輔料姜汁對(duì)黃連生物堿成分的影響

贠亞波 臧琛 郭鳳倩 尚悅 李翠 楊春雨

摘要：目的 ?考察采用輔料姜汁炮制前后黃連生物堿成分的變化。方法 ?建立HPLC同時(shí)測(cè)定格蘭地新、鹽酸藥根堿、非洲防己堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿7種成分含量的方法，并對(duì)輔料姜汁炮制前后黃連中生物堿成分含量進(jìn)行測(cè)定和分析。結(jié)果 ?方法學(xué)考察表明，測(cè)定方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好。經(jīng)姜汁炮制后，黃連中格蘭地新、鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀含量顯著提高（P<0.05），7種生物堿總含量有所提高。結(jié)論 ?黃連經(jīng)輔料姜汁炮制后，部分生物堿成分含量發(fā)生變化。

關(guān)鍵詞：黃連;輔料;姜汁;生物堿;炮制

中圖分類(lèi)號(hào)：R283.2 ???文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ???文章編號(hào)：1005-5304（2019）05-0069-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.05.015 開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Abstract： Objective To investigate the changes of alkaloids in Coptidis Rhizoma before and after processing with adjuvant ginger juice. Methods The HPLC method for determining the contents of granitin， jatrorrhizine hydrochloride， columbamine， epiberberine， coptisine hydrochloride， palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride simultaneously was established. The contents of alkaloids from Coptidis Rhizoma were measured and analyzed before and after processing. Results The methodological study showed that the HPLC method was accurate and reproducible. The contents of granitin， jatrorrhizine hydrochloride and palmatine hydrochloride in Coptidis Rhizoma significantly increased by ginger juice processing （P<0.05）. The total contents of seven alkaloids increased. Conclusion The contents of some alkaloids in Coptidis Rhizoma change after adjuvant ginger juice processing.

Keywords： Coptidis Rhizoma; adjuvant; ginger juice; alkaloids; processing

姜汁是中藥炮制常用輔料之一。與其他炮制用輔料相比，姜汁具有許多代表性的特點(diǎn)[1-3]：一是藥輔合一，生姜本身就是一味中藥，既可直接入藥，又可制備成姜汁后作為炮制用輔料使用;二是藥食同源，除藥用外，生姜也是生活中常用的調(diào)味料和食品;三是臨用現(xiàn)制，姜汁不易保存，一般為使用前制備。黃連最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其來(lái)源為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖，其味苦性寒，歸心、脾、胃、膽、大腸經(jīng)[4]。黃連為“痢家圣藥”，具有瀉火解毒、清熱燥濕功效，常用于治療濕熱所致的腹瀉、痢疾、熱盛火熾、嘔吐、口舌生瘡等[5]。但生黃連苦寒之性較甚，過(guò)服或久服易傷脾胃，故臨床常根據(jù)需要選用其不同炮制品，其中，姜黃連是至今臨床使用較多的炮制品[6-8]。黃連經(jīng)姜汁炮制后，其活性成分和功效均會(huì)發(fā)生變化。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)姜汁炮制前后黃連生物堿類(lèi)化學(xué)成分的變化進(jìn)行研究，進(jìn)一步了解炮制用輔料姜汁對(duì)黃連的影響，進(jìn)而為闡明輔料姜汁對(duì)黃連的炮制機(jī)理提供基礎(chǔ)。

1 ?儀器與試藥

LC-20AT高效液相色譜儀（配有SPD-M20A PDA檢測(cè)器），日本島津公司;XP105型電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司;KQ-800DE數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司;FW13高速粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司。

對(duì)照品格蘭地新、鹽酸藥根堿、非洲防己堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿（純度≥98.0%，批號(hào)分別為170823-025、170822-069、161121-009、170711-109、170426-003、170822-031、170105-028），成都德思特生物技術(shù)有限公司;乙腈、甲醇為色譜級(jí)，美國(guó)Fisher公司;甲酸，色譜級(jí)，北京迪馬科技有限公司;鹽酸、氨水、乙酸銨，北京化工廠;十二烷基硫酸鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。生姜，產(chǎn)地四川犍為，購(gòu)于四川夾江縣市場(chǎng)，經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院馮學(xué)峰教授鑒定為姜科植物姜Zingiber officinale Rose.的新鮮根莖;黃連（產(chǎn)地四川），安國(guó)市昌達(dá)中藥材飲片有限公司提供，經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院馮學(xué)峰教授鑒定為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.的干燥根莖。

姜黃連為自制，參考《中華人民共和國(guó)藥典》黃連飲片項(xiàng)下方法[4]。炮制時(shí)，將生姜洗凈，搗爛，加水適量，壓榨取汁，姜渣再加水適量，重復(fù)壓榨1次，合并汁液，即得姜汁。姜汁與生姜比例為1∶1（V∶W）。取待炮制黃連適量，加12.5%姜汁拌勻，悶潤(rùn)1 h，置不銹鋼鍋內(nèi)，用文火炒至姜汁被吸盡，取出，晾干，即得姜黃連[8];同法加入12.5%純凈水炮制，即為水黃連。取干燥的黃連、姜黃連和水黃連，打粉后過(guò)2號(hào)篩，于干燥器內(nèi)貯存?zhèn)溆谩?/p>

2 ?方法

2.1 ?供試品溶液的制備

稱(chēng)取黃連、姜黃連和水黃連樣品各0.1 g，分別置于100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL甲醇-鹽酸（100∶1）溶液，分別稱(chēng)定質(zhì)量，超聲（功率1800 W，頻率40 kHz）30 min，靜置，放冷至室溫，再次稱(chēng)重，以甲醇-鹽酸（100∶1）溶液補(bǔ)齊減失的質(zhì)量，0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2 ?對(duì)照品溶液的制備

分別稱(chēng)取對(duì)照品格蘭地新、鹽酸黃連堿、非洲防己堿、表小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿0.19、1.96、0.56、1.15、1.99、0.47、7.69 mg置同一10 mL量瓶中，用甲醇-鹽酸（100∶1）溶液溶解，定容至刻度，混勻，即得格蘭地新、鹽酸黃連堿、非洲防己堿、表小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿的混合對(duì)照品貯備液。取混合對(duì)照品貯備液1 mL，轉(zhuǎn)移入2 mL量瓶中，加入甲醇-鹽酸（100∶1）溶液至刻度，作為混合對(duì)照品溶液。

2.3 ?色譜條件

色譜柱為安捷倫Zorbax Extend-C18（4.6 mm×

250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈∶混合溶液（0.25 mol/L醋酸銨和8 mmol/L十二烷基硫酸鈉，臨用前調(diào)整pH值為9.3）=36∶64，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm。在該色譜條件下，7種生物堿峰形良好，各峰分離度、拖尾因子均符合要求。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 ?方法學(xué)考察

2.4.1 ?線(xiàn)性關(guān)系考察

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，0.22 ?m濾膜過(guò)濾后，按上述色譜條件進(jìn)樣4、6、8、10、12、14、16、18、20 ?L。以進(jìn)樣量（?g）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計(jì)算得到格蘭地新、鹽酸黃連堿、非洲防己堿、表小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及線(xiàn)性范圍。結(jié)果表明，7種生物堿在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，見(jiàn)表1。

2.4.2 ?精密度試驗(yàn)

精密取混合對(duì)照品溶液10 ?L，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)定峰面積，并計(jì)算峰面積RSD。結(jié)果格蘭地新、鹽酸藥根堿、非洲防己堿、表小檗堿、黃連堿、鹽酸巴馬汀及小檗堿的峰面積RSD分別為0.4%、0.4%、0.5%、0.4%、0.3%、0.4%、0.4%，表明精密度良好。

2.4.3 ?穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、20、24 h按上述色譜條件注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為20 ?L，測(cè)定峰面積，并計(jì)算峰面積RSD。結(jié)果24 h內(nèi)，供試品溶液中格蘭地新、鹽酸藥根堿、非洲防己堿、表小檗堿、黃連堿、鹽酸巴馬汀及小檗堿的峰面積RSD分別為3.8%、1.1%、0.9%、0.5%、0.7%、0.1%、0.3%，表明供試品溶液在室溫條件下放置24 h保持穩(wěn)定。

2.4.4 ?重復(fù)性試驗(yàn)

分別取6份同批姜黃連粉，每份0.1 g，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣20 ?L，記錄峰面積，并計(jì)算峰面積RSD。結(jié)果格蘭地新、藥根堿、非洲防己堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀及小檗堿的峰面積RSD分別為0.6%、0.3%、0.2%、0.2%、0.1%、0.9%、0.3%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.5 ?加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的姜黃連樣品6份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按所稱(chēng)取樣品中各成分含量加入混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算加樣回收率，結(jié)果7種生物堿成分平均加樣回收率介于98.0%～101.0%，RSD均小于2.0%，見(jiàn)表2。表明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.5 ?樣品含量測(cè)定

取黃連、水黃連和姜黃連樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中7種生物堿成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表3，樣品色譜圖見(jiàn)圖2。經(jīng)姜汁炮制后，黃連中的格蘭地新、鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀含量顯著提高（P<0.05），而水黃連中非洲防己堿、表小檗堿、黃連堿和鹽酸小檗堿含量顯著降低（P<0.05），其他生物堿含量未見(jiàn)明顯變化。有研究表明，用醋處理可以提高某些生物堿的溶解度，而其機(jī)制是水溶性鹽的形成[9]。本試驗(yàn)所用姜汁pH值約為6.5，弱酸性條件可能是影響姜黃連中格蘭地新、鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀含量的因素之一。

3 ?討論

生物堿是黃連的主要活性成分，在炮制過(guò)程中，其生物堿含量也會(huì)發(fā)生一定變化。本研究建立了HPLC同時(shí)測(cè)定黃連中7種生物堿成分含量的方法，方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，并應(yīng)用于黃連、姜黃連和水黃連的生物堿成分含量測(cè)定，可為黃連炮制品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

中藥藥性包括中藥的四氣、五味、升降浮沉、歸經(jīng)及毒性，其中四氣又稱(chēng)四性，指的是寒、熱、溫、涼。黃連是典型的寒涼性中藥，當(dāng)選用不同種類(lèi)的輔料炮制后，其寒涼之性會(huì)發(fā)生變化。因此，臨床使用黃連時(shí)根據(jù)具體病性、病位的不同及患者體質(zhì)的差異，辨證使用不同的炮制品。生姜辛溫，傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為姜制黃連以熱制寒，緩和黃連苦寒之性。生姜具有引經(jīng)作用，能引藥入脾經(jīng)，具有溫、散的藥性和藥效，可降低或緩解中藥的毒副作用。本試驗(yàn)從黃連中生物堿成分角度研究輔料姜汁對(duì)黃連的影響，結(jié)果顯示，黃連經(jīng)姜汁炮制后，7種生物堿的總含量有所提高，而經(jīng)水炮制后有所降低。生物堿總含量為姜黃連>黃連>水黃連。

本研究?jī)H針對(duì)黃連生物堿的含量變化，其他成分如阿魏酸、綠原酸等有機(jī)酸、微量元素等成分[10]的變化有待進(jìn)一步研究。另外，在藥理研究方面，姜汁對(duì)黃連的抗菌作用和對(duì)胃腸機(jī)能作用的影響已有報(bào)道[11]，但在姜汁炮制作用機(jī)理方面有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2018-08-18）

（修回日期：2018-09-06;編輯：陳靜）