調(diào)控骨吸收,是骨吸收、骨重建的重要因素[12-15]。成骨細(xì)胞可以通過分泌OPG、RANKL, OPG可與RANKL競爭RANK受體抑制破骨的形成及活性[16-19]。OPG是一種可溶性分泌型糖蛋白在成骨細(xì)胞中高表達[20],是RANKL的受體,可以與破骨細(xì)胞表面的RANK競爭性結(jié)合RANKL,阻斷骨吸收信號傳遞以及破骨細(xì)胞的分化,抑制破骨細(xì)胞吸收活性。本研究結(jié)果顯示,電針刺激后大鼠血清可以上調(diào)成骨細(xì)胞OPG mRNA的表達及蛋白濃度,提示電針刺激療法可能通過促進成骨細(xì)胞OPG的表達,從而增加OPG與RANKL的結(jié)合,抑制破骨細(xì)胞的活性,以此來達到治療骨質(zhì)疏松癥的效果。RANKL是影響骨吸收的關(guān)鍵因子,與破骨細(xì)胞表面的RANK結(jié)合,促進破骨細(xì)胞的分化,抑制其凋亡[21]。本實驗結(jié)果顯示,與A組血清相比,B組血清成骨細(xì)胞RANKL mRNA的表達及蛋白濃度明顯升高,電針刺激后RANKL蛋白、mRNA顯著下調(diào),提示電針刺激療法后的大鼠血清可能通過抑制RANKL的表達,來抑制破骨細(xì)胞的功能,從而治療骨質(zhì)疏松癥。OPG/RANKL在機體中處于動態(tài)平衡,當(dāng)比值下降時,會引起一些骨代謝疾病,而當(dāng)比值升高時,會減弱破骨細(xì)胞的分化成熟[22]。在本實驗中,電針刺激后大鼠血清作用于體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞可以使OPG/RANKL的比值增加,抑制破骨細(xì)胞分化,增加骨形成。對大鼠骨密度測試顯示,電針刺激對大鼠的骨密度下降程度有所抑制。

    目前,治療骨質(zhì)疏松癥的方法主要是以藥物為主,患者又大部分是老年人,由于年齡及身體因素的影響,對藥物吸收較差,受副作用影響較大。OPG/RANKL/RANK信號系統(tǒng)是骨代謝的重要信號通路,是骨代謝疾病治療的新靶點。

    綜上所述,骨質(zhì)疏松癥模型大鼠血清使成骨細(xì)胞ALP、OPG水平明顯下降,RANKL水平增高,且OPG/RANKL顯著下降,電刺激后的大鼠血清可以提升ALP、OPG水平,降低RANKL水平,調(diào)節(jié)OPG/RANKL的比值,在成骨細(xì)胞重建上,電針刺激后大鼠血清能影響OPG與RANKL的蛋白、mRNA水平表達,是治療骨質(zhì)疏松癥的一種治療方法,因此電針刺激療法的應(yīng)用將具有重要意義。

    [1] 楊進廉,艾雙春,劉江,等.針灸對骨質(zhì)疏松癥椎體壓縮骨折患者生存質(zhì)量的影響[J].上海針灸雜志,2016,35 (10):1229-1232.

    [2] Nazrum AS, Tzar MN, Mokhtar SA,. A systematic review of the outcomes of osteoporotic fracture patients after hospital discharge: morbidity, subsequent fractures, and mortality[J]., 2014,10(18): 937-948.

    [3] 宋亞文,浪萬英,王亞軍.針灸治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥臨床研究進展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2016,34(6):1323 -1326.

    [4] Cao H, Zhang Y, Qian W,. Effect of icariin on fracture healing in an ovariectomized rat model of osteoporosis[J]., 2017,13(5):2399- 2404.

    [5] 丁巖,陳允震,劉海春,等.指數(shù)曲線電刺激治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2010,48(3): 70-73.

    [6] Fan H, Ji F, Lin Y,Electroacupuncture stimulation at CV4 prevents ovariectomy-induced osteoporosis in rats via Wnt-b-catenin signaling[J]., 2016,13(3):2485-2491.

    [7] Kim BH, Kim K, Nam HJ. A comparative study on the effects of systemic manual acupuncture, periauricular electroacupuncture, and digital electroacupuncture to treat tinnitus: A randomized, paralleled, open-labeled exploratory trial[J]., 2017,17(1):85.

    [8] de Oliveira RF, Goldman RS, Mendes FM,. Influe- nce of electroacupuncture and laser-acupuncture on treating paresthesia in patients submitted to combined orthognathic surgery and genioplasty[J]., 2017,29(5):290-299.

    [9] Kim MJ, Lee JH, Jang JU,. The efficacy of combination treatment of gabapentin and electro- acupuncture on paclitaxel-induced neuropathic pain[J]., 2017,21(6):657-666.

    [10] Liu H, Peng F, Liu Z,. CYR61/CCN1 stimulates proliferation and differentiation of osteoblasts in vitro and contributes to bone remodeling in vivo in myeloma bone disease[J]., 2017,50(2):631-639.

    [11] Langdahl B, Ferrari S, Dempster DW. Bone modeling and remodeling: potential as therapeutic targets for the treatment of osteoporosis[J]., 2016,8(6):225-235.

    [12] Kang J, Choi YJ, Seo BY,.A Selective FGFR inhibitor AZD4547 suppresses RANKL/M-CSF/OPG- dependent ostoclastogenesis and breast cancer growth in the metastatic bone microenvironment[J]., 2019, 9(1):8726.

    [13] Akbar IZ, Dewi FRP, Setiawan B.In Silico Interaction of the Active Compounds of Scurrula Atropurpurea with the RANK/RANKL/OPG System in Diabetoporosis[J]., 2019,27(1):8-11.

    [14] Suthanthiran T, Annamalai S, Chellapandi S,.Gingival Crevicular Fluid Levels of RANKL and OPG After Placement of Collagen Membrane With Sim- vastatin in the Treatment of Intrabony Defects in Chronic Periodontitis[J]., 2019,11(Suppl 2):S301-S304.

    [15] Ozer FF, Dagdelen S, Erbas T. Relation of RANKL and OPG levels with bone resorption in patients with acromegaly and prolactinoma[J]., 2018, 50(7):562-567.

    [16] Chen Y, Yang K, Zhou Z,.Mechanical Stress Modulates the RANKL/OPG System of Periodontal Ligament Stem Cells via α7 nAChR in Human Deciduous Teeth: An In Vitro Study[J]., 2019,2019:5326341.

    [17] El-Baz FK, Saleh DO, Abdel Jaleel GA,.Heamato- coccus pluvialis ameliorates bone loss in experimentally- induced osteoporosis in rats via the regulation of OPG/RANKL pathway[J]., 2019,116:109017.

    [18] Chen B, Du Z, Dong X,.Association of Variant Interactions in RANK, RANKL, OPG, TRAF6, and NFATC1 Genes with the Development of Osteonecrosis of the Femoral Head[J]., 2019,38(7): 734-746.

    [19] Ozaki Y, Koide M, Furuya Y,. Treatment of OPG- deficient mice with WP9QY, a RANKL-binding peptide, recovers alveolar bone loss by suppressing osteoclastoge- nesis and enhancing osteoblastogenesis[J]., 2017,12(9):e0184904.

    [20] Choudhary S, Goetjen A, Estus T,. Serum amyloid A3 secreted by preosteoclasts inhibits parathyroid hormone-stimulated cAMP signaling in murine osteoblasts[J]., 2016,291(8):3882-3894.

    [21] Hur J, Ghosh A, Kim K,. Design of a RANK- Mimetic peptide inhibitor of osteoclastogenesis with enhanced RANKL-binding affinity[J]., 2016, 39(4):316-321.

    [22] Gong S, Han X, Li X,. Development of a high- throughput screening strategy for upregulators of the OPG/RANKL ratio with the potential for antiosteo- porosis effects[J]., 2016,21(7):738- 748.

    Effect of Rat Serum after Electroacupuncture Stimulation on the Expressions of Osteoblastic OPG and RANKL mRNAs and Their Proteins

    -.

    317016,

    To investigate the effect of ovariectomized osteoporosis rat serum after electroacupuncture stimulation on the expressions of in vitro cultured osteoblastic bone formation factor osteoprotegerin (OPG) and bone resorption factor receptor activator of nuclear factor-kB ligand (RANKL) mRNAs and the concentrations of their proteins.Forty-five female SD rats were randomized to a blank group (group A), a model group (group B) and an electroacupuncture stimulation group (group C), 15 rats each. Bilateral ovaries were excised in groups B and C except group A. After successful model making, group C was given electroacupuncture stimulation and group B, fed regularly. Group A was fed regularly without any treatment. After 12 weeks, each group of rats was anesthetized with chloral hydrate and blood was taken from the heart. The blood was processed and put in culture fluid for in vitro cultured rat osteoblasts. Osteoblast activity was measured using alkaline phosphatase (ALP). The effect of rat serum on the expressions of osteoblastic OPG and RANKL mRNAs was assessed using RT-qPCR. The effect of rat serum on the concentrations of OPG and RANKL proteins was determined using ELISA.After osteoblasts were treated with rat serumin in each group of rats, ALP activity decreased significantly in group B (<0.05), and osteoblastic ALP activity increased significantly in group C after electroacupuncture stimulation (<0.05), in comparison with group A. OPG mRNA expression and its protein concentration decreased significantly in groups A and C compared with group B (<0.05) and in group C compared with group A (<0.05). RANKL mRNA expression and its protein concentration decreased significantly in groups C and A compared with group B (<0.05) and in group C compared with group A (<0.05). Bone mineral density was significantly higher in group C of rats than in group B (<0.05).Rat serum after electroacupuncture stimulation can increase ALP and OPG levels and decrease RANKL levels, which may be related to the mechanism by which electroacupuncture treats osteoporosis.

    Acupuncture therapy; Electroacupuncture; Osteoporosis; Osteoblast; Osteoprotegerin; Bone resorption factor; Rats

    R2-03

    A

    10.13460/j.issn.1005-0957.2019.07.0798

    1005-0957(2019)07-0798-05

    2019-01-10

    金俊健(1976—),男,主治醫(yī)師

    猜你喜歡
    骨細(xì)胞成骨細(xì)胞骨質(zhì)疏松癥
    機械應(yīng)力下骨細(xì)胞行為變化的研究進展
    健康老齡化十年,聚焦骨質(zhì)疏松癥
    調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞功能的相關(guān)信號分子的研究進展
    骨質(zhì)疏松癥為何偏愛女性
    骨細(xì)胞在正畸牙移動骨重塑中作用的研究進展
    淫羊藿次苷Ⅱ通過p38MAPK調(diào)控成骨細(xì)胞護骨素表達的體外研究
    土家傳統(tǒng)藥刺老苞總皂苷對2O2誘導(dǎo)的MC3T3-E1成骨細(xì)胞損傷改善
    Bim在激素誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡中的表達及意義
    從治未病悟糖尿病性骨質(zhì)疏松癥的防治
    滋肝補腎法治療肝腎虧虛型骨質(zhì)疏松癥40例
    国产激情欧美一区二区| 少妇 在线观看| 女人被狂操c到高潮| 亚洲av成人av| 国产亚洲av高清不卡| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲激情在线av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜成年电影在线免费观看| 成年人黄色毛片网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜成年电影在线免费观看| 后天国语完整版免费观看| 新久久久久国产一级毛片| 手机成人av网站| 成年版毛片免费区| 成人国语在线视频| 男人的好看免费观看在线视频 | 99国产精品免费福利视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久99久视频精品免费| 国产视频一区二区在线看| 级片在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 搡老岳熟女国产| 亚洲五月色婷婷综合| 中文字幕高清在线视频| 热re99久久国产66热| 一级毛片高清免费大全| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 女同久久另类99精品国产91| 精品福利观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 一级黄色大片毛片| 亚洲色图av天堂| 亚洲欧美激情在线| 18禁观看日本| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 色哟哟哟哟哟哟| 12—13女人毛片做爰片一| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 在线观看一区二区三区激情| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美在线黄色| 亚洲激情在线av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 首页视频小说图片口味搜索| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产亚洲欧美98| 在线播放国产精品三级| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 高清在线国产一区| 欧美久久黑人一区二区| 人人澡人人妻人| 黑人欧美特级aaaaaa片| 看黄色毛片网站| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 麻豆成人av在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 丝袜在线中文字幕| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜影院日韩av| 国产91精品成人一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲,欧美精品.| 嫩草影院精品99| 国产免费现黄频在线看| 黄频高清免费视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产色视频综合| tocl精华| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产麻豆69| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美最黄视频在线播放免费 | 日本欧美视频一区| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久9热在线精品视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲一区中文字幕在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 三上悠亚av全集在线观看| 嫩草影视91久久| 精品人妻在线不人妻| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久热爱精品视频在线9| 涩涩av久久男人的天堂| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品免费久久久久久久清纯| 久久久久国内视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人18禁在线播放| 丝袜美足系列| 丝袜美足系列| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产野战对白在线观看| 水蜜桃什么品种好| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 老司机靠b影院| 国产99久久九九免费精品| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 9191精品国产免费久久| 身体一侧抽搐| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美日韩乱码在线| 女警被强在线播放| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品国产高清国产av| 精品人妻1区二区| 天堂√8在线中文| 丝袜人妻中文字幕| 老司机福利观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 悠悠久久av| 国产91精品成人一区二区三区| 男女下面插进去视频免费观看| 无人区码免费观看不卡| 午夜免费鲁丝| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产精品999在线| 日韩视频一区二区在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 9色porny在线观看| 欧美日韩精品网址| 亚洲自拍偷在线| 淫秽高清视频在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 女性被躁到高潮视频| av天堂在线播放| 成人免费观看视频高清| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| www.熟女人妻精品国产| www日本在线高清视频| 亚洲美女黄片视频| 嫩草影院精品99| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 丁香六月欧美| 国产一区二区三区视频了| 丰满的人妻完整版| 国产精品 国内视频| 精品久久久久久成人av| 国产免费男女视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产成人av教育| 国产精品野战在线观看 | 大香蕉久久成人网| 91大片在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| av在线播放免费不卡| 久久中文字幕一级| 性少妇av在线| 久久精品国产综合久久久| 精品电影一区二区在线| 天堂√8在线中文| 69精品国产乱码久久久| 欧美久久黑人一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 日本wwww免费看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品乱码久久久久久99久播| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 1024香蕉在线观看| 99riav亚洲国产免费| 国产片内射在线| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲视频免费观看视频| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产成人精品无人区| 久久久国产一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 在线观看一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品永久免费网站| 国产乱人伦免费视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲欧美一区二区三区久久| www.自偷自拍.com| 国产成人精品在线电影| 热99re8久久精品国产| 国产1区2区3区精品| 日本五十路高清| 极品教师在线免费播放| 在线av久久热| 国产亚洲精品一区二区www| 欧美日本亚洲视频在线播放| videosex国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 成人永久免费在线观看视频| 在线视频色国产色| 亚洲av熟女| svipshipincom国产片| 又紧又爽又黄一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 99在线视频只有这里精品首页| 91精品国产国语对白视频| 91字幕亚洲| 久久久久久大精品| 国产精品偷伦视频观看了| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产99白浆流出| 成年人免费黄色播放视频| 操出白浆在线播放| 热re99久久国产66热| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美激情高清一区二区三区| 少妇的丰满在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 国产99白浆流出| 日韩国内少妇激情av| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久亚洲真实| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 9热在线视频观看99| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 极品教师在线免费播放| 欧美一级毛片孕妇| 水蜜桃什么品种好| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产av在哪里看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 伦理电影免费视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 日韩三级视频一区二区三区| 精品无人区乱码1区二区| 女性被躁到高潮视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久久九九热精品免费| 99国产精品99久久久久| av天堂在线播放| 人成视频在线观看免费观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 三上悠亚av全集在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲av美国av| 精品久久久久久电影网| 欧美性长视频在线观看| av视频免费观看在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲成人免费av在线播放| 69av精品久久久久久| 精品第一国产精品| 亚洲 国产 在线| 国产伦人伦偷精品视频| 黑人猛操日本美女一级片| 麻豆久久精品国产亚洲av | 国产亚洲精品一区二区www| av欧美777| 真人一进一出gif抽搐免费| 午夜日韩欧美国产| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 最近最新免费中文字幕在线| 精品一区二区三区av网在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 免费观看人在逋| www.熟女人妻精品国产| 18禁观看日本| 久久99一区二区三区| 久久人妻av系列| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美在线一区亚洲| 高潮久久久久久久久久久不卡| www.自偷自拍.com| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲专区中文字幕在线| 久久99一区二区三区| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲全国av大片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久人妻av系列| 国产男靠女视频免费网站| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲 欧美一区二区三区| 成人三级黄色视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 高清毛片免费观看视频网站 | 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品成人在线| 国产成人免费无遮挡视频| 免费少妇av软件| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产欧美日韩一区二区三| 三级毛片av免费| 老司机在亚洲福利影院| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久久国产成人精品二区 | 欧美乱妇无乱码| 美国免费a级毛片| 国产91精品成人一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美精品亚洲一区二区| 美女高潮到喷水免费观看| 一级片'在线观看视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 最新美女视频免费是黄的| 国产三级在线视频| a在线观看视频网站| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲成人国产一区在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 午夜两性在线视频| 嫩草影院精品99| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美日本亚洲视频在线播放| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产熟女xx| a级片在线免费高清观看视频| 很黄的视频免费| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产有黄有色有爽视频| 91老司机精品| 亚洲国产精品sss在线观看 | 一区二区三区国产精品乱码| av欧美777| 热99re8久久精品国产| 少妇 在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久国产乱子伦精品免费另类| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美乱色亚洲激情| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品国产一区二区三区四区第35| 久99久视频精品免费| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲av美国av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美最黄视频在线播放免费 | 男女床上黄色一级片免费看| 首页视频小说图片口味搜索| 色哟哟哟哟哟哟| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品一品国产午夜福利视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产黄a三级三级三级人| 一级片'在线观看视频| www.自偷自拍.com| 超色免费av| 国产精品久久久久成人av| 久久精品影院6| 日本三级黄在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 黄色视频不卡| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲伊人色综图| 中文欧美无线码| 成年版毛片免费区| 天天添夜夜摸| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品国产av在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 久久久久久人人人人人| 免费看十八禁软件| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲精品粉嫩美女一区| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 最好的美女福利视频网| 99在线视频只有这里精品首页| 一二三四在线观看免费中文在| 中文字幕人妻丝袜制服| 一级毛片精品| 国产一卡二卡三卡精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精华一区二区三区| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产av精品麻豆| 我的亚洲天堂| 另类亚洲欧美激情| 十分钟在线观看高清视频www| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 麻豆久久精品国产亚洲av | 亚洲精品在线美女| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品国产av在线观看| 婷婷丁香在线五月| 99国产极品粉嫩在线观看| 69精品国产乱码久久久| 亚洲欧美激情在线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 露出奶头的视频| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品一二三| 黑人猛操日本美女一级片| 99re在线观看精品视频| 女人被狂操c到高潮| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美日韩视频精品一区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 性色av乱码一区二区三区2| 午夜91福利影院| 黄频高清免费视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲av熟女| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 叶爱在线成人免费视频播放| 一级毛片精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 在线免费观看的www视频| 日本三级黄在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 老司机午夜福利在线观看视频| av中文乱码字幕在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 多毛熟女@视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜免费成人在线视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产成人欧美| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日韩av在线大香蕉| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产成人精品久久二区二区免费| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 黄色a级毛片大全视频| 日韩欧美三级三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 1024香蕉在线观看| 欧美大码av| 午夜免费观看网址| 国产高清国产精品国产三级| 在线永久观看黄色视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 一a级毛片在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜影院日韩av| 国产97色在线日韩免费| 午夜影院日韩av| 国产亚洲欧美98| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产三级在线视频| 亚洲免费av在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 欧美黄色淫秽网站| 波多野结衣av一区二区av| 成人国语在线视频| 无遮挡黄片免费观看| 中出人妻视频一区二区| 在线观看一区二区三区激情| 国产97色在线日韩免费| 色在线成人网| 久久草成人影院| 午夜福利欧美成人| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久亚洲精品不卡| 日本三级黄在线观看| 国产精品国产av在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 日本 av在线| 国产精品永久免费网站| 午夜福利一区二区在线看| 多毛熟女@视频| 国产欧美日韩一区二区三| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美黄色片欧美黄色片| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久精品影院6| 久久国产亚洲av麻豆专区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 91九色精品人成在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 又黄又爽又免费观看的视频| 电影成人av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 中文欧美无线码| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 视频区图区小说| 免费看a级黄色片| 99久久综合精品五月天人人| 日本 av在线| 丰满迷人的少妇在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文字幕av电影在线播放| 五月开心婷婷网| 91九色精品人成在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产97色在线日韩免费| av中文乱码字幕在线| 久久草成人影院| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 在线观看一区二区三区| 多毛熟女@视频| 亚洲精品一二三| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 脱女人内裤的视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲av电影在线进入| 日韩国内少妇激情av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 在线观看免费视频日本深夜| 午夜精品在线福利| 国产深夜福利视频在线观看| 国产成人欧美在线观看| 午夜a级毛片| 国产精品 欧美亚洲| 在线免费观看的www视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 中国美女看黄片| 超碰97精品在线观看| 一级作爱视频免费观看| 亚洲少妇的诱惑av| 人妻久久中文字幕网| 国产不卡一卡二| av天堂久久9| 亚洲中文av在线| 高清欧美精品videossex| 中亚洲国语对白在线视频| 老司机靠b影院| 两人在一起打扑克的视频| 国产不卡一卡二| 91老司机精品| 大陆偷拍与自拍| 国产乱人伦免费视频| 久久午夜亚洲精品久久| 波多野结衣高清无吗| 99久久综合精品五月天人人| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人av激情在线播放| 91成年电影在线观看| 欧美性长视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 日本欧美视频一区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 中文字幕精品免费在线观看视频| 视频在线观看一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 狂野欧美激情性xxxx| 久久中文看片网| 亚洲国产欧美网| 免费搜索国产男女视频| 精品国产亚洲在线| 操美女的视频在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品免费久久久久久久清纯| 一区二区三区激情视频| 很黄的视频免费| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产99久久九九免费精品| 午夜亚洲福利在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 亚洲色图av天堂| 69精品国产乱码久久久| 美女大奶头视频| 欧美大码av| 99精国产麻豆久久婷婷| 在线观看66精品国产| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费少妇av软件| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日本免费a在线| 午夜两性在线视频| x7x7x7水蜜桃| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 窝窝影院91人妻| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 |