三種桃果實(shí)中的兒茶素、表兒茶素含量比較

吳飛飛 張笛 周靜 王富榮 何華平 徐凌云

摘要：采用HPLC測(cè)定不同時(shí)期紅肉桃品種天仙紅、白肉桃品種金華大白桃和黃肉桃品種錦香果實(shí)中的兒茶素和表兒茶素含量。結(jié)果表明，紅、黃、白肉桃果皮中兒茶素含量分別為66.2～170.1、64.9～169.5和18.6～146.3 μg/g·FW，果肉中兒茶素含量分別為0.2～31.7、7.6～33.8和2.1～25.1 μg/g·FW，果皮中表兒茶素含量分別為4.9～24.3、8.4～17.2和2.8～7.2 μg/g·FW，果肉中表兒茶素含量分別為1.0～35.8、1.5～29.5和1.6～4.8 μg/g·FW。桃果實(shí)果皮中兒茶素含量顯著高于表兒茶素，果皮中兒茶素含量高于果肉，在成熟早期白肉桃、成熟中期黃肉桃和成熟后期紅肉桃果實(shí)中兒茶素和表兒茶素含量較高。

關(guān)鍵詞：桃;兒茶素;表兒茶素;高效液相色譜法（HPLC）

中圖分類號(hào)：S662.1;O657.7+2? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）09-0110-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.09.026? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Abstract： The HPLC technology was used to determine the content of catechin and epicatechin in the fruits of red peach variety “Tianxianhong”， white peach variety “Jinhua Dabaitao” and yellow peach variety “Jinxiang”. In red， yellow and white peach cultivars， the contents of catechin in peels were 66.2～170.1， 64.9～169.5 and 18.6～146.3 μg/g·FW， the contents of catechin in the flesh were 0.2～31.7， 7.6～33.8 and 2.1～25.1 μg/g·FW， the epicatechin contents in the peels were 4.9～24.3， 8.4～17.2 and 2.8～7.2 μg/g·FW， and the epicatechin contents in the pulp were 1.0～35.8， 1.5～29.5 and 1.6～4.8 μg/g·FW， respectively. The content of catechin in the peels was significantly higher than that of epicatechin. The content of catechins in the peels was higher than that in the flesh. The contents of catechin and epicatechin were high in white flesh peach at the early stage of ripening， but high in yellow flesh peach at the mid-maturing stage of ripening， and high in red flesh peach at late-maturing stage of ripening.

Key words： Peach; Catechin; Epicatechin; HPLC

兒茶素、表兒茶素廣泛存在于藥材和茶葉等植物和植物性食物（水果、硬果等）中，屬于多酚類物質(zhì)中的黃烷-3-醇類化合物，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、改善糖尿病和神經(jīng)退行性病變、調(diào)節(jié)免疫功能等生物活性[1-3]。中國(guó)是桃（Prunus persica L.）資源的發(fā)源地，有4 000多年的歷史和1 000多個(gè)桃品種，占世界桃品種的1/3[4]。研究表明，綠原酸、新綠原酸、兒茶素和表兒茶素是桃資源中含量較高的多酚類物質(zhì)，是桃資源生物活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[4，5]。本研究以湖北省特色桃資源紅肉品種天仙紅為主要試驗(yàn)材料[6]，與白肉品種金華大白桃和黃肉品種錦香進(jìn)行比較，采用HPLC同時(shí)測(cè)定不同生長(zhǎng)時(shí)期桃果皮和果肉中兒茶素和表兒茶素的含量，為桃資源生物活性成分的進(jìn)一步研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

兒茶素對(duì)照品（批號(hào)為201203）、表兒茶素對(duì)照品（批號(hào)為200102）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;NaF、三氟乙酸為分析純，甲醇、乙腈為色譜純，均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

桃樣品采自湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)茶葉研究所桃資源育種圃，分別為紅肉桃品種天仙紅，黃肉桃品種錦香，白肉桃品種金華大白桃，從坐果的第16天開(kāi)始采摘至果實(shí)落果，每隔一定的時(shí)間采摘一次，均采摘果樹(shù)不同部位的果實(shí)，每個(gè)品種采摘10個(gè)，將采摘的桃樣進(jìn)行皮肉分離去核，經(jīng)液氮冷凍后放于-80 ℃冰箱中備用。

1.2? 儀器

Aligent 1260（DAD檢測(cè)器）高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司;Bs201s電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;XHF-D高速內(nèi)切式勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技有限公司;SHZ-D（Ⅲ）真空抽濾機(jī)，鞏義市英古峪予華儀器廠;RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠。

1.3? 方法

1.3.1? 對(duì)照品溶液的配制? 精密稱取適量?jī)翰杷?、表兒茶素?duì)照品于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得對(duì)照品母液。分別移取一定量的兒茶素（表兒茶素）母液，混合后，甲醇稀釋得到濃度分別為0.25（0.1）、1.00（0.5）、2.50（1.0）、5.00（2.0）、10.00（5.0）、25.00（10.0）、50.00（20.0） μg/mL的兒茶素（表兒茶素）混合對(duì)照品溶液。

1.3.2? 供試品溶液的制備? 參照Tomas-Barbera等[7]的提取方法，提取液為80%甲醇（含2 mmol/L NaF），6 g桃樣經(jīng)液氮研磨后加入30 mL提取液后勻漿30 s，避光靜置3 h后，抽真空過(guò)濾，濾液經(jīng)45 ℃旋蒸濃縮，加甲醇定容于10 mL棕色容量瓶中，過(guò)0.22 μm膜后備用，平行3次。

1.3.3? HPLC色譜條件? 參照Ceccarelli等[8]的方法，經(jīng)過(guò)改進(jìn)得到的色譜條件為色譜柱HiSep C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為0.03%三氟乙酸水溶液∶乙腈（V∶V=80∶20），流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)205 nm，柱溫30 ℃。

1.3.4? 樣品測(cè)定? 取桃樣品適量，粉碎，按照“1.3.2”的方法制備供試品溶液，以“1.3.3”的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算桃樣品中兒茶素和表兒茶素的含量。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 色譜結(jié)果

在“1.3.3”色譜條件下進(jìn)行分析，混合標(biāo)準(zhǔn)品（A）和紅肉桃樣品（B）色譜情況見(jiàn)圖1。其中標(biāo)準(zhǔn)品兒茶素保留時(shí)間為4.833 min，表兒茶素保留時(shí)間為5.581 min，樣品在4.837和5.568 min分離，且分離良好，溶劑峰無(wú)干擾，表明該方法有較高的專屬性。

2.2? 線性關(guān)系考察

各對(duì)照品溶液照“1.3.3”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積A為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液的濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得兒茶素和表兒茶素的回歸方程分別為：兒茶素A=118.01C+58.147，r=0.996 7;表兒茶素A=74.944C+4.896 2，r=0.999 2，表明兒茶素在12.5～20.0 μg/mL、表兒茶素在0.1～20.0 μg/mL范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3? 精密度試驗(yàn)

在“1.3.3”色譜條件下，配制低、中、高不同濃度的兒茶素（表兒茶素）混合對(duì)照品溶液，濃度分別為：1（0.5）、5（2.0）、50（20.0） μg/mL，進(jìn)樣量為20 μL，平行操作5次測(cè)得日內(nèi)精密度。然后將不同濃度的對(duì)照品溶液按照上述方法配制并連續(xù)進(jìn)樣3 d，測(cè)得日間精密度?；旌蠈?duì)照品溶液低、中、高濃度的日間精密度及日內(nèi)精密度RSD均小于5%，表明精密度良好，符合檢測(cè)要求。

2.4? 加樣回收率試驗(yàn)

取桃樣加液氮研磨后稱取10份桃樣各1 g，5份作為空白，另5份分別加入1 mL 25（10） μg/mL兒茶素（表兒茶素）混合標(biāo)準(zhǔn)液，空白組加1 mL空白溶劑，再各加入4 mL 80%甲醇（含2 mmol/L NaF）后勻漿30 s，避光靜置3 h后，3 500 r/min離心10 min，上清液用0.22 μm膜過(guò)濾后備用，按照“1.3.3”色譜條件進(jìn)樣，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算加樣回收率。兒茶素和表兒茶素的平均回收率分別為98.79%和115.25%，表明該方法回收率良好。

2.5? 不同品種桃果實(shí)中兒茶素的含量

表1為3個(gè)桃品種在果實(shí)成熟期其果肉和果皮中兒茶素的含量變化。由表1可見(jiàn)，黃肉桃和白肉桃均在坐果30 d果肉中兒茶素含量達(dá)最大值，此時(shí)黃肉桃果肉中兒茶素含量為82.8 μg/g·FW（鮮果重量），白肉桃最高含量為25.1 μg/g·FW，此后黃肉桃和白肉桃果肉中兒茶素含量均呈下降趨勢(shì);而紅肉桃果肉中兒茶素的含量在整個(gè)成熟期呈增加趨勢(shì)，在坐果61 d含量最高達(dá)31.7 μg/g·FW。3種桃果實(shí)果皮中兒茶素的含量變化呈相同趨勢(shì)，在果實(shí)成熟前期兒茶素含量較高，后期兒茶素含量逐漸降低，紅肉桃果皮在坐果44 d兒茶素含量達(dá)最高，為170.1 μg/g·FW;黃肉桃果皮在坐果30 d兒茶素含量最高，為169.5 μg/g·FW;而白肉桃果皮中的兒茶素含量在坐果16 d最高，為146.3 μg/g·FW，此后急劇減少。從表1可知，3個(gè)桃品種果皮中兒茶素的含量均高于果肉，在成熟中期黃肉桃的果肉和果皮均具有較高的兒茶素含量，成熟后期紅肉桃果實(shí)中兒茶素含量高于同期黃肉桃和白肉桃。

2.6? 不同品種桃果實(shí)中表兒茶素的含量

表2為3個(gè)桃品種在果實(shí)成熟期其果肉和果皮中表兒茶素的含量變化。由表2可見(jiàn)，紅肉桃和黃肉桃果肉中表兒茶素的含量在坐果后呈上升趨勢(shì)，均在落果前達(dá)最高，分別為35.8和29.5 μg/g·FW，而白肉桃果肉在坐果后其表兒茶素含量很低，在坐果30 d含量達(dá)最高，僅為4.8 μg/g·FW。紅肉桃果皮中表兒茶素的含量在果實(shí)成熟期呈升高趨勢(shì)，在坐果61 d表兒茶素的含量達(dá)最高，為24.3 μg/g·FW;黃肉桃在坐果54 d含量最高為17.2 μg/g·FW，之前呈升高趨勢(shì)，之后呈下降趨勢(shì);而白肉桃在坐果16 d達(dá)最高，僅為7.2 μg/g·FW，此后含量下降明顯。在果實(shí)成熟前期紅肉桃果皮和果肉中表兒茶素的含量均低于黃肉桃，而在落果前，則高于黃肉桃;紅肉桃和黃肉桃果肉中表兒茶素最高含量均高于果皮。白肉桃果皮和果肉表兒茶素含量均較低，果皮中最高含量大于果肉。

3? 討論

桃果實(shí)的抗氧化能力與酚類物質(zhì)密切相關(guān)[5，9]。酚類物質(zhì)分為酚酸類、黃酮醇、黃烷醇和花青素4類，兒茶素和表兒茶素是桃多酚中常見(jiàn)和含量較高的黃烷醇類化合物[9-13]。嚴(yán)娟等[9]以HPLC測(cè)得紅、黃、白色類型桃果肉多酚組成主要為綠原酸、新綠原酸、兒茶素、表兒茶素，其次為蘆丁、槲皮素、根皮苷和微量的沒(méi)食子酸、阿魏酸和根皮素;紅肉桃中表兒茶素含量為78.9～673.9 μg/g·FW，兒茶素含量為21.0～74.3 μg/g·FW，黃肉桃中兒茶素含量為5.5～9.0 μg/g·FW，白肉桃中兒茶素含量為4.2～14.6? ?μg/g·FW，紅肉桃中兒茶素和表兒茶素含量均明顯高于黃肉桃和白肉桃。盧娟芳等[10]用HPLC測(cè)定了水蜜桃、蟠桃和油桃3種類型共15個(gè)品種的桃果肉酚類組成，并用DPPH、ABTS、FRAP法測(cè)定了其抗氧化活性，表明表兒茶素、兒茶素、綠原酸和新綠原酸在桃果實(shí)中的含量最為豐富，對(duì)于黃烷醇物質(zhì)而言，水蜜桃以表兒茶素為主，含量為37.6～105.5 μg/g·FW，蟠桃以表兒茶素和兒茶素為主，含量分別為35.9～297.3和0～44.6 μg/g·FW，油桃以兒茶素為主，含量為9.2～53.7 μg/g·FW，蟠桃的酚類物質(zhì)含量和抗氧化能力均高于水蜜桃和油桃，表兒茶素和綠原酸在桃果實(shí)抗氧化能力中起著重要的作用。朱明濤等[11]對(duì)河南省4個(gè)桃品種久保、六月白、張白甘和秦王桃果實(shí)的不同發(fā)育時(shí)期總酚含量和抗氧化活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)綠原酸、兒茶素、新綠原酸、表兒茶素是各品種桃果實(shí)中最主要的酚類物質(zhì)，其含量和總酚含量以及抗氧化活性均在采摘初期最高，隨著果實(shí)的成熟呈逐漸下降趨勢(shì);桃果實(shí)中兒茶素含量為1.2～9.5 μg/g·FW，低于表兒茶素含量（5.3～57.2 μg/g·FW）。Liao等[12]測(cè)得美國(guó)佐治亞洲5種桃果實(shí)中兒茶素含量為36.8～85.3 μg/g·FW，高于表兒茶素含量（14.0～29.6 μg/g·FW）。Dabbou等[13]測(cè)得商業(yè)成熟期3種桃Sweet Cap、Early May Crest、OHerry果皮中平均兒茶素含量分別為117.6、24.2、55.4 μg/g·FW，表兒茶素含量為41.2、12.7、19.4 μg/g·FW;果肉中平均兒茶素含量分別為176.4、13.0、37.7 μg/g·FW，表兒茶素含量為25.6、4.2、8.5 μg/g·FW。完全成熟期3種桃Sweet Cap、Early May Crest、OHerry果皮中平均兒茶素含量分別為218.0、52.9、50.2 μg/g·FW，表兒茶素含量為65.6、6.4、10.3 μg/g·FW;果肉中平均兒茶素含量分別為188.1、22.6、25.2 μg/g·FW，表兒茶素含量為24.3、2.1、6.5 μg/g·FW。上述文獻(xiàn)結(jié)果表明，桃果實(shí)中兒茶素和表兒茶素含量在品種間差異較大，有些品種桃果實(shí)中表兒茶素含量高于兒茶素[9-11]，有些品種桃果實(shí)中兒茶素含量高于表兒茶素[12，13];成熟后期紅肉桃中兒茶素和表兒茶素含量高于其他肉色類型[9]，且果皮中含量高于果肉[13]。本研究結(jié)果為紅肉桃果實(shí)中的兒茶素和表兒茶素含量高于黃肉桃和白肉桃，果實(shí)中兒茶素含量高于表兒茶素，果皮中含量高于果肉;在成熟早期白肉桃、成熟中期黃肉桃和成熟后期紅肉桃果實(shí)中兒茶素和表兒茶素含量較高，因此可在不同成熟期食用不同品種桃果實(shí)。

Arranz等[14]采用液質(zhì)聯(lián)用方法研究桃、蘋果和油桃果實(shí)中甲醇/丙酮多酚提取物，得到桃果實(shí)中兒茶素含量為56.6±5.2 μg/g·FW，蘋果中表兒茶素含量為2.0±1.0 μg/g·FW，油桃中兒茶素和表兒茶素含量分別為7.0±3.5和17.2±0.3 μg/g·FW，表明桃果實(shí)中兒茶素和表兒茶素的含量均高于蘋果。桃果實(shí)在冷藏時(shí)其兒茶素和表兒茶素含量增加，可防止褐變[15]。兒茶素和表兒茶素的含量與抗氧化能力相關(guān)，本研究結(jié)果表明天仙紅紅肉桃抗氧化能力比較強(qiáng)，從抗氧化的角度帶皮吃有益，另外注意冷藏保存。因此天仙紅是一種具有較高抗氧化活性的優(yōu)良品種，3種桃果實(shí)在適當(dāng)?shù)某墒炱诓烧屠洳乇４婵筛玫匕l(fā)揮不同桃品種的生物活性。

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收稿日期：2019-02-28

基金項(xiàng)目：湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（2011-620-005-003-04）

作者簡(jiǎn)介：吳飛飛（1996-），男，湖北武穴人，在讀本科生，制藥工程專業(yè)，（電話）15871733698（電子信箱）793708808@qq.com;通信作者，徐凌云，（電話）15071308629（電子信箱）doctorxly9898@163.com。