穿透素-3在血流感染診斷中的價(jià)值

熊 沖，尹紀(jì)來(lái)

(1.海南省萬(wàn)寧市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,海南萬(wàn)寧 571500；2.海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,海南海口 570100)

當(dāng)病原菌入侵機(jī)體血液系統(tǒng)，一部分病原菌通過(guò)在血液中生長(zhǎng)、繁殖、崩解后產(chǎn)生大量毒素，從而導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥；有一部分病原菌通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)合適的組織和(或)器官進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，從而導(dǎo)致感染的發(fā)生。這種由各種病原菌和(或)毒素入侵機(jī)體血液循環(huán)系統(tǒng)后導(dǎo)致的全身炎性反應(yīng)和感染，甚至危及生命的感染性疾病，稱之為血流感染(BSI)。BSI起病較隱匿，臨床癥狀缺乏特異性表現(xiàn)，病情發(fā)展迅速，嚴(yán)重者給患者帶來(lái)生命威脅，因此血流感染的早期診斷具有十分重要的意義[1-2]。目前，臨床上診斷血流感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”是血培養(yǎng)，但存在培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、檢出率較低等缺點(diǎn)。故尋求靈敏度高、診斷迅速的血流感染診斷標(biāo)志物已成為臨床的迫切需要。

穿透素-3(PTX-3)是由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和髓樣樹突狀細(xì)胞等組織細(xì)胞分泌合成的正五聚蛋白，屬于長(zhǎng)穿透素家族中的一員，是人體先天性免疫系統(tǒng)的重要組成，常參與機(jī)體早期的抗感染反應(yīng)及異物清除。已有研究發(fā)現(xiàn)，血清PTX-3水平在感染、炎癥等情況下會(huì)顯著升高[3]，而國(guó)內(nèi)外關(guān)于PTX-3與血流感染相關(guān)性的報(bào)道甚少。目前，國(guó)內(nèi)外用于血流感染的早期診斷和評(píng)估的主要感染性指標(biāo)為降鈣素原(PCT)和超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)[4]，故本研究通過(guò)檢測(cè)血流感染患者體內(nèi)血清PTX-3、PCT和hs-CRP水平的變化，以期為血流感染的早期診斷和判斷病情嚴(yán)重程度提供一些參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年2月至2017年6月本院收治的96例體溫≥38.5 ℃且結(jié)合臨床表現(xiàn)高度懷疑BSI者作為研究對(duì)象。根據(jù)血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果，將最終確診的42例成人血流感染患者作為實(shí)驗(yàn)組，其中，男22例，女20例，年齡18～92歲，中位年齡62歲。隨機(jī)選取血培養(yǎng)陰性患者42例作為對(duì)照組，其中男23例，女19例，年齡20～89歲，中位年齡56歲。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在年齡、性別、基礎(chǔ)疾病等基線資料方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

實(shí)驗(yàn)組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)入院72 h內(nèi)血培養(yǎng)陽(yáng)性確診為血流感染；(2)年齡≥18歲；(3)患者及家屬知情并簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入院時(shí)間<24 h者；(2)年齡<18歲者；(3)有急性冠脈綜合征、心力衰竭、心房顫動(dòng)、高肌鈣蛋白血癥等心臟疾病者；(4)急、慢性傳染性疾病者；(5)有酒精性肝硬化、腎臟衰竭、惡性腫瘤、自身免疫病和血栓性疾病者；(6)血培養(yǎng)結(jié)果為凝固酶陰性葡萄球菌或非常見環(huán)境細(xì)菌者；(7)近期有服用影響PTX-3、PCT和hs-CRP檢測(cè)結(jié)果的藥物者。

1.2研究方法 血培養(yǎng)使用合肥恒星科技開發(fā)有限公司BC-60全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀進(jìn)行，若陽(yáng)性報(bào)警，轉(zhuǎn)種培養(yǎng)皿，獲得純細(xì)菌菌落者入選實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行研究，再采用法國(guó)梅里埃VITEK-2 COMPACT系統(tǒng)進(jìn)行微生物鑒定，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)組患者血培養(yǎng)病原菌結(jié)果。所有研究對(duì)象于入院后第1天、第4天和第7天(急性期)和入院第14天(恢復(fù)期)空腹采集靜脈血3 mL置真空采血管中，分離上清后置于-20 ℃冰箱凍存?zhèn)溆?。hs-CRP檢測(cè)使用日本Olympus公司AU 5400全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑，PCT檢測(cè)使用德國(guó)羅氏公司Cobasd E60電化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套試劑。PTX-3檢測(cè)使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)，試劑盒購(gòu)自武漢優(yōu)爾生科技公司。

PTX-3檢測(cè)操作步驟：先將抗PTX-3抗體包被在酶標(biāo)板上，再加入待測(cè)血清與包被抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，洗去游離成分后依次加入生物素化PTX-3抗體和HRP(辣根過(guò)氧化物酶)標(biāo)記親和素，待形成免疫復(fù)合物后，洗去反應(yīng)孔中的游離成分，加TMB顯色底物和終止液，酶標(biāo)儀450 nm測(cè)OD值，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得出PTX-3水平。

2 結(jié) 果

2.1實(shí)驗(yàn)組患者血培養(yǎng)病原菌統(tǒng)計(jì)結(jié)果 42例血流感染患者培養(yǎng)出病原菌46株，其中革蘭陰性桿菌29株(63.04%)，以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和鮑曼不動(dòng)桿菌為主；革蘭陽(yáng)性球菌17株(36.96%)，以金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌為主；革蘭陰性桿菌和革蘭陽(yáng)性球菌比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組患者血清PTX-3、PCT和hs-CRP水平的比較 研究結(jié)果顯示，在入院第1、4、7天，實(shí)驗(yàn)組PTX-3、PCT和hs-CRP水平較對(duì)照組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而入院第14天實(shí)驗(yàn)組PTX-3、PCT和hs-CRP水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。隨著入院時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組患者PTX-3、PCT和hs-CRP水平呈逐漸降低，見圖1。

圖1 實(shí)驗(yàn)組患者血清PTX-3、PCT和hs-CRP水平時(shí)間趨勢(shì)圖

表1 實(shí)驗(yàn)組患者血培養(yǎng)病原菌統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表2 兩組患者血清PTX-3水平的比較

2.2入院第1天和第4天PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染的診斷價(jià)值 為判斷通過(guò)PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染的早期診斷價(jià)值，繪制ROC曲線分析入院第1天和第4天PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染的早期診斷價(jià)值，在入院第1天，PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染診斷AUC值分別為0.928、0.876、0.828，靈敏度分別為88.10%、83.30%、76.20%，特異度分別為97.60%、90.05%、85.70%，cutoff值為12.58 ng/L、0.79 ng/mL、39.45 mg/L。在入院第4天，PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染診斷AUC值分別為0.920、0.909、0.796，靈敏度分別為90.5%、88.1%、85.0%，特異度分別為92.90%、85.00%、78.60%，cutoff值為6.65 ng/L、0.65 ng/mL、29.15 mg/L，見圖2。

圖2 入院第1天和第4天PTX-3、PCT和hs-CRP

3 討 論

隨著臨床各種免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素、廣譜抗菌藥物的廣泛使用，心臟支架、靜脈置管、介入治療等侵入性治療技術(shù)的臨床開展，以及腫瘤患者中放化療方法的普遍應(yīng)用等，血流感染發(fā)生率呈逐漸升高趨勢(shì)，因此，尋找積極有效的血流感染早期診斷、病情輕重評(píng)估及預(yù)后指標(biāo)具有積極的臨床意義[5-6]。

本研究42例血流感染患者培養(yǎng)出病原菌46株，其中革蘭陰性桿菌29株(63.04%)，以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和鮑曼不動(dòng)桿菌為主；革蘭陽(yáng)性球菌17株(36.96%)，以金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌為主；革蘭陰性桿菌和革蘭陽(yáng)性球菌比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究血流感染患者病原菌構(gòu)成與翟如波等[7]的報(bào)道相一致，表明在血流感染的致病菌中主要是革蘭陰性桿菌，其可通過(guò)分泌產(chǎn)生內(nèi)毒素，從而干擾機(jī)體的各種代謝活動(dòng)，導(dǎo)致高熱不退等臨床癥狀的發(fā)生。

已有大量研究表明，PCT和hs-CRP在血流感染患者體內(nèi)水平升高，與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可用于血流感染的早期診斷和病情評(píng)估[8-9]。PTX-3是一種可參與急性炎性反應(yīng)和免疫應(yīng)答的可溶性模式識(shí)別受體，與PCT、CRP等同屬于急性時(shí)相蛋白。有不少文獻(xiàn)報(bào)道，PTX-3是機(jī)體受細(xì)菌、病原菌、損傷等刺激，由中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞合成分泌的正五聚蛋白，是內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、炎性反應(yīng)和感染性疾病的重要生物標(biāo)志物，對(duì)疾病的病情判斷和預(yù)后評(píng)估具有極其重要的作用[10-12]。YAMASAKI等[13]通過(guò)對(duì)上千名健康志愿者進(jìn)行PTX-3檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)健康人血清PTX-3水平<2 ng/L。HAMED等[14]發(fā)現(xiàn)在膿毒癥休克患者血清PTX-3水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。

本文檢測(cè)了本院42例血流感染患者體內(nèi)PTX-3、PCT和hs-CRP水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在入院第1、4、7天，實(shí)驗(yàn)組PTX-3、PCT和hs-CRP水平較對(duì)照組明顯增高，而入院第14天實(shí)驗(yàn)組PTX-3水平與對(duì)照組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。隨著入院時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組患者PTX-3、PCT和hs-CRP水平呈逐漸降低。在入院第1天，PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染診斷AUC值分別為0.928、0.876、0.828，靈敏度分別為88.1%、83.3%、76.2%，特異度分別為97.6%、90.05%、85.7%，cutoff值為12.58 ng/L、0.79 ng/mL、39.45 mg/L。在入院第4天，PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染診斷AUC值分別為0.920、0.909、0.796，靈敏度分別為90.5%、88.1%、85.0%，特異度分別為92.9%、85.0%、78.6，cutoff值為6.65 ng/L、0.65 ng/mL、29.15 mg/L。這表明PTX-3、PCT和hs-CRP對(duì)血流感染的早期診斷具有較高價(jià)值，與血流感染的預(yù)后關(guān)系密切。這與國(guó)外HUTTUNEN等[15]的報(bào)道結(jié)果一致，血流感染患者體內(nèi)PTX-3水平與病情嚴(yán)重度呈正比，隨著病情的好轉(zhuǎn)，血清PTX-3水平隨之降低。

4 結(jié) 論

PTX-3的檢測(cè)在血流感染的診斷中具有十分重要的價(jià)值，血清PTX-3水平與血流感染的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可用于血流感染的早期診斷和病情評(píng)估及預(yù)后。臨床上可聯(lián)合檢測(cè)血清PTX-3和血培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其水平的變化，有利于血流感染診斷準(zhǔn)確性的提高，對(duì)指導(dǎo)臨床工作具有一定的應(yīng)用價(jià)值。