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    銀杏葉提取物對2型糖尿病大鼠動脈粥樣硬化的抗氧化作用

    2019-07-29 00:40:44荊治華
    糖尿病新世界 2019年9期
    關鍵詞:銀杏葉免疫組化頸動脈

    荊治華

    [摘要] 目的 探討銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo biloba,EGb)在2型糖尿病大鼠模型中預防動脈粥樣硬化的作用。方法 SD健康雄性大鼠30只,隨機分為3組,分別為對照組,銀杏葉提取物100 mg/kg劑量組(EGb100組),銀杏葉提取物200 mg/kg劑量組(EGb200組),對照組給予等容積的生理鹽水,實驗組大鼠為胰島素抵抗和Tokushima大鼠6周(頸動脈損傷前3周至損傷后3周),分別給予銀杏葉提取物100 mg/kg,銀杏葉提取物200 mg/kg。采用免疫組化染色方法觀察損傷動脈的細胞增殖和凋亡情況。結果 實驗組較對照組內(nèi)膜形成明顯減少。EGb200組新生內(nèi)膜形成少于EGb100組,兩實驗組IMR呈劑量依賴性降低。EGb處理組增殖指數(shù)明顯低于對照組。EGb100組和EGb200組間增殖呈劑量依賴性下降 。損傷后3周,EGb處理組細胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組。兩組EGb細胞凋亡水平也呈劑量依賴性升高。結論 EGb在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中具有保護作用,是一種潛在的預防動脈粥樣硬化的治療藥物。

    [關鍵詞] 銀杏葉提取物;2型糖尿病;動脈粥樣硬化

    [中圖分類號] R3? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1672-4062(2019)05(a)-0051-03

    銀杏葉提取物(EGb)已成為治療血管循環(huán)問題和改善記憶最常用的膳食補充劑。這種提取物有兩種主要成分:黃酮類化合物和萜類化合物。有趣的是,這兩種物質具有不同的性質,導致EGb具有獨特多樣的藥理作用。它被用于改善心血管和周圍血管功能不全,預防缺血性損傷等神經(jīng)功能障礙,治療認知功能減退、記憶功能障礙等腦功能障礙。雖然對糖尿病患者的血液循環(huán)和高血糖有良好的作用,但對其抗動脈粥樣硬化作用的直接研究有限。因此,研究了EGb對2型糖尿病大鼠動脈粥樣硬化的保護作用,為臨床研究提供了一定的依據(jù)。報道如下。

    1? 材料與方法

    1.1? 材料

    1.1.1 實驗動物? 雄性健康SD大鼠,體重150~200 g,這些動物均由山西醫(yī)科大學動物實驗中心提供。

    1.1.2 主要試劑及儀器? 多聚甲醛、多聚賴氨酸、EGb 注射液、 鏈脲佐菌素( STZ)、銀杏黃酮苷、萜烯三內(nèi)酯、血糖儀 。

    1.2? 方法

    1.2.1 分組及模型的制備? 將大鼠分為3組(每組10只),治療方法如下:對照組(每天5 mL生理鹽水), EGb100組,每天100 mg/kg,EGb200組,每天200 mg/kg。在2個月的時間里,從5周開始所有大鼠均喂食高脂肪膽固醇飲食。治療2個月后處死大鼠,觀察斑塊形成程度。動脈粥樣硬化斑塊的結果用平均值的均值標準誤差表示。

    1.2.2 大鼠頸動脈球囊剝脫損傷及形態(tài)學分析? 根據(jù)頸動脈球囊損傷的特點,行頸動脈球囊損傷,制作損傷模型[1]。組織學染色切片新生內(nèi)膜的形成程度由平面幾何計算。血管層的橫截面積(即使用Image-Pro Plus 4.5版分析儀(Media Cybernetics, Bethesda, MD, USA)對3個不同的切片(近端、中端和遠端)的管腔、內(nèi)膜和內(nèi)側區(qū)域進行定量。內(nèi)膜中膜比(IMR)是根據(jù)這些測定的平均值計算出來的。

    1.2.3 細胞增殖和炎癥細胞免疫組化染色? 為檢測增殖細胞,進行免疫組化染色,進行增殖細胞核抗原(PCNA),增殖指數(shù)定義為每個組織切片中四個不同扇區(qū)中pna陽性細胞相對于總核細胞計數(shù)的百分比。糖蛋白ED-1(Dako, Carpinteria, CA, USA)主要表達于組織巨噬細胞溶酶體膜,對損傷頸動脈進行染色。

    1.3? 統(tǒng)計方法

    應用 SPSS 21.0 統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(x±s)表示,各實驗組與對照組比較采用單因素方差分析,多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2? 實驗結果

    2.1? 大鼠頸動脈球囊剝脫損傷及形態(tài)學分析結果

    在體內(nèi)抑制新內(nèi)膜形成和斑塊發(fā)展損傷后3周,EGb處理組較對照組內(nèi)膜形成明顯減少(圖1A)。EGb200組新生內(nèi)膜形成少于EGb100組(圖1A, B),如圖1B所示,兩組EGb處理組間IMR呈劑量依賴性降低。EGb組斑塊體積呈劑量依賴性下降。見圖1。

    2.2? 細胞增殖和炎癥細胞免疫組化染色結果

    EGb處理組增殖指數(shù)明顯低于對照組。EGb100組和EGb200組間增殖呈劑量依賴性下降 (圖2B)。損傷后3周,EGb處理組細胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組(圖2C)。兩組EGb細胞凋亡水平也呈劑量依賴性升高。大鼠頸動脈血管壁炎癥細胞標記物ED-1免疫組化染色,見圖2。

    3? 討論

    在該研究中,銀杏葉提取物在2型糖尿病大鼠動脈粥樣硬化治療中,可以大大減少新生內(nèi)膜形成,EGb200、EGb100組是伴隨著血管平滑肌細胞的增殖和細胞凋亡增加(VSMCs)。在EGb的亞組分中,山奈酚和槲皮素在預防動脈粥樣硬化中發(fā)揮了重要作用。VSMCs的增殖和遷移是球囊損傷后內(nèi)膜形成的重要因素[2-3]。EGb具有抗氧化、抗炎和抗血小板聚集作用[4-6]。最近,學者[5]觀察到銀杏葉提取物降低了同型半胱氨酸誘導的兔腹主動脈球囊損傷后內(nèi)膜的增厚,提示銀杏葉提取物可能與抑制MMP-9表達、增加內(nèi)源性p21表達有關。然而,銀杏葉提取物對SMC在體內(nèi)或體外的增殖或遷移的直接影響卻沒有研究。因此,我們綜合研究EGb的直接作用機制,細胞凋亡以及免疫組化染色對2型糖尿病動物損傷血管內(nèi)細胞增殖和凋亡的影響。綜上所述,EGb的治療減少2型糖尿病大鼠頸動脈球囊損傷后再狹窄的研究。EGb顯著抑制VSMCs的脯氨酸增殖和遷移,促進細胞凋亡,減輕炎癥過程。另外有研究顯示,EGb對葡萄糖穩(wěn)態(tài)、脂聯(lián)素和hsCRP均有良好的抑制作用的水平。在EGb的子成分中,山奈酚和槲皮素似乎在預防動脈粥樣硬化中發(fā)揮著重要作用。這些發(fā)現(xiàn)支持了EGb在降低心血管代謝風險方面的新作用,為下一步2型糖尿病動脈粥樣硬化的治療提供一定的依據(jù),EGb在2型糖尿病患者中的治療中還需要具體的臨床干預研究來證實。

    [參考文獻]

    [1]? Clowes AW,Reidy MA,Clowes MM.Kinetics of cellular proliferation after arterial injury.I.Smooth muscle growth in the absence of endothelium[J].Lab Invest,1998,49:327-333.

    [2]? Schwartz RS,Murphy JG,Edwards WD,et al.Restenosis after balloon angioplasty.A practical proliferative model in porcine coronary arteries[J].Circulation,2017,82:2190-2200.

    [3]? Ferns GA,Avades TY.The mechanisms of coronary restenosis: insights from experimental models[J].Int J Exp Pathol,2011(81):63-88.

    [4]? Gohil K, Packer L. Global gene expression analysis identifies cell and tissue specific actions of Ginkgo biloba extract, EGb 761[J].Cell Mol Biol,2017(48):625-631.

    [5]? Oken BS,Storzbach DM,Kaye JA.The efficacy of Ginkgo biloba on cognitive function in Alzheimer disease[J].Arch Neurol,2011(55):1409-1415.

    [6]? Smith JV,Luo Y.Studies on molecular mechanisms of Ginkgo biloba extract[J].Appl Microbiol Biotechnol,2018(64):465-472.

    (收稿日期:2019-01-22)

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