食品中黃曲霉毒素檢測方法概述

葉穎苓

摘? 要：描述了黃曲霉毒素對人類構(gòu)成的健康威脅，簡析其分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，及食品中黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)。概述了幾種目前食品中黃曲霉毒素檢測方法，同時分析了每種檢測方法其獨有的優(yōu)點和缺點。根據(jù)現(xiàn)代社會的快節(jié)奏導(dǎo)致檢測機(jī)構(gòu)工作負(fù)擔(dān)增大的情況，提出了如何在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確的前提下盡可能以較少的人力、物力進(jìn)行大批量次檢測的意見。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素? 大批量次檢測? 準(zhǔn)確度

中圖分類號：R155.5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號：1672-3791（2019）03（c）-0057-02

黃曲霉毒素是主要由黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，在土壤、動植物以及堅果中非常常見。該毒素毒性強(qiáng)，會對人類構(gòu)成直接的生命威脅。世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)在1993年認(rèn)定其為天然存在的一類致癌物，是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì)[1]，因此想保障食品安全，其中一個方法就是測定食品中黃曲霉毒素的含量水平。

1? 黃曲霉毒素的分子結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)

目前已分離鑒定出的黃曲霉毒素有12種，它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分相似，這其中黃曲霉毒素B1、B2和M1、M2是幾種最為常見的。B1是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌铮悦總€B1都會含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)?。雙呋喃環(huán)是基本毒性結(jié)構(gòu)，氧雜萘鄰?fù)徽J(rèn)為會導(dǎo)致癌癥的產(chǎn)生。因為其在紫外線下會發(fā)出藍(lán)色熒光，故命名為B1，B是藍(lán)色的意思。同時B1已被公認(rèn)為毒性最強(qiáng)的。M1則是黃曲霉毒素B1在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物。M1和M2常會在牛奶中被找到，是奶牛食用了含有B1、B2的農(nóng)產(chǎn)品后部分轉(zhuǎn)化成的產(chǎn)物[2]。

2? 食品中黃曲霉毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)

黃曲霉毒素致使人類中毒的事件時有發(fā)生，因此世界很多國家和地區(qū)均對食品中黃曲霉毒素的含量作了嚴(yán)格限量要求。在美國，規(guī)定人類消費食品和奶牛飼料中的黃曲霉毒素含量不能超過20μg/kg，牛奶產(chǎn)品中M1的含量不能高于0.5μg/kg，其他動物飼料中的含量不能超過300μg/kg。歐盟則于1999年起規(guī)定直接提供給人類食用的食物及組成食品的組分中B1的含量不能超過2μg/kg，B1、B2、G1、G2的總量不得超過4μg/kg。而在日本，食品中B1的含量不能超過10μg/kg。

在中國，根據(jù)《食品中真菌毒素限量》中的規(guī)定，食品中B1允許量標(biāo)準(zhǔn)為： 玉米、花生仁、花生油中不得超過20μg/kg;玉米及花生仁制品（按原料折算）中不得超過20μg/kg;大米、其他食用油中不得超過10μg/kg，其他糧食、豆類、發(fā)酵食品中不得超過5μg/kg;嬰兒代乳食品中不得檢出;牛乳及其制品中M1限量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，不得超過0.5μg/kg[3]。

3? 食品中黃曲霉毒素的分析檢測方法

我國目前主要用以下幾種檢測辦法檢測黃曲霉毒素含量是否超標(biāo)：同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-柱前衍生法、高效液相色譜-柱后衍生法、酶聯(lián)免疫吸附篩查法和薄層色譜法。

3.1 同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

該法用以谷物及其制品、豆類及其制品、堅果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定。用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液提取樣品中的B1、B2、G1和G2，提取液用含1%TritonX100（或吐溫20）的磷酸鹽緩沖溶液稀釋后（必要時經(jīng)黃曲霉毒素固相凈化柱初步凈化），通過免疫親和柱凈化和富集，凈化液濃縮、定容和過濾后經(jīng)液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。此法同時具備了液相色譜分析和質(zhì)譜分析的優(yōu)點，分析用時短、靈敏度和選擇性比較高。但由于此方法需要經(jīng)過免疫親和柱凈化步驟，若用于大量產(chǎn)品檢測需要花費大量的時間。

3.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法又分為柱前衍生法和柱后衍生法兩種。柱前衍生法的原理是用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取試樣中的B1、B2、G1、G2，提取液經(jīng)黃曲霉毒素固相凈化柱凈化去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物質(zhì)，凈化液用三氟乙酸柱前衍生，液相色譜分離，熒光檢測器檢測，外標(biāo)法定量;柱后衍生法是試樣中的B1、B2、G1、G2，用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取，提取液經(jīng)免疫親和柱凈化和富集，凈化液濃縮、定容和過濾后經(jīng)液相色譜分離，柱后衍生（碘或溴試劑衍生、光化學(xué)衍生、電化學(xué)衍生等），經(jīng)熒光檢測器檢測，外標(biāo)法定量。當(dāng)下國內(nèi)普遍采用此方法檢驗黃曲霉毒素含量、因為靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、大多數(shù)黃曲霉毒素類型都能被同時分析。但是，該法需要熟悉操作的技術(shù)人員，再經(jīng)過復(fù)雜的檢驗程序得出結(jié)果。另外檢測過程中需要用到很多不同的試劑，導(dǎo)致整個測試過程耗費時間長，明顯不適用于現(xiàn)代大批量次的食品檢測[4]。

3.3 酶聯(lián)免疫吸附篩查法

該法首先將B1的抗原或抗體吸附在吸附劑上，經(jīng)洗滌后獲取清液。然后加入被辣根過氧化物酶標(biāo)記的B1，兩者會產(chǎn)生特異性抗體，將其洗滌后進(jìn)行顯色反應(yīng)，根據(jù)顏色深淺來測定B1的含量。如果比較酶聯(lián)免疫吸附法和高效液相色譜法，前者受到的干擾比較小，樣品的預(yù)處理簡單快捷，容易回收，且能簡單提取。檢驗操作相對簡單，對檢驗環(huán)境要求也不高，適用于大批量次的食品檢測。但是因為酶的活性易受反應(yīng)條件影響，測試結(jié)果數(shù)值會出現(xiàn)偏差，需運用其他檢測方法作進(jìn)一步復(fù)查驗證[4]。

3.4 薄層色譜法

該法原理是樣品經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，黃曲霉毒素B1在紫外光（波長365nm）下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯示熒光的最低檢出量來測定含量。其優(yōu)點是：對試劑、設(shè)備的要求比較低，花費的費用不高，適用于大量樣品的分離、篩選，即以比較低廉的人力物力就能進(jìn)行大批量次的檢測。但因靈敏度低、重現(xiàn)差、實驗操作步驟比較多而且繁瑣等缺點，已逐漸不適用現(xiàn)代分析的要求。

4? 結(jié)語

鑒于黃曲霉毒素的危害巨大，人們也對食品質(zhì)量安全意識逐步增強(qiáng)，我國政府對食品中黃曲霉毒素的監(jiān)督抽查力度加大，造成檢測機(jī)構(gòu)工作負(fù)擔(dān)加重。因此，尋找一種既快又準(zhǔn)的檢測方法顯得尤為重要。根據(jù)以上對幾種黃曲霉毒素檢測方法的分析和實際工作應(yīng)用可得，對于大批量食品中黃曲霉毒素的篩查適合選用酶聯(lián)免疫吸附法（試劑盒）進(jìn)行快速檢測，對于出現(xiàn)陽性的樣品可繼而選用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行復(fù)查驗證，最終獲得檢測結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1] 張東升，趙曉聯(lián).黃曲霉毒素M1的危害、污染現(xiàn)狀及檢測方法進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生檢驗，2004（6）：266-269.

[2] 黃曲霉毒素[EB/OL].https：//baike.baidu.com/item/黃曲霉毒素/5205729？fr=aladdin.

[3] 劉青，鄒志飛，余煬煬，等.食品中真菌毒素法規(guī)限量標(biāo)準(zhǔn)概述[J].中國釀造，2017（1）：12-18.

[4] 李書國，陳輝，李雪梅，等.糧油食品中黃曲霉毒素檢測方法綜述[J].糧油食品科技，2009（2）：62-65.