沙門菌和志賀菌通用增菌液增菌效果實(shí)驗(yàn)觀察

張仕忠 常曉濤

【中圖分類號】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2015）02-0363-01

在對食品生產(chǎn)經(jīng)營單位或公共場所從業(yè)人員作傷寒、痢疾帶菌檢查， 對各類食品樣品作沙門、志賀菌檢測時， 由于沙門菌和志賀菌檢驗(yàn)所用的增菌液不同， 即使是對同一份標(biāo)本也只能分別增菌， 分別劃線分離， 使實(shí)驗(yàn)室的工作量成倍增加， 同時由于兩者增菌時間不相同， （ 沙門菌前增菌 8～ 18 h，TTB、SC增菌18～24h 志賀菌厭氧16～ 20 h） ， 給實(shí)驗(yàn)測定的工作安排帶來一定困難， 因此， 研究和選擇合適的可同時用作沙門、志賀菌增菌的通用增菌液， 對提高實(shí)驗(yàn)室的工作效率具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。選擇了市售的 2 個牌號的沙門、志賀菌增菌液與 SC 增菌液及 GN 增菌液分別進(jìn)行了增菌效果的對比觀察， 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、SC 增菌液、GN增菌液分別按國標(biāo)法 [1] 配制； 沙門、志賀菌增菌液干粉培養(yǎng)基 ① 、 ② （ 以下簡稱通用增菌液 ① 、 ② ） ，分別由廣東環(huán)凱微生物試劑廠及杭州天和微生物試劑廠提供， 均按使用說明配制。

1.1.2 試驗(yàn)菌株 傷寒沙門菌（ 50071） 、鼠傷寒沙門菌 （ 50013） 、痢疾志賀菌 2 型、福氏志賀菌 2a（ 51302） 、大腸埃希菌（ ATCC25922） 由江蘇省疾病預(yù)防控制中心微生物試劑廠提供。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)菌液的制備 取上述試驗(yàn)菌株的 24 h 肉湯培養(yǎng)物， 除大腸菌外， 分別按 10 倍遞增連續(xù)稀釋至第 8 管。

1.2.2 沙門菌增菌效果的測定 取上述不同稀釋度的傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌肉湯培養(yǎng)物各 0.1 ml加入 SC 增菌液及通用增菌液① 、 ②中， 同時取大腸埃希菌的 24 h 肉湯培養(yǎng)物在上述各管中各加入 0.1ml。經(jīng) 36 ℃ 24 h 增菌培養(yǎng)后各取 1 環(huán)在 XLD 瓊脂上分離培養(yǎng)， 于 36℃18～ 24 h， 檢查傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌菌落的生長情況。

1.2.3志賀菌增菌效果有測定 取上述不同稀釋的痢疾志賀菌及福氏志賀菌的肉湯培養(yǎng)各 0.1 ml， 分別加入 GN 增菌液及通用增菌液① 、 ② 中， 同時取大腸埃希菌的 24 h 肉湯培養(yǎng)物在上述各管中各加入0.1 ml。GN 增菌液各管經(jīng) 36℃培養(yǎng) 8 h， 通用增菌液① 、 ② 各管經(jīng) 36 ℃培養(yǎng) 24 h， 取上述增菌液各 1環(huán)在 XLD 瓊脂上分離培養(yǎng)， 于 36 ℃ 18～ 24 h， 檢查痢疾志賀菌及福氏志賀菌菌落的生長情況。各項測定均按相同方法重復(fù)測定 5 次， 并計算出每皿檢出沙門菌或志賀菌的平均菌落形成單位。> 1～ 5 cfu/皿為“ +”； 6～ 10 cfu/ 皿為“ + + ”； 11～ 20 cfu/ 皿為“ + + + ”； > 21 cfu/ 皿為“ + + + + ”。10-6 稀釋度能分離到沙門菌或志賀菌者， 判定該增菌液符合要求[ 1] 。

2 結(jié)果

2.1 沙門菌的增菌效果 在大腸菌干擾下， 通用增菌液① 、 ②對傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌的增菌效果均可達(dá)到 10 - 6 以上，詳見表1、表2。

2.2 志賀菌的增菌效果 在大腸埃希菌干擾下， 通用增菌液 ① 、 ② 對痢疾志賀菌及福氏志賀菌的增菌效果， 分別達(dá)到 10-7 及 10 -6 ， 已達(dá)到或接近達(dá)到 GN增菌液的增菌效果， 詳見表 3、表 4。

3 討論

關(guān)于腸道致病菌的增菌， 國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法及相關(guān)文獻(xiàn)中， 推薦以亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（ SC） 、緩沖蛋白胨水（ BPW） 、四硫磺酸鹽增菌液（ TTB） 等用于沙門菌的增菌， 以 志賀氏菌增菌肉湯—新生霉素用于志賀菌的增菌。由于沙門菌與志賀菌之間， 甚至在不同種類的沙門菌之間， 一般均不能通用， 從而給基層單位實(shí)驗(yàn)室的腸道致病菌檢驗(yàn)工作帶來一定的困難或不便。因此， 有必要開展對沙門、志賀菌通用增菌培養(yǎng)基的研究。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出， 通用增菌液 ① 及 ② 在大腸埃希氏菌干擾下對傷寒沙門菌及鼠傷寒沙門菌的增菌效果可達(dá)到 10-6 以上，達(dá)到沙門菌增菌液的增菌效果； 通用增菌液 ① 、 ② 對痢疾志賀菌及福氏志賀菌的24 h 增菌效果已達(dá)到或接近GN 增菌液 8 h 增菌的效果。以通用增菌液取代沙門菌專用增菌液及志賀菌專用增菌液， 不僅使增菌管數(shù)量從原來每份標(biāo)本的 2管減少至 1 管， 而且使劃線分離用的選擇性平皿也由原來的 2 塊減少至 1 塊， 增菌時間均為 24 h， 既節(jié)省了培養(yǎng)基的用量又降低了實(shí)驗(yàn)人員的勞動強(qiáng)度，提高了實(shí)驗(yàn)室的工作效率。其實(shí)用意義顯而易見。本次實(shí)驗(yàn)僅選擇2 株沙門菌及 2 株志賀菌進(jìn)行增菌效果觀察， 對其他沙門菌及志賀菌是否可取得同樣的增菌效果等， 尚有待于作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探討。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.5-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)

[2] 何曉青主編. 衛(wèi)生防疫細(xì)菌檢驗(yàn) [ M] . 北京： 新華出版社， 1989： 301- 318.