益氣固表丸對低去脂肪指數(shù)慢性阻塞性肺疾病患者微小RNA的影響

金晶 李風(fēng)森 李爭 徐丹 荊晶 王晶

摘要：目的 ?觀察益氣固表丸對低去脂肪質(zhì)量指數(shù)（FFMI）慢性阻塞性肺疾病（COPD）穩(wěn)定期患者微小RNA（miRNA）及腫瘤壞死因子樣微弱凋亡誘導(dǎo)因子（TWEAK）水平的影響。方法 ?選擇低FFMI COPD穩(wěn)定期肺脾氣虛證患者60例，按隨機(jī)雙盲對照原則將患者分為益氣固表丸組和安慰劑組。2組均行西醫(yī)基礎(chǔ)治療，益氣固表丸組予益氣固表丸，安慰劑組予安慰劑，均每次10粒，每日3次，口服，連續(xù)治療12周。選擇既往否認(rèn)COPD及肌病病史的同齡志愿者30例為對照組。采用生物電阻抗法檢測患者治療前后FFMI及雙手握力（HGS），ELISA檢測治療前后TWEAK水平，采用GO、KEGG分析進(jìn)行靶基因預(yù)測，qRT-PCR驗證治療前后外周血miRNA變化。結(jié)果 ?共脫落6例。揭盲后益氣固表丸組28例、安慰劑組26例。益氣固表丸組ITT數(shù)據(jù)集總有效率為96.67%（28/30），安慰劑組為86.67%（26/30），2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。益氣固表丸組治療后中醫(yī)癥狀評分下降（P<0.05），F(xiàn)FMI、HGS無變化，安慰劑組FFMI、HGS下降（P<0.05）。與對照組比較，2組治療前TWEAK升高（P<0.05），益氣固表丸組治療后TWEAK下降（P<0.05），安慰劑組治療后TWEAK無明顯變化（P>0.05）。通過GO、KEGG富集分析，結(jié)合文獻(xiàn)查詢篩選miR-1-3p、miR-422a、miR-206、miR-145-5p和miR-133b共5個備選基因。qRT-PCR驗證后顯示，益氣固表丸組治療前miR-422a、miR-145-5p、miR-133b明顯下降（P<0.05），治療后miR-145-5p、miR-133b明顯升高（P<0.05）。結(jié)論 ?益氣固表丸可有效緩解低FFMI COPD穩(wěn)定期患者臨床癥狀，提高外周血miR-145-5p、miR-133b水平，降低TWEAK水平，減輕患者全身炎癥反應(yīng)。

關(guān)鍵詞：慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期;益氣固表丸;微小RNA;腫瘤壞死因子樣微弱凋亡誘導(dǎo)因子;臨床研究

中圖分類號：R259.63 ???文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ???文章編號：1005-5304（2019）05-0016-07

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.05.004 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Abstract： Objective To observe the effects of Yiqi Gubiao Pills on expressions of microRNA （miRNA） and the level of tumor necrofacies-like weak inducer of apoptosis （TWEAK） in chronic obstructive pulmonary disease （COPD） patients with low fat free mass index （FFMI）. Methods Totally 60 patients with low FFMI COPD stable lung spleen qi deficiency syndrome were selected， and were divided into Yiqi Gubiao Pills group and placebo group according to randomized double-blind control principle. Both groups received Western medicine basic treatment. Yiqi Gubiao Pills group was given Yiqi Gubiao pills， and placebo group was given placebo， 10 pills each time， three times a day， orally， for 12 weeks. 30 volunteers of the same age who had previously denied the history of COPD and myopathy were selected as control group. The bioelectrical impedance method was used to detect the changes of FFMI and hand grip strength （HGS） before and after treatment. The TWEAK level before and after treatment was detected by ELISA. GO and KEGG analysis was used to predict target genes， and qRT-PCR was used to verify miRNA changes in peripheral blood before and after treatment. Results Six cases were lost during treatment. 28 cases left in Yiqi Gubiao Pills group， and 26 were left in placebo group. The total effective rate of ITT data set of Yiqi Gubiao Pills group was 96.67% （28/30）， and that of placebo group was 86.67% （26/30）， with statistical significance （P<0.05）. TCM symptom scores decreased after treatment in Yiqi Gubiao Pills group （P<0.05）， FFMI and HGS did not change， and FFMI and HGS decreased in placebo group （P<0.05）. Compared with the control group， the TWEAK increased in the two groups before treatment （P<0.05）， and the TWEAK decreased in Yiqi Gubiao Pills group （P<0.05）. There was no significant change in TWEAK in placebo group after treatment （P>0.05）. A total of 5 candidate genes for miR-1-3p， miR-422a， miR-206， miR-145-5p and miR-133b were screened by GO and KEGG enrichment analysis. After qRT-PCR verification， miR-422a， miR-145-5p and miR-133b significantly decreased before treatment in Yiqi Gubiao Pills group （P<0.05）， and miR-145-5p and miR-133b significantly increased after treatment （P<0.05）. Conclusion Yiqi Gubiao Pills can relieve the clinical symptoms of low FFMI COPD patients effectively， and increase the expressions of miR-145-5p and miR-133b in peripheral blood， decrease the level of TWEAK， and reduce systemic inflammatory response in COPD patients.

Keywords： chronic obstructive pulmonary disease in stable period; Yiqi Gubiao Pills; miRNA; TWEAK; clinical study

微小RNA（miRNA）是基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，與慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）密切相關(guān)，是潛在的診斷標(biāo)記物和藥物治療靶點[1]。中醫(yī)藥對COPD造成的局限及全身范圍內(nèi)的慢性炎癥狀態(tài)的免疫調(diào)節(jié)作用有顯著影響[2]。隨著高通量芯片和測序技術(shù)的發(fā)展，已建立了多個公共資源，基于GEO數(shù)據(jù)庫的生物信息學(xué)分析提供了用于在各種疾病中搜索生物標(biāo)志物的有效信息[3]。益氣固表丸（國家發(fā)明專利號201410536529.5）源自新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院呼吸科治療COPD緩解期經(jīng)驗方，由黨參、麩炒白術(shù)、茯苓、陳皮、法半夏、薏苡仁、浮小麥、紫蘇子、蜜款冬花、黃芩、伊貝母、蜜枇杷葉、防風(fēng)組成。長期臨床觀察及前期研究發(fā)現(xiàn)，益氣固表丸能改善患者咳嗽、咳痰癥狀，以及下肢無力、全身乏力等肺脾氣虛癥狀，增強(qiáng)運動耐力，改善相關(guān)評分[4]。本研究在西醫(yī)治療基礎(chǔ)上聯(lián)用益氣固表丸，通過生物信息學(xué)識別和驗證益氣固表丸對COPD患者潛在的miRNA生物標(biāo)志物及藥物作用靶點，探討其可能的分子機(jī)制。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

選取2017年6-12月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院慢病隨訪門診的COPD穩(wěn)定期患者，及同期就診于該院體檢中心的既往否認(rèn)COPD及肌病病史的同齡志愿者30例。按照隨機(jī)雙盲對照原則，由統(tǒng)計咨詢室專人建立隨機(jī)數(shù)字化序列，保證受試者及研究者均對使用藥物不知情，保證對療效的公平記錄，在試驗完成后由專人揭盲。本研究經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn)（201709601）。

1.2 ?西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照《慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013年修訂版）》[5]確定COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有呼吸困難、慢性咳嗽、咳痰及有危險因素暴露史的患者進(jìn)行肺功能檢查，應(yīng)用支氣管舒張劑后第1秒用力呼氣容積占用力呼氣肺活量百分比<70%，可確定存在持續(xù)性氣流受限;依據(jù)歐洲老年人肌肉減少癥工作組（EWGSOP）提出的低去脂肪質(zhì)量指數(shù)（FFMI）診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：體質(zhì)量指數(shù)≤21 kg/m2，且男性FFMI≤16 kg/m2，女性FFMI≤15 kg/m2。

1.3 ?中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)

參照《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》[7]制定肺脾氣虛證辨證標(biāo)準(zhǔn)。主癥：咳嗽、咯痰、氣短、喘息;次癥：食少腹脹、汗出較多，伴乏力便溏;舌脈：舌體胖大，苔白膩，脈沉細(xì)。

1.4 ?納入標(biāo)準(zhǔn)

①年齡45～80歲;②符合上述西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn);③受試者對本研究知情，并均簽署知情同意書。

1.5 ?排除標(biāo)準(zhǔn)

①合并氣胸、胸腔積液、肺癌、活動性肺結(jié)核等其他嚴(yán)重肺部疾病者;②合并嚴(yán)重心腦血管、肝腎和造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾病者;③精神病患者;④妊娠或哺乳期婦女;⑤合并腫瘤，先天或后天性免疫缺陷者。

1.6 ?質(zhì)量控制及脫落標(biāo)準(zhǔn)

①出現(xiàn)不良事件或嚴(yán)重不良事件，醫(yī)生判斷應(yīng)停止試驗者;②試驗中突然病情急性加重，醫(yī)生判斷應(yīng)停止試驗者;③試驗中發(fā)生重大偏差，如依從性太差等，難以評價藥物效應(yīng);④受試者不愿繼續(xù)進(jìn)行試驗，向主管醫(yī)生提出退出要求或雖未提出退出，但不再使用藥物或接受隨訪評估而失訪者;⑤對脫落的受試者，研究人員應(yīng)采取登門、預(yù)約隨訪、電話、信件等方式，盡可能與受試者聯(lián)系，詢問理由，記錄最后一次服藥時間，完成所能完成的評估項目。

1.7 ?儀器

體成分分析儀（Inbody720，韓國），肺功能儀（Chestgraph HI-101，日本），Multiskan Spectrum全波長酶標(biāo)儀（德國Thermo Fisher公司），無水乙醇，異丙醇及氯仿（天津市福宇精細(xì)化工有限公司，批號XK13-011-00015），DEPC（上海生工生物工程有限公司，批號B417BA0001），瓊脂糖（上海生工生物工程有限公司，批號A811BA0014），Trans2K DNA Marker（北京全式金生物技術(shù)有限公司，批號BM101），MiRcute Serum/Plasma miRNA Isolation Kit（北京天根生化科技有限公司，批號DP503），miRNA第一鏈cDNA合成（上海生工生物有限公司，批號B532451），QuantiNava SYBR Green Kit（凱捷生物工程有限公司，批號208054）。物種：秀麗線蟲，外參檢測引物cel-miR39-30p（北京天根生化科技有限公司，批號Q8129）。mRNA北京天根高速冷凍離心機(jī)（Nefuqe 15R，上海力申科學(xué)儀器有限公司），旋渦混合器（GL-88B，海門市其林貝爾儀器制造有限公司），核酸蛋白定量儀（K5500，北京凱奧科技發(fā)展有限公司），凝膠成像系統(tǒng)（2500，上海天能科技有限公司），PCR儀（MyCycler Thermal Cycler，Bio-Rad，USA），Real Time PCR instrument（ABI QuantStudioTM 6 Flex Real-Time PCR系統(tǒng)，ABI）。

1.8 ?研究方法

2組均進(jìn)行西醫(yī)基礎(chǔ)治療。益氣固表丸組予益氣固表丸（0.19 g/粒，新疆制藥廠生產(chǎn)，新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院中心藥房提供，批號20170431），安慰劑組予安慰劑（益氣固表丸模擬劑，不含試驗藥物的有效成分，其外觀、口感、氣味、溶解度等與試驗藥物一致，成分為乳糖、淀粉，0.19 g/粒，新疆制藥廠生產(chǎn)），均每次10粒，每日3次，口服。4周隨訪1次，共治療12周。

1.9 ?觀察指標(biāo)

1.9.1 ?一般情況

采集患者的年齡、性別、身高及體質(zhì)量。

1.9.2 ?中醫(yī)癥狀積分

參照《中醫(yī)內(nèi)科常見病診療指南·中醫(yī)病證部分》[8]“肺脹病”肺脾氣虛辨證協(xié)作組臨床方案，對咳嗽、咯痰、消瘦、腹脹、納少、神疲乏力及便溏進(jìn)行評分，每項0～6分，總分36分。0～10分為輕度肺脾氣虛，11～30分為中度肺脾氣虛，>30分為重度肺脾氣虛。評分越高表明癥狀越重。

1.9.3 ?去脂肪質(zhì)量指數(shù)

患者空腹?fàn)顩r下測定體脂率。FFMI（kg/m2）=體質(zhì)量（kg）×（1-體脂率）÷身高2（m2）。

1.9.4 ?雙手握力

采用美國手功能治療師協(xié)會推薦的握力體位及方法[9]測試患者優(yōu)勢手握力（HGS），使用握力器在3 min連續(xù)機(jī)動過程中記錄主力手（DoHGS）和非主力手（NDoLHGS）中手指屈肌的最大自主手握力，每次間隔至少1 min。記錄其平均值，結(jié)果用千克力（kgf）表示。

1.9.5 ?外周血腫瘤壞死因子樣微弱凋亡誘導(dǎo)因子

采集患者外周血2 mL，3000 r/min離心10 min，取血清保存于EP管，置于-80 ℃冰箱備用。檢測時根據(jù)試劑盒說明書操作，于設(shè)置450 nm波長的酶標(biāo)儀上機(jī)，ELISA檢測并計算TWEAK水平。

1.9.6 ?GO和KEGG分析

分別用TargetScan、PITA、microRNA org數(shù)據(jù)庫對miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測，對3個數(shù)據(jù)庫預(yù)測到的靶基因取交集，結(jié)合文獻(xiàn)查詢篩選取共同的基因進(jìn)行后續(xù)的GO（gene ontology）和KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）分析。

1.9.7 ?qRT-PCR檢測微小RNA

采集患者外周血2 mL，3000 r/min離心10 min，取血清保存于EP管，置于-80 ℃冰箱備用。進(jìn)行RNA提取，第一鏈cDNA合成，按照表1配制反應(yīng)體系，輕輕混勻;37 ℃、60 min，42 ℃、30 min，85 ℃、5 min使酶失活，結(jié)束反轉(zhuǎn)錄實驗。將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA置于-80 ℃冰箱保存，取出適量，稀釋20倍，用于熒光定量實驗，熒光定量引物信息及熒光定量體系見表2、表3。

1.10 ?療效標(biāo)準(zhǔn)

參照《證候類中藥新藥臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[10]制定療效標(biāo)準(zhǔn)。臨床控制：急性加重次數(shù)減少，積分減少率≥70%;顯效：急性加重次數(shù)減少，50%≤積分減少率<70%;有效：急性加重次數(shù)減少，30%≤積分減少率<50%;無效：急性加重次數(shù)減少，積分減少率<30%。積分減少率（%）=（治療前積分-治療后積分）÷治療前積分×100%。

1.11 ?統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量資料服從正態(tài)分布以±s表示，不服從正態(tài)分布以中位數(shù)及百分位數(shù)M（Q1，Q3）進(jìn)行描述，使用配對秩和檢驗;計數(shù)資料采用相對數(shù)百分比表示。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)集分為2種：①意向治療分析（ITT）：對所有經(jīng)隨機(jī)化分組、至少服用1次藥物、未能觀察到全部治療過程的病例，將最后一次數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)到試驗最終結(jié)果，對療效進(jìn)行意向治療分析;②符合方案數(shù)據(jù)分析（PP）：所有符合方案、依從性好、試驗期間未使用禁止藥物、完成標(biāo)準(zhǔn)病歷規(guī)定填寫內(nèi)容的病例，或服用試驗用藥數(shù)量在80%～120%者，對其療效進(jìn)行統(tǒng)計分析。使用GO seq軟件，基于Wallenius non-central hyper-geometric distribution數(shù)學(xué)模型，對差異基因進(jìn)行GO富集分析，P<0.05表示靶基因在該GO條目中出現(xiàn)了富集。

2 ?結(jié)果

2.1 ?2組一般資料比較

本研究共篩查164名COPD穩(wěn)定期患者，實際納入臨床試驗60例，脫落5例（益氣固表丸組2例、安慰劑組3例），因急性感染加重住院拒絕繼續(xù)試驗患者中止試驗者1例，脫落率8.33%。揭盲后益氣固表丸組28例，安慰劑組26例。2組年齡、性別、病程、身高及GOLD分級比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見表4。

2.2 ?2組臨床療效比較

益氣固表丸組ITT數(shù)據(jù)集總有效率為96.67%（29/30），安慰劑組為86.67%（26/30），2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-7.132，P=0.024）。益氣固表丸組PP數(shù)據(jù)集總有效率為96.43%（27/28），安慰劑組為84.62%（22/26），2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-8.091，P=0.039）。見表5。

2.3 ?2組治療前后中醫(yī)癥狀評分比較

益氣固表丸組治療后咳嗽、咯痰、腹脹、納少、神疲乏力、便溏評分減少（P<0.05），安慰劑組便溏評分減少（P<0.05）。2組治療后比較，益氣固表丸組咳嗽、咯痰、腹脹、納少、神疲乏力評分均低于安慰劑組（P<0.05）。見表6。

2.4 ?2組治療前后去脂肪質(zhì)量指數(shù)及雙手握力比較

與本組治療前比較，益氣固表丸組治療前后FFMI、HGS無明顯變化（P>0.05），安慰劑組治療后FFMI、HGS降低（P<0.05）。2組治療后比較，益氣固表丸組FFMI、HGS水平優(yōu)于安慰劑組（P<0.05）。見表7。

2.5 ?2組治療前后外周血腫瘤壞死因子樣微弱凋亡誘導(dǎo)因子比較

與本組治療前比較，益氣固表丸組治療后外周血TWEAK明顯降低（P<0.05）。2組治療后比較，益氣固表丸組TWEAK水平明顯低于安慰劑組（P<0.05）。見表8。

2.6 ?GO和KEGG分析

GO富集分析表明，主要注釋的MF3452目標(biāo)基因包括與蛋白結(jié)合、ATP結(jié)合、DNA結(jié)合、序列特異性DNA結(jié)合、poly（A）RNA結(jié)合、金屬離子結(jié)合級鋅離子結(jié)合介導(dǎo)有關(guān)的信號通路，見圖1。KEGG分析發(fā)現(xiàn)，靶基因與PI3K-Akt信號通路、MAPK信號通路、Ras信號通路、FoxO信號通路、mTOR信號通路、Rap1信號通路和凋亡等通路相關(guān)，見圖2。根據(jù)P值，列出KGEE分析中較豐富的前10條通路名稱，見表9。

2.7 ?2組治療前后miRNA篩查及驗證

與對照組比較，益氣固表丸組治療前后miR-422a、miR-145-5p、miR-133b明顯下降（P<0.01）;與本組治療前比較，益氣固表丸組治療后miR-145-5p、miR-133b明顯升高（P<0.05）。益氣固表丸組治療后miR-1-3p、miR-206表達(dá)無明顯改變（P>0.05）。見表10。

3 ?討論

COPD病情及病程的發(fā)展與miRNA的異常表達(dá)密切相關(guān)，但基于生物信息學(xué)對COPD多系統(tǒng)并發(fā)癥相關(guān)的miRNA生物標(biāo)志物及中藥成分作用靶點的相關(guān)研究較少。因此，本研究通過益氣固表丸干預(yù)，利用生物信息學(xué)分析識別和驗證益氣固表丸對COPD患者潛在的miRNA生物標(biāo)志物及藥物作用靶點。

本研究顯示，益氣固表丸能有效改善患者肺脾氣虛相關(guān)癥狀，安慰劑組僅改善便溏，考慮與安慰劑成分有關(guān)，亦不排除安慰劑效應(yīng)可能，提示益氣固表丸能有效緩解肺脾氣虛證相關(guān)癥狀，改善患者的生活質(zhì)量。同時，隨年齡增長及病情影響，人體骨骼肌質(zhì)量呈下降趨勢，患者肌肉質(zhì)量及力量顯著下降，益氣固表丸可保持患者外周血FFMI、HGS水平，避免二者隨病情進(jìn)展而下降。今后研究應(yīng)繼續(xù)延長干預(yù)及隨訪時間，監(jiān)測患者FFMI、HGS水平，并在藥物治療基礎(chǔ)上配合抗阻力訓(xùn)練，了解患者肌肉質(zhì)量及力量變化情況。

TWEAK是TNF超家族成員，在免疫應(yīng)答失調(diào)的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，同時對肌肉代謝影響重大[11]。Hu等[12]研究表明，TWEAK可通過刺激巨噬細(xì)胞抑制miR-7的外泌體，從而抑制上皮卵巢癌轉(zhuǎn)移，與EGFR/AKT/ERK1/2信號通路下調(diào)有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，益氣固表丸能有效改善患者較高的TWEAK水平，其變化與miRNA差異表達(dá)及相關(guān)通路的研究將是后期研究的關(guān)注點。

GO富集分析表明，主要注釋的MF3452目標(biāo)基因包括依賴DNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞凋亡、分化、增殖相關(guān)，參與細(xì)胞黏附、脂質(zhì)代謝和氧化還原過程中，促進(jìn)炎癥反應(yīng)、激活或抑制細(xì)胞因子介導(dǎo)的相關(guān)信號通路。Liu等[13]發(fā)現(xiàn)，miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224在COPD患者外周血中均明顯下調(diào)，且miR-145、miR-224水平與GOLD分期相關(guān)。miR-145是關(guān)鍵的抑癌miRNA，通過抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β通路下游的Smad3靶蛋白，負(fù)性調(diào)控COPD患者呼吸道平滑肌細(xì)胞內(nèi)促炎癥細(xì)胞因子釋放[14]。Pan等[15]研究發(fā)現(xiàn)，miR-206、miR-133b對骨骼肌生長和重建至關(guān)重要，但在肺癌中顯著下調(diào)，提示miR-206、miR-133b可能參與肺腫瘤發(fā)生。

KEGG 信號通路富集分析，篩選出P<0.05的前20位信號通路共大類，按照P值由小到大排列，發(fā)現(xiàn)癌癥相關(guān)通路5條：pathway in cancer（癌癥的通路）、MicroRNAs in cancer（癌癥的miRNA代謝）、Transcriptional misregulation in cancers（癌癥的轉(zhuǎn)錄失調(diào)）、Proteoglycans in cancer（癌癥的蛋白聚糖）及Prostate cancer（前列腺癌）;能量代謝相關(guān)信號通路6條：PI3K-Akt signaling pathway（磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號通路）、MAPK signaling pathway（絲裂原活化蛋白激酶信號通路）、RAS signaling pathway（Ras信號通路）、FoxO signaling pathway（叉形頭轉(zhuǎn)錄因子信號通路）、Rap1 signaling pathway（Rap1信號通路）及Hippo signaling pathway（河馬信號通路）;介導(dǎo)細(xì)胞能量傳遞通路5條：Focal adhesion（黏附斑激酶信號通路）、Endocytosis（胞吞作用）、Regulation of actin cytoskeleton（調(diào)節(jié)肌動蛋白細(xì)胞骨架）、Cell cycle（細(xì)胞周期）、Signaling pathways regulating pluripotency of stem cells（調(diào)節(jié)干細(xì)胞多能性的信號通路）;病毒感染相關(guān)通路4條：HTLV-I infection（人類嗜T細(xì)胞病毒感染）、Viral carcinogenesis（病毒致癌作用）、Hepatitis B（乙型肝炎病毒感染）、Epstein-Barr virus infection（愛潑斯坦-巴爾病毒感染），提示miR-145-5p及miR-133b通過影響以上腫瘤、病毒及能量代謝等通路對COPD患者產(chǎn)生作用。在作用于能量代謝相關(guān)的6條通路中，PI3K/Akt通路位于影響通路中第二位，筆者將進(jìn)一步探討miR145-5p及miR33b與PI3K/Akt/mTOR通路的關(guān)系。

綜上所述，COPD患者合并骨骼肌質(zhì)量減少的生物標(biāo)記物為miR-422a、miR-145-5p、miR-133b，益氣固表丸作用靶點為miR-145-5p、miR-133b，能升高其表達(dá)，同時降低TWEAK水平，達(dá)到改善COPD患者機(jī)體慢性炎癥狀態(tài)的作用。

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（收稿日期：2018-10-05）

（修回日期：2018-12-25;編輯：季巍?。?/p>