薏苡仁及其偽品的鑒別研究*

王建成 ，李 衛(wèi) ，張朝軍 ，李 萍 ，陳 君 **中國藥科大學 中藥學院，南京 0009；浙江康萊特藥業(yè)有限公司，杭州 3008

薏苡仁（Coicis Semen），又名薏仁、米仁，為禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen（Roman.）Stapf的干燥成熟種仁，具有利水滲濕、健脾止瀉、排膿除痹、解毒散結等功效[1]?，F(xiàn)代研究表明，薏苡仁主要含有脂肪油、甾醇、三萜、多糖及氨基酸等多種化學成分，具有抗氧化、抗炎、免疫調節(jié)、抗腫瘤、降血糖、利尿、調節(jié)脂質代謝等[2-4]藥理活性。薏苡仁也是一種藥食同源物品。

據報道，市場上發(fā)現(xiàn)的薏苡仁偽品有來源于同屬植物的草珠子及小麥、大麥、高粱米[5]。為了準確區(qū)分真?zhèn)?，保證薏苡仁的用藥安全，本研究采用薄層色譜法、高效液相色譜指紋圖譜法對薏苡仁和上述偽品進行系統(tǒng)研究，為其真品質量控制提供參考。

1 儀器與藥品、試劑

數碼相機500D（日本佳能公司）；CAMAG高效薄層色譜儀（Camag Auomatic TLC Sampler 4，CAMAG中國技術支持公司）；WD-9403A紫外儀（北京六一儀器廠）；Sartorius BSA124S電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；KQ-5200B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；20 cm×10 cm高效薄層板（TLC Silica gel 60 RP-18 F254S，德國 Merck 公司）；高效液相色譜儀為Shimadzu LC-20A HPLC系統(tǒng)（日本Shimadzu），包括LC20-AT二元泵、SIL-20A自動進樣器、CTO-20A柱溫箱、SPD-20A檢測器和LC-Solution工作站。

對照品：三油酸甘油酯、亞油酸、棕櫚酸、油酸（阿拉丁生化科技股份有限公司）；薏苡仁油和薏苡仁對照藥材（中國食品藥品檢定研究院）。三亞油酸甘油酯、1，2-二亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯、1，2-二亞油酸-3-油酸甘油酯、1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯、1，2-二油酸-3-亞油酸甘油酯、1，2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯為本實驗室自制。所有對照品經HPLC-ELSD檢測，純度均在98%以上，符合定量要求。

甲醇、乙腈（色譜純）；石油醚（60℃~90℃）、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、冰醋酸均為分析純（南京化學試劑股份有限公司）；純凈水（市售）。

薏苡仁樣品由康萊特藥業(yè)有限公司提供，草珠子、小麥、大麥、高粱米均為市售，經中國藥科大學生藥學系李萍教授鑒定確認。見表1。

表1 樣品產地

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 對照品及對照藥材溶液的制備 三油酸甘油酯對照品溶液：取三油酸甘油酯對照品適量，加石油醚 （60℃~90℃）溶解制成1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。薏苡仁油對照提取物：取薏苡仁油對照提取物適量，加石油醚（60℃~90℃）制成每毫升含10 mg的溶液，作為對照提取物溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 稱取各藥材粉末1.0 g（過65目篩），分別置于具塞錐形瓶中，加入石油醚5 mL，密塞，超聲處理（功率 300 W，頻率 40 kHz）15min，濾過，取續(xù)濾液作為各藥材供試品溶液。

2.1.3 薄層色譜條件 在 《美國藥典》40版相關標準的基礎上，優(yōu)化色譜條件，確定以十八烷基硅膠板作為固定相，以丙酮-冰醋酸（7∶3）為展開劑，展開兩次，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈365nm下檢視。

2.1.4 薏苡仁及其偽品薄層色譜鑒別 考慮薏苡仁中主要有效成分與對照品的易得性，選擇三油酸甘油酯作為參照。如圖1所示，在薄層色譜鑒別中發(fā)現(xiàn)，高粱米、小麥、大麥的色譜，在甘油三酯類條帶區(qū)域與薏苡仁相比較暗，說明其甘油三酯類含量較低，同時在色譜條帶的頂部，小麥、大麥與薏苡仁有明顯區(qū)別，較易區(qū)分。偽品草珠子，其基源與薏苡仁屬于同種的不同變種，在化學成分上十分接近，在薄層色譜中與對照提取物色譜條帶一一對應，難以區(qū)分，可用高效液相色譜指紋圖譜法鑒別。

圖1 薄層色譜圖

2.2 指紋圖譜鑒別

2.2.1 液相色譜條件 色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C8（3 mm×100 mm，2.7μm）；柱溫：25℃；流速：0.3 mL·min-1，進樣量：10 μL。蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD-LT Ⅱ）參數：溫度45℃，增益值11，過濾值10，氣體壓力為4.0 bar。流動相：A相為純水，B相為含 0.1%甲酸的甲醇-乙腈溶液（95∶5），梯度洗脫：0/10/25/65min，B相為85%/95%/100%/100%。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取以下對照品：亞油酸 10.53 mg，棕櫚酸 10.36 mg，油酸 10.68 mg，三亞油酸甘油酯4.47 mg，1，2-二亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯 4.82 mg，1，2-二亞油酸-3-油酸甘油酯15.38 mg，1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯4.76 mg，1，2-二油酸-3-亞油酸甘油酯 19.25 mg，1，2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯5.67 mg，三油酸甘油酯10.13mg，分別用二氯甲烷溶解轉移至50 mL量瓶中，并用甲醇定容至刻度，作為混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取薏苡仁藥材粉末（過65目篩）500 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）15 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.4 方法學考察

2.2.4.1 專屬性：將10個對照品以及樣品按照色譜條件進樣分析，將薏苡仁藥材和各對照品的色譜圖在島津數據處理軟件Labsolution中合并。見圖2。藥材樣品中各待測成分色譜峰與相應的對照品相對應。

圖2 薏苡仁藥材與混合對照品色譜圖

圖2 中序號1~10依次為亞油酸，棕櫚酸，油酸，三亞油酸甘油酯，1，2-二亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯，1，2-二亞油酸-3-油酸甘油酯，1，2-二亞油酸-3-油酸甘油酯，1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯，1，2-二油酸-3-亞油酸甘油酯，1，2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯，三油酸甘油。

2.2.4.2 重復性試驗：將同一樣品平行制備6次，進樣分析，所得數據導入中藥指紋圖譜相似度評價軟件中，各個色譜峰之間的相似度值都接近于1，以三油酸甘油酯色譜峰為參照峰，其相對峰面積的RSD＜2.65%，說明樣品制備重復性良好。

2.2.4.3 精密度試驗：將同一供試品溶液重復進樣6次，所得數據導入中藥指紋圖譜相似度評價軟件中，各個色譜峰之間的相似度值均在0.98以上，以三油酸甘油酯色譜峰為參照峰，其相對峰面積的RSD＜2.45%，說明精密度良好。

2.2.4.4 穩(wěn)定性試驗：將同一供試品溶液分別在0h，2、4、8、12、16、24 h 進樣分析，將數據導入中藥指紋圖譜相似度評價軟件中，各個色譜峰之間的相似度值均在0.98以上，以三油酸甘油酯色譜峰為參照峰，其相對峰面積的RSD＜2.92%，說明穩(wěn)定性良好。

2.2.5 薏苡仁及其偽品指紋圖譜分析 按“2.1.2”方法制備供試品溶液，并進行分析，由表2、圖3可知，大麥、小麥、高粱米與薏苡仁的指紋圖譜整體差異較大，相似度＜0.639，易于區(qū)分。薏苡仁與同屬偽品草珠子相比，薏苡仁甘油三酯區(qū)段的色譜峰高低于草珠子；脂肪酸區(qū)段色譜峰峰形與草珠子有差異，同時34～36 min區(qū)段薏苡仁有兩個明顯的色譜峰，可用于區(qū)分薏苡仁與草珠子；在兼顧整體成分色譜峰的指紋圖譜上，薏苡仁與草珠子的相似度小于0.920，可以準確區(qū)分。將譜圖導入“2012版中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件”，計算的偽品與薏苡仁（Yyr-13）相似度如表2所示。

表2 薏苡仁（Yyr-13）與偽品藥材的指紋圖譜相似度值

3 討 論

本研究優(yōu)化了薄層色譜法并建立高效液相色譜指紋圖譜法鑒別薏苡仁及其常見偽品。通過薄層色譜鑒別，可從薄層板上色譜條帶的數目和明亮程度將大麥、小麥、高粱米與薏苡仁區(qū)分；然而草珠子與薏苡仁色譜條帶辨識度較差，在難以區(qū)分的情況下，通過高效液相色譜指紋圖譜可有效的鑒別。通過指紋圖譜的對比，薏苡仁甘油三酯區(qū)段的色譜峰高低于草珠子；脂肪酸區(qū)段色譜峰峰形與草珠子有差異；同時34～36 min區(qū)段薏苡仁有兩個明顯的色譜峰，可作為區(qū)別草珠子的標志物。

高效液相色譜法運用常規(guī)流動相分離，具有安全、高效、易區(qū)分的特點，可高效地甄別薏苡仁偽品，確保真品質量。

圖3 薏苡仁及其偽品指紋圖譜比對