提高肉羊同期發(fā)情及胚胎移植效果的技術(shù)研究

劉學(xué)峰 朱貴 李信濤 佟桂芝 李魯蒙 海龍 王偉霞 郭立宏

摘要：針對(duì)我國(guó)肉羊良種化和繁殖技術(shù)水平低的現(xiàn)狀，采用現(xiàn)代繁殖生物技術(shù)是提高優(yōu)質(zhì)肉用種羊利用率、縮短生產(chǎn)周期、加速良種肉羊擴(kuò)繁、促進(jìn)肉羊產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的必經(jīng)之路。把肉羊胚胎移植過(guò)程中的同期發(fā)情、超數(shù)排卵、腹腔鏡輸精等關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了創(chuàng)新，并與傳統(tǒng)方法效果進(jìn)行了對(duì)比分析，提高了良種供體母羊的利用率，降低了胚胎移植技術(shù)的成本，突破了肉羊胚胎移植成功率低的技術(shù)瓶頸，促進(jìn)了肉羊胚胎移植產(chǎn)業(yè)化。

關(guān)鍵詞：肉羊;同期發(fā)情;超數(shù)排卵;腹腔鏡輸精

中圖分類號(hào)：S826.3 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-9737（2019）04-0006-02

近年來(lái)，由于炒種熱的降溫和胚胎移植技術(shù)水平的提高，肉羊胚胎移植收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)趨于理性化，胚胎移植技術(shù)正在向產(chǎn)業(yè)化挺進(jìn)。過(guò)去每獲得1只胚胎移植斷奶羔羊大致需支出人民幣4000元左右，而現(xiàn)在只需1000元左右，同市場(chǎng)上純種肉羊每只5000～8000元價(jià)格比，有很大的經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)。再加上一只供體母羊一次超排可獲5只羔羊，一個(gè)繁殖季節(jié)超排4次以上，可獲羔羊20只以上，是肉用種羊原種迅速擴(kuò)繁的最有效途徑。特別是冷凍胚胎移植，解決了鮮胚移植半徑小和保存時(shí)間短的難題。通過(guò)胚胎移植集成技術(shù)，即為良種擴(kuò)繁與新品種（品系）選育奠定了基礎(chǔ)，企業(yè)也收到了很好的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)也創(chuàng)造了極大的社會(huì)效益。因此，肉羊胚胎移植應(yīng)用于生產(chǎn)，在我國(guó)進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化發(fā)展前景廣闊。

1 材料

1.1 供體羊

選取2～3歲繁殖性能正常的經(jīng)產(chǎn)純種杜泊羊母羊作為供體羊，統(tǒng)一飼養(yǎng)管理，

1.2 藥品

注射用血促性素（孕馬血清，PMSG）購(gòu)自寧波第二激素廠;氯前列烯醇購(gòu)自上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所;陰道海綿栓、胚胎保存液、O-FSH 超數(shù)排卵藥、沖胚液全部為新西蘭進(jìn)口。

1.3 器械

主要器械有外科手術(shù)器械、手術(shù)保定架、體視顯微鏡、腹腔鏡、沖卵管、檢卵針、移植管等。

2 方法

2.1 誘導(dǎo)同期發(fā)情技術(shù)

在非繁殖季節(jié)內(nèi)母羊處于乏情期，不表現(xiàn)明顯的發(fā)情癥狀，受體母羊同期發(fā)情效果差， 直接影響胚胎移植效果。采用預(yù)飼養(yǎng)技術(shù)+VE+CIDR（陰道激素緩釋裝置）+PMSG（孕馬血清）法，對(duì)乏情期受體母羊進(jìn)行誘導(dǎo)同期發(fā)情。

2.2 超數(shù)排卵技術(shù)

根據(jù)不同季節(jié)、日照時(shí)間和供體母羊營(yíng)養(yǎng)狀況，對(duì)不同品種供體母羊采用預(yù)飼養(yǎng)技術(shù)+VE+CIDR+ FSH（垂體促卵泡素）+LH（垂體促黃體生成素）法，采用FSH四天遞減注射超排方案，供體母羊排卵數(shù)、回收胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)（10.4±2.1）均高于常規(guī)的三天等量注射法可用胚胎數(shù)（4.0±5.2），超排效果顯著。

2.3 供體羊腹腔鏡輸精

取栓的第2天對(duì)供體羊進(jìn)行試情， 對(duì)發(fā)情母羊于發(fā)情當(dāng)天分別進(jìn)行子宮頸輸精及腹腔鏡輸精。

2.4 沖胚

以開(kāi)始配種日為第0天，于配種后的第6天或第7天通過(guò)手術(shù)法子宮角沖出胚胎。沖胚液和短期保存液均為加拿大進(jìn)口產(chǎn)品，手術(shù)前置于38℃的水浴中預(yù)熱。在一側(cè)子宮角基部用鈍鉗刺透子宮壁，然后將8#～10#沖卵管從此孔導(dǎo)入子宮角大彎處，給沖卵管氣囊充氣（充氣量2～5 mL），拔出沖卵管內(nèi)芯，用20 mL 注射器與針頭連接，并由此向子宮腔內(nèi)注入沖卵液。注入沖卵液的方法為：先注入沖卵液20～25 mL，對(duì)超排反應(yīng)好的供體可再重復(fù)沖一次，然后注入空氣5～10 mL，此方法可保證胚胎的有效回收。用Φ9 cm培養(yǎng)皿接收沖卵液。最后用手指輕輕壓擠子宮角，讓沖卵液盡量回收完全，然后氣囊放氣，用同樣的方法沖另一側(cè)子宮角。每側(cè)子宮角約需40 mL沖卵液。

沖胚完畢后，用25～30℃的生理鹽水將子宮及卵巢沖洗干凈，然后送回腹腔，將子宮復(fù)位，并向腹腔倒入250 mL消毒液。分別對(duì)腹膜、肌肉和皮膚進(jìn)行縫合。供體母羊創(chuàng)口采用兩層縫合法。即腹膜與肌肉進(jìn)行縫合，皮膚進(jìn)行結(jié)節(jié)縫合。針腳間距1 cm。在肌肉與皮膚間撒適量青霉素粉，以防創(chuàng)口感染。術(shù)后注射青霉素80萬(wàn)IU，鏈霉素100萬(wàn)IU。腹腔鏡微創(chuàng)術(shù)回收肉羊體內(nèi)胚胎技術(shù)利用腹腔鏡對(duì)肉羊供體母羊?qū)嵤┪?chuàng)手術(shù)，借助自制的沖胚針和回卵管，對(duì)供體母羊進(jìn)行非開(kāi)放性腹腔內(nèi)沖胚，從而有效回收肉羊體內(nèi)胚胎技術(shù)。腹腔鏡微創(chuàng)術(shù)回收肉羊體內(nèi)胚胎技術(shù)利用腹腔鏡對(duì)肉羊供體母羊?qū)嵤┪?chuàng)手術(shù)，借助自制的沖胚針和回卵管，對(duì)供體母羊進(jìn)行非開(kāi)放性腹腔內(nèi)沖胚，從而有效回收肉羊體內(nèi)胚胎技術(shù)。

2.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和顯著性檢驗(yàn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 誘導(dǎo)同期發(fā)情技術(shù)

小尾寒羊非繁殖季節(jié)采用生殖激素進(jìn)行誘導(dǎo)肉羊發(fā)情，在不同季節(jié)母羊發(fā)情率（97.0%、77.5%、87.5%）之間及受胎率（97.44%、87.10%、91.43%）之間存在顯著差異（P<0.05），秋季效果最好，春季次之，夏季最次（詳見(jiàn)表1）。

3.2 不同超排方案的效果對(duì)比

采用FSH四天遞減注射超排方案，供體母羊排卵數(shù)、回收胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)（10.4±2.1）均顯著高于常規(guī)的三天等量注射法可用胚胎數(shù)（4.0±5.2），超排效果顯著（P<0.05），見(jiàn)表3。

4 討論與結(jié)論

4.1 誘導(dǎo)同期發(fā)情、兩年三產(chǎn)高頻繁殖技術(shù)

通過(guò)誘導(dǎo)同期發(fā)情技術(shù)、胚胎移植及羔羊早期斷奶技術(shù)，實(shí)現(xiàn)一年兩產(chǎn)或兩年三產(chǎn)，一年兩產(chǎn)可使母羊的繁殖率提高90%～100%，生產(chǎn)效益提高40%～50%，其核心是母羊發(fā)情調(diào)控、胚胎移植、羔羊早期斷奶和早期妊娠檢查。兩年三產(chǎn)體系，比一年兩產(chǎn)體系增加40%，其核心是母羊的多胎處理、發(fā)情調(diào)控和羔羊早期斷奶，強(qiáng)化育肥。小尾寒羊非繁殖季節(jié)采用生殖激素進(jìn)行誘導(dǎo)肉羊發(fā)情，在不同季節(jié)母羊發(fā)情率（97.0%、77.5%、87.5%）之間及受胎率（97.44%、87.10%、91.43%）之間存在顯著差異（P<0.05），秋季效果最好，春季次之，夏季最次。

在非繁殖季節(jié)內(nèi)母羊處于乏情期，不表現(xiàn)明顯的發(fā)情癥狀，受體母羊同期發(fā)情效果差，直接影響胚胎移植效果。采用預(yù)飼養(yǎng)技術(shù)+VE+CIDR+PMSG法，對(duì)乏情期受體母羊進(jìn)行誘導(dǎo)同期發(fā)情。

4.2 利用腹腔鏡定時(shí)輸精技術(shù)

采用在肉羊供體母羊撤栓后48 h，利用腹腔鏡子宮內(nèi)一次定時(shí)輸精法，不僅提高了胚胎受精率、而且降低了胚胎的退化率。對(duì)于超排肉羊來(lái)說(shuō)，明顯好于常規(guī)子宮頸口人工授精和自然交配效果;在超排肉羊中自然交配或子宮頸輸精時(shí)肉羊子宮頸的卷繞結(jié)構(gòu)使精液很難精確到位，常出現(xiàn)不受精的現(xiàn)象。另外，同期發(fā)情和超數(shù)排卵處理本身對(duì)精子通過(guò)宮頸運(yùn)輸也有一定干擾作用，這對(duì)受精率和可移植胚胎的數(shù)量有一定影響。項(xiàng)目組改變了傳統(tǒng)的子宮頸口輸精方法，采用腹腔內(nèi)窺鏡輸精技術(shù)，將精液直接輸?shù)絻蓚?cè)子宮角前端，突破了超排羊人工授精胚胎受精率低和優(yōu)質(zhì)胚胎率低的技術(shù)難題。

4.3 超數(shù)排卵技術(shù)

根據(jù)不同季節(jié)、日照時(shí)間和供體母羊營(yíng)養(yǎng)狀況，對(duì)不同品種供體母羊采用預(yù)飼養(yǎng)技術(shù)+VE+CIDR+ FSH+ LH，采用FSH四天遞減注射超排方案，供體母羊排卵數(shù)、回收胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)（10.4±2.1）均高于常規(guī)的三天等量注射法可用胚胎數(shù)（4.0±5.2），超排效果顯著。重復(fù)超排將比一次超排獲得胚胎更多，根據(jù)不同供體母羊上一次超排效果，調(diào)整超排方法，制定個(gè)體羊超排方案，可以獲得供體羊最好的超排效果。