棗遺傳圖譜構(gòu)建研究進展

王中堂 張 鐘 周廣芳 李新崗,* 張 瓊

(1 山東省果樹研究所，山東 泰安 271000；2 西北農(nóng)林科技大學林學院，陜西 楊凌 712100)

棗(ZiziphusjujubaMill.，2n=2x=24)為鼠李科棗屬植物，原產(chǎn)于中國，據(jù)史料記載，在我國棗已有 7 000 余年的栽培歷史[1]。棗果實具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，可鮮食、可制干，深受消費者青睞。據(jù)統(tǒng)計，目前我國棗栽培面積約200萬hm2，2016年折合干棗年產(chǎn)約624.9萬t，干棗產(chǎn)量占總產(chǎn)量的80%[2-3]。此外，棗果實中維生素C含量平均約為250 mg·g-1[4]，環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)超過350 μg·g-1，高于其他同類高等植物[5-6]。棗種質(zhì)資源豐富，約有840個品種，但多數(shù)品種是通過農(nóng)家選優(yōu)和自然實生選育而來，常規(guī)育種方法耗時費力，且目標性較弱，因此，遺傳理論研究和育種技術(shù)創(chuàng)新，是提高定向培育新品種速度的前提。隨著分子生物學技術(shù)的迅猛發(fā)展，棗基因組已廣泛應(yīng)用于鑒定棗樹品種[7-8]、親緣關(guān)系[9]、遺傳多樣性的分析[10-13]、連鎖圖譜的構(gòu)建、數(shù)量性狀位點(quantitative trait loci，QTLs)定位、分子標記輔助育種等研究[14]。利用遺傳圖譜可以進行QTLs，克隆目的基因，從而開展分子輔助育種，因此要實現(xiàn)棗基因組應(yīng)用于棗樹遺傳育種，還需加大遺傳連鎖圖譜的研究[15]。本文對目前國內(nèi)外棗遺傳圖譜構(gòu)建的理論基礎(chǔ)、一般程序和方法、所取得的成果等方面進行簡要概述，并對存在的問題及解決措施進行探討，以期為開展棗農(nóng)藝狀候選基因篩選和分子輔助育種研究提供參考。

1 遺傳圖譜概述

1.1 遺傳圖譜構(gòu)建原理

遺傳作圖是將基因或遺傳標記，以重組型配子推算出重組率并轉(zhuǎn)化而來的遺傳圖距為標準，順序排列成連鎖群的過程[16]。通常以厘摩(centi-morgan，cM)表示標記間的距離[17]。1913年世界上第1張遺傳圖譜被構(gòu)建完成，用于描述果蠅的遺傳特性[18]，在此基礎(chǔ)上，多個物種的遺傳圖譜相繼被構(gòu)建出來[19-24]。隨著圖譜構(gòu)建理論和技術(shù)的提高和分子標記的發(fā)展，遺傳圖譜的標記數(shù)量和密度不斷增加，在染色體上的分布也越來越均勻[25]。早期研究主要通過開發(fā)擴增片段長度多態(tài)性(amplification fragment length polymorphism，AFLP)、隨機擴增多態(tài)性(random amplified polymorphic DNA，RAPD)等分子標記構(gòu)建遺傳圖譜，但所構(gòu)建的遺傳圖譜質(zhì)量較低，且只能通過多個群體、多次作圖才能將圖譜加密，達到理想的效果[15]。微衛(wèi)星(simple sequence repeat,SSR)標記是一種優(yōu)良的、共顯性標記，廣泛應(yīng)用于不同的群體研究中，但其易受到標記數(shù)量限制，也存在標記密度較低的問題[26]。研究表明，下一代測序技術(shù)(next generation sequencing,NGS)開發(fā)包括單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)和插入缺失(insertion-deletion,INDEL)位點較成熟，通過大規(guī)模測序，可開發(fā)大量遺傳標記位點[27]。因此，SNP標記已廣泛運用于構(gòu)建高密度遺傳圖譜、相關(guān)性狀的QTL定位、基因挖掘分析等方面的研究。

1.2 棗樹分子遺傳圖譜構(gòu)建方法

棗樹分子遺傳圖譜的構(gòu)建方法是先確定親本雜交組合，這不僅為后續(xù)構(gòu)建作圖群體提供親本材料，還是群體能否構(gòu)建成功的關(guān)鍵。然后建立作圖群體構(gòu)，開發(fā)合適的分子標記(AFLP、RAPD、SSR、SNP)，測定標記基因型，最后分析標記基因型數(shù)據(jù)，構(gòu)建遺傳圖譜[28]。

1.2.1 選擇親本組合 棗樹親本選擇要求父母本親緣關(guān)系相對較遠，母本為雄性不育，若花期一致，父本花量大則為最佳組合[29]。當前已構(gòu)建圖譜的親本組合中，母本僅有冬棗[30-32]和JMS2[33]，可用資源較少。目前已報道的可作為母本的有13份種質(zhì)，分別為雄性不育1號(JMS1)、雄性不育3號(JMS3)、梨棗、六月棗、酸疙瘩棗[34-35]、早脆王[36]，均為無花粉的雄性不育種質(zhì)；大荔圓棗、圓鈴棗、廣東白棗、小墩墩棗、小棗4、洪趙十月紅棗和小棗25均為穩(wěn)定表現(xiàn)為自花不實或自花可實不育而異花授粉可育率高且種仁飽滿種質(zhì)[37]。

1.2.2 建立作圖群體 棗樹與其他樹種一樣，均是基于雙假測交(double pseudo-testcross)理論，利用F1分離群體進行遺傳圖譜構(gòu)建[38]。但棗樹花小、人工授粉雜交困難，落花落果和胚敗育現(xiàn)象十分嚴重[39-41]，只能通過自然授粉和人工控制自然授粉的方式獲得雜交種子，從而獲得實生后代[29,42]。采集實生后代和父母本(包括可疑父本)新鮮葉片，提取基因組DNA[8,43]。利用父母本(包括可疑父本)進行引物多態(tài)性篩選(表1)。對篩選引物進行PCR擴增，對擴增產(chǎn)物進行毛細管電泳，檢測SSR位點。利用GeneMarker[8]或GeneMapper 4.0[43]軟件讀取毛細管電泳數(shù)據(jù)，利用FlexiBinv2[44]程序矯正讀取數(shù)據(jù)。利用Cervus 3.0軟件[45]對子代、母本和候選父本的等位基因數(shù)量、觀測雜合度、期望雜合度和多態(tài)性信息含量，進行母本已知、父本未知的模擬分析(simulation of parentage analysis)和親子分析(parentage analysis)，在可信度95%條件下找到唯一父本的雜交后代用于構(gòu)建棗樹遺傳作圖群體[8,31-33,43,46]。利用SSR分型技術(shù)可以檢測母本子代的唯一父本，且在選擇親本組合時，母本是否雄性不育則不需要再考慮，只需要考慮兩親本之間的性狀差異，但如果母本雄性不育，則會極大降低SSR分型的工作量。

表1 經(jīng)過篩選的多態(tài)性較好引物Table 1 Selected primers with better polymorphism

1.2.3 選擇適當?shù)姆肿訕擞?，測定標記基因型 棗樹遺傳圖譜構(gòu)建利用的分子標記有AFLP[16,31]、RAPD[47-49]、SSR[30,48]和SNP[31-33]。

1.2.4 常用作圖軟件 可采用FsLinkageMap[31]、Join MAP[50-51]、CARTHAGENE[52]、AntMAP[53]、RECORD[54]、TMAP[55]、MSTMAP[56]、MapMarker等[57]軟件進行單一作圖群體構(gòu)建遺傳圖譜研究，其中FsLinkageMap充分考慮了雙親標記的多種分離類型，主要用于構(gòu)建林木全同胞家系遺傳圖譜[21]，但該軟件尚未被用于棗樹遺傳圖譜構(gòu)建。MapMarker是早期遺傳圖譜構(gòu)建的經(jīng)典軟件，由Lander等[57]開發(fā)，適用于F2群體、回交群體(backcross,BC)和重組自交系群體(recombinant inbred lines,RIL)等群體作圖，具有可操作性強、可定位復(fù)合性狀基因等特點，但其最多只能處理1 000個分子標記，且對于異交林木群體，不能整合1∶1分離和1∶3分離的標記位點[31]，因此尚未用于棗樹遺傳圖譜構(gòu)建。CARTHAGENE、AntMAP、RECORD、TMAP和MSTMAP 5種軟件也均未被用于棗樹遺傳圖譜構(gòu)建研究。目前已構(gòu)建的棗樹遺傳圖譜主要采用Stam[51]開發(fā)的JionMap軟件操作簡單，適合F2、BC、RIL等各類群體，但需購買證書，且該軟件采用最小二乘法來估算相鄰標記間的遺傳距離，可能會影響作圖的準確性。JionMap已出現(xiàn)4.1版本，其功能強大，可同時分析50 000個標記，可利用錨定標記判斷同源連鎖群[45]。采用單一作圖群體構(gòu)建遺傳圖譜會受群體大小限制，圖譜質(zhì)量不高，需要將2個或多個圖譜合并，研究者常采用Mergemap軟件[58]將單個遺傳圖合并成1個基于共享位點的一致圖。如Yan等[59]利用二倍體玫瑰的3個作圖群體，依據(jù)26個共有SSR標記，采用Mergemap軟件構(gòu)建了1張一致性遺傳圖譜，圖譜質(zhì)量較單群體圖譜明顯提升。

2 棗樹遺傳圖譜構(gòu)建研究現(xiàn)狀

由于遺傳背景復(fù)雜，許多棗樹品種存在自花結(jié)實現(xiàn)象，無法得到重組近交系，遺傳作圖較困難，但棗樹遺傳組成高度雜合，在雜交F1時許多遺傳位點會產(chǎn)生分離[29-31]，可采用雙假測交(double pseudo test cross)策略構(gòu)建圖譜。其原理是兩個高度雜合的親本中， 一個親本的雜合位點與另一親本的雜合或隱性純合位點在F1便發(fā)生分離，若一親本為雜合位點，另一親本為隱性純合位點， F1呈 1∶1 分離， 相當于測交，可用于構(gòu)建親本的圖譜； 當雙親均為雜合位點時，呈 3∶1(顯示標記)或 1∶2∶1(共顯性標記)分離，可用于構(gòu)建兩個親本共同的分子連鎖圖及判斷雙親間的同源連鎖群[38]。 目前已有利用雙假測交在蘋果[38]、葡萄[60]、梨[61-62]等果樹上成功構(gòu)建1張或多張遺傳圖譜，并開展大量QTL定位的研究報道，因此，棗樹也可利用該方法構(gòu)建圖譜[63-64]。

2.1 棗樹遺傳圖譜構(gòu)建

我國棗樹分子遺傳圖譜的研究較晚，鹿金穎[49]于2003年以臨猗梨棗(父本)×冬棗(母本)72株F1為作圖材料，利用AFLP標記構(gòu)建了棗樹的第1張遺傳連鎖圖，且該連鎖圖開發(fā)了28個AFLP標記，分布于7個連鎖群上，覆蓋基因組總長度為458.66 cM，平均圖距為16.38 cM，為棗樹遺傳圖譜構(gòu)建研究提供了模板，但進一步研究發(fā)現(xiàn)該圖標記較少，圖距較大，連鎖群與棗樹染色體樹并不對應(yīng)，不能用于后續(xù)QTL精準定位研究。為構(gòu)建更高密度遺傳圖譜，申連英[30]擴大了作圖群體，利用161株臨猗梨棗(父本)×冬棗(母本)F1為作圖群體，構(gòu)建了1張密度更高的遺傳連鎖圖譜，該圖譜包含333個多態(tài)性位點，分布于14個連鎖群上，覆蓋基因組總長度為1 237.4 cM，標記間平均圖距3.9 cM，其中大于 10 cM的標記間隔有21個。雖然圖譜多態(tài)性位點和覆蓋基因組總長度均增加，且標記間平均圖距減小，可進行QTL定位研究，但同時其大于10 cM的標記間隔較多，定位準確度較低，且遺傳圖譜連鎖群與棗樹染色體樹也不對應(yīng)，圖譜質(zhì)量有待提高。齊靖等[47-48]采用RAPD和SSR標記，以150株臨猗梨棗(父本)×冬棗(母本)F1為作圖群體，整合申連英[30]開發(fā)的419個AFLP標記，共同進行連鎖分析，構(gòu)建了1張包含35個RAPD標記和388個AFLP標記，15個連鎖群的遺傳連鎖圖譜，該圖覆蓋棗基因組長度為1 309.4 cM，標記間平均距離為3.1 cM，大于10 cM的標記間隔僅14個。與申連英[30]構(gòu)建的圖譜相比，覆蓋基因組總長度增加72 cM，標記間平均圖距縮短0.8 cM，大于10 cM的標記間隔減少7個，圖譜飽和度顯著提高，但圖譜連鎖群數(shù)目與棗樹染色體仍不對應(yīng)，其原因可能是以上3張圖均使用傳統(tǒng)的AFLP、RAPD等標記，缺乏基因組測序的相關(guān)信息，圖譜上可用標記數(shù)量較少、標記分布密度較低、連鎖群上多具有較大孔隙，難以進行全面的性狀QTL研究[31]。因此，開發(fā)新的SSR標記用于棗樹譜圖構(gòu)建很有必要。許莉斯[65]以150株臨猗梨棗(父本)×冬棗(母本)F1為作圖群體，開發(fā)了4個SSR標記，整合申連英[30]對此群體研究得出的333個AFLP標記，進行共同連鎖分析，構(gòu)建了包含336個AFLP標記和4個SSR標記遺傳圖譜，該圖譜包含14個連鎖群，4個SSR標記分別位于SLG3、SLG6、SLG9和SLGl3連鎖群，但與齊靖等[47-48]構(gòu)建的圖譜相比減少了52個AFLP標記，且該圖譜連鎖群與棗樹染色體的數(shù)目仍不對應(yīng)，其原因可能是染色體交換頻繁，標記間的連鎖關(guān)系不穩(wěn)定或者標記數(shù)量有限，標記間隙較大，存在空缺區(qū)段，導(dǎo)致同一條染色體上的連鎖群不能連鎖。

隨著分子測序技術(shù)的迅猛發(fā)展，Zhao等[33]以105株邢16(父本)×雄性不育2號-JMS2(母本)F1為作圖群體，利用RAD Tag測序技術(shù)開發(fā)了1張棗樹高密度遺傳連鎖圖譜，該圖譜整合了2 748個SNP標記，分布在12條連鎖群上，基因覆蓋總長度為913.87 cM，平均標記間距離為0.34 cM，該圖譜較前期構(gòu)建的圖譜多態(tài)性位點增加近8倍，標記間平均圖距更加精細。Zhang等[32]以145株中寧圓棗(父本)×冬棗(母本)F1為作圖群體，采用基因分型簡化測序(genotyping by sequencing, GBS)技術(shù)，也構(gòu)建了1張由12個連鎖群組成的高密度遺傳圖譜，獲得了2 540個SNP標記，圖譜總長度為1 456.73 cM，平均遺傳距離為0.88 cM，該圖譜較Zhao等[33]構(gòu)建的圖譜覆蓋總長度增加542.86 cM，但SNP標記數(shù)量減少208個，平均標記間距離增加0.54 cM。張振東[31]以99株映山紅(父本)×冬棗(母本)F1為作圖群體，采用限制性酶切位點相關(guān)的DNA測序(restriction-site associated DNA sequencing，RAD-seq)技術(shù)，也構(gòu)建了1張棗樹高密度遺傳圖譜，包含4 669個標記，其中SSR標記46個，SNP標記4 137個和InDel標記486個，12個連鎖群(LG1～12)，覆蓋基因組總長度為2 643.79 cM，平均遺傳距離為0.57 cM，該圖較Zhang等[32]圖譜覆蓋總長度有所增加，SNP標記數(shù)量多，但平均遺傳距離較Zhao等[33]圖譜大。這3張圖譜是截至目前基因組覆蓋最全面、標記密度最大的棗樹遺傳圖譜。已發(fā)表的棗樹遺傳圖譜詳見表2。

表2 已構(gòu)建的棗樹遺傳圖譜Table 2 The genetic map of jujube was construted

2.2 棗樹性狀QTL定位研究

構(gòu)建棗樹遺傳連鎖圖譜的目的之一是進行重要性狀QTL定位研究，申連英[30]、齊靖[47]利用早期開發(fā)的遺傳圖譜，對棗樹樹干、二次枝、葉片性狀、葉部病害、葉片營養(yǎng)、枝條抗寒性等方面進行了初步的QTL定位研究(表3)，在生長相關(guān)性狀方面，檢測到3個QTLs與2年生主干節(jié)間長度相關(guān)，7個QTLs與2年生二次枝節(jié)間長度相關(guān)，6個QTLs與3年生二次枝節(jié)間長度相關(guān)，6個QTLs與2年生棗吊節(jié)間長相關(guān)，8個QTLs與3年生棗吊節(jié)間長相關(guān)。在葉片性狀方面，檢測到7個QTLs與葉片長度相關(guān)，9個QTLs與葉片寬度相關(guān)，1個QTLs與棗吊葉面積相關(guān)，3個QTLs與二次枝葉面積相關(guān)，2個QTLs與葉緣鋸齒數(shù)相關(guān)。在葉片營養(yǎng)方面，檢測到3個QTLs與葉片全N含量相關(guān)，7個QTLs與葉片全P含量相關(guān)，3個QTLs與葉片全K含量相關(guān)。枝條抗寒性方面，檢測到7個QTLs與-25℃相對電導(dǎo)率變化系數(shù)相關(guān)，9個QTLs與-35℃相對電導(dǎo)率變化系數(shù)相關(guān)。葉部病害方面，檢測到5個QTLs與葉片失綠相關(guān)，5個QTLs與棗銹病相關(guān)，11個QTLs與棗褐斑病相關(guān)。許莉斯[65]利用已構(gòu)建的AFLP連鎖圖譜對棗果實縱徑、橫徑、果形指數(shù)、單果重進行了QTL定位分析。孫擁軍等[66]利用許莉斯[65]構(gòu)建的AFLP連鎖圖譜，對中心干直徑、二次枝著生角、二次枝彎度、二次枝曲度性狀進行了QTL定位分析，但定位到的QTL數(shù)量較少，能夠解釋表型變異的比率較低。

注：“-”表示無。

Note:‘-’ indicates no.

張振東[31]利用整合圖譜，對株高、地徑、葉面積和抗寒性4個表型性狀進行QTL定位，利用MapQTL 6.0的Kruskal-Wallis模型，檢測到117個QTLs，將控制株高、地徑和葉面積等生長相關(guān)性狀的QTLs定位到3號連鎖群48.18～85.23 cM區(qū)域和134.80～195.72 cM區(qū)域，與抗寒性相關(guān)的QTLs定位到第7號連鎖群0～45.41 cM區(qū)域，由于該圖譜群體數(shù)量只有99株，如擴大作圖群體，該研究QTL定位還能更加精確。早期圖譜質(zhì)量較低，調(diào)查性狀較少，真正與果實品質(zhì)有關(guān)的精細QTL定位尚未開展，已構(gòu)建的高密度遺傳圖譜也還未進行QTL定位研究[32-33]。

2.3 棗樹遺傳圖譜構(gòu)建中存在的問題

棗樹高密度遺傳圖譜的構(gòu)建為棗樹遺傳育種提供了新的工具(表2、3)，目前已構(gòu)建的棗樹遺傳圖譜，基因組的覆蓋度和圖距質(zhì)量越來越高，為實際應(yīng)用提供了基礎(chǔ)，但也存在作圖群體較小的問題。遺傳標記數(shù)目的多少與這些標記基因在圖譜上的定位是否準確共同衡量遺傳圖譜的質(zhì)量[67]。在圖譜構(gòu)建時，要想確保檢測到減數(shù)分裂時的重組事件，需要一定數(shù)量的作圖群體。構(gòu)建框架圖譜要求的理論群體數(shù)量應(yīng)大于150個[68]，當需要檢測到的重組分數(shù)達到0.3，LOD值為3.0時，則需要不低于300個的群體[61-62]。目前已構(gòu)建的棗樹遺傳圖譜[30-33,47-48,65]使用的分離群體數(shù)量均少于300個。若遺傳圖譜用于QTLs定位，則要求標記的平均圖距應(yīng)低于10 cM，若用于基因克隆，則標記間的平均圖距低于1 cM[25]。當前已構(gòu)建的棗樹遺傳圖譜，大部分可以用于QTLs定位，只有3張圖譜可用于目的基因克隆。此外，已進行的QTL研究中，存在標記數(shù)量少，定位不準確的現(xiàn)象，原因可能是圖譜自身質(zhì)量不高，數(shù)量性狀調(diào)查數(shù)據(jù)較少，為提高定位的準確性，應(yīng)采取多年、多地點性狀調(diào)查。

3 展望

目前已建成的棗樹遺傳連鎖圖譜由于各種限制，還未全面進入應(yīng)用階段。接下來可從以下幾個方面進行研究，以擴大棗樹遺傳圖譜的應(yīng)用范圍。

3.1 優(yōu)化親本組合

當前已構(gòu)建圖譜的親本組合為冬棗(母本)×臨猗梨棗(父本)、JMS2(母本)×邢16(父本)、冬棗(母本)×中寧圓棗(父母)、冬棗(母本)×映山紅(父本)，母本只有冬棗和JMS2。已報道可作母本的資源有13個，分別是無花粉的棗雄性不育種質(zhì)：雄性不育1號(JMS1)、雄性不育3號(JMS3)、梨棗、六月棗、酸疙瘩棗[34-35]、早脆王[36]；穩(wěn)定表現(xiàn)自花不實或自花可實不育而異花授粉可育率高且種仁飽滿種質(zhì)：大荔圓棗、圓鈴棗、小墩墩棗、小棗4、小棗25、廣東白棗、洪趙十月紅棗[37]。但以上品種還未用于圖譜構(gòu)建，因此應(yīng)利用分子標記技術(shù)加大對性狀明顯的優(yōu)良品種的自交不親和鑒定，發(fā)現(xiàn)更多適用于母本的品種，以擴大品種選擇范圍。

3.2 擴大作圖群體

增加作圖群體數(shù)量是提高遺傳圖譜質(zhì)量的重要措施之一[68]。目前已構(gòu)建的棗樹遺傳圖譜[30-33,48]群體數(shù)量均低于150株(除申連英[30]、齊靖等[47-48])。圖譜要滿足精細QTLs定位，分離群體數(shù)量應(yīng)為200～300個[69]，而當前圖譜群體數(shù)量明顯不足，因此利用SSR分型技術(shù)[8,43]進行子代鑒定對擴大作圖群體至關(guān)重要，可以明顯提高圖譜質(zhì)量。因大多數(shù)擁有共同母本(冬棗)，利用當前已構(gòu)建圖譜，基于相同的參考基因組構(gòu)建圖譜，根據(jù)2套或多套圖譜的共享位點，利用MergeMap[58-59]軟件進行2個或多個圖譜整合，構(gòu)建一致性遺傳圖譜，提升圖譜質(zhì)量。

3.3 研發(fā)適合棗樹自身特點的作圖理論和方法

農(nóng)作物多利用高世代家系進行作圖，這些家系標記的分離類型簡單，而大多數(shù)棗樹為自花結(jié)實，無法采用近交物種的F2或回交子代。當前，棗樹和其他果樹一樣，均是利用雙假測交理論，以雜交F1為作圖群體，而棗樹花小、人工授粉雜交困難，落花落果和胚敗育十分嚴重[39-40]，獲得定向雜交的F1困難，且獲得的群體在生長過程中易受棗瘋病侵害，可能發(fā)生丟失，因此，在獲得雜交群體后應(yīng)及時對各個體進行備份。此外，還應(yīng)加快研發(fā)適合棗樹自身特點的作圖理論和方法，加速棗樹遺傳圖譜的構(gòu)建。

3.4 加快利用已構(gòu)建圖譜的速度

目前雖已構(gòu)建了3張棗樹高密度遺傳圖譜[31-33]，但尚未有利用圖譜進行果實性狀QTL定位的研究報道。未來應(yīng)盡快開展QTL定位研究，以期為重要性狀目標基因克隆奠定基礎(chǔ)。

3.5 加強資源共享

遺傳圖譜的構(gòu)建需要合適的親本組合，這就要求資源保存單位之間能夠資源共享，共同利用，合作開發(fā)。目前已構(gòu)建的遺傳圖譜利用群體的親本組合中，母本均為冬棗[30-32,48-49](除JMS2[33])。遺傳圖譜構(gòu)建單位可以開放資源，依據(jù)作圖群體母本相同，基于同一個參考基因組構(gòu)建圖譜，根據(jù)每套圖譜的共有位點，進行圖譜整合，對現(xiàn)有圖譜加以利用。此外，利用西北農(nóng)林科技大學[3]和河北農(nóng)業(yè)大學[70]的棗全基因組測序數(shù)據(jù)，可以進行標記開發(fā)，增加標記密度，并驗證標記連鎖關(guān)系是否正確。