ＨＰＬＣ測(cè)定板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量

高艷梅 谷俊峰

【摘 要】 目的：對(duì)高效液相色譜法進(jìn)行板藍(lán)根顆粒中表告依春含量測(cè)定的可行性進(jìn)行研究。方法：采用實(shí)驗(yàn)分析方法，以色譜柱為Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）為條件，流動(dòng)相為甲醇-水（15∶85），流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，對(duì)板藍(lán)根顆粒中表告依春的含量進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示表告依春進(jìn)樣量為0.1032～2.064μg時(shí)，與峰值面積變化具有良好線(xiàn)性關(guān)系，其平均加樣回收率為99.20%，RSD為0.94%。結(jié)論：高效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根顆粒中表告依春含量操作簡(jiǎn)單且迅速、準(zhǔn)確性較高，具有較好的推廣應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法測(cè)定;板藍(lán)根顆粒;表告依春;含量測(cè)定

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）1-0017-02

板藍(lán)根顆粒是采用板藍(lán)根等中藥材加工制成，具有清熱解毒、涼血利咽功效，在肺胃熱盛引起的咽喉腫痛、口咽干燥、腮部腫痛等癥狀疾病治療中具有較好的作用效果。其中，表告依春作為板藍(lán)根顆?？共《竟πУ闹饕煞种?，也是板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測(cè)控制的重要指標(biāo)，通過(guò)對(duì)板藍(lán)根顆粒中表告依春含量測(cè)定分析，能夠有效鑒別和判斷板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量[1]。因此，采用高效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根顆粒中表告依春含量具有十分積極的作用和意義[2]。本研究采用高效液相色譜法對(duì)板藍(lán)根顆粒中表告依春含量檢測(cè)進(jìn)行測(cè)定研究。報(bào)告如下。

1 儀器及材料

1.1 儀器 Agilent1100型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）;DV215CD型號(hào)的電子天平（十萬(wàn)分之一，OHAUS）;BS110S型號(hào)的電子天平（萬(wàn)分之一，北京賽多利斯天平有限公司）;KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 試劑板藍(lán)根顆粒（批號(hào)：090624、090625、090626，蚌埠豐原涂山制藥廠，每袋10g，有蔗糖型），表告依春（批號(hào)：100018-200107，中國(guó)藥品生物制品檢定所）;甲醇（色譜純），水（蒸餾水）[3]等。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇-水（15∶85）;流速：1.0mL/min;柱溫：30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm;進(jìn)樣量：10μL，以進(jìn)行板藍(lán)根顆粒中表告依春含量的檢測(cè)分析。

2.2 供試品溶液的制備 精確稱(chēng)取樣品2.0g，加入75%乙醇25mL，稱(chēng)定重量，超聲提取30min（頻率為40kHz，功率為250W），放置冷卻，再稱(chēng)定重量，用75%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5mL，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至25mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，濾液作為供試品溶液[4]。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精確稱(chēng)量10.32mg的表告依春對(duì)照品，放置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得濃度為0.1032mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按照處方比例將板藍(lán)根去除后，根據(jù)相關(guān)制備工藝要求進(jìn)行陰性樣品制備，再按“2.2”方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別吸取上述2.2～2.4制備的三種溶液，按2.1的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)分析，經(jīng)分析后顯示，供試品溶液的色譜圖與對(duì)照品溶液的色譜圖在相對(duì)應(yīng)位置存在相同保留時(shí)間的色譜峰;此外可以看出，供試品溶液的色譜圖與陰性對(duì)照溶液的色譜圖對(duì)比，無(wú)相同保留時(shí)間的色譜峰值變化特征，表明陰性干擾不存在。如圖1所示。

2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察 精確量取2.3的對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0、20.0mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成不同濃度的對(duì)照品溶液，并按“2.1”色譜分析條件進(jìn)行檢測(cè)分析，對(duì)不同進(jìn)樣量的色譜峰值變化進(jìn)行記錄，以表告依春對(duì)照品峰面積（Y）的變化與進(jìn)樣量（X）的關(guān)系進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析。得回歸方程為 Y=105655.6X-0.73（r=0.9999），表明表告依春在0.1032～2.064μg范圍內(nèi)與峰面積具良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 取同一批次樣品（批號(hào)： 090624），按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表告依春峰面積的RSD為0.33%，表明儀器精密度良好。

2.8 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批次樣品（批號(hào)： 090625）， 按“2.2”的方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24h時(shí)按“2.1”的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果表告依春峰面積的RSD為0.85%，表明供試品溶液在24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)取 同一批次樣品（批號(hào)： 090626）， 按“2.2”的方法制備供試品溶液，平行制備6份，按“2.1”的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。表告依春的平均含量為0.821mg/g，RSD為1.0%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取6份供試品（批號(hào)： 090626，表告依春含量為0.821mg/g），每份約2.0g，置具塞的錐形瓶中，分別加入表告依春對(duì)照品約10.0mg，按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算回收率。結(jié)果表告依春的平均回收率為99.20%，RSD（n=6）為0.94% 。

2.11 樣品含量測(cè)定 取三個(gè)批次的板藍(lán)根顆粒，按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)市場(chǎng)上多個(gè)生產(chǎn)廠家所生產(chǎn)板藍(lán)根顆粒中表告依春含量檢測(cè)分析顯示，部分廠家生產(chǎn)的板藍(lán)根顆粒中表告依春含量均比較低，甚至存在未檢出表告依春含量的情況。由此可見(jiàn)，加強(qiáng)對(duì)市場(chǎng)上供應(yīng)板藍(lán)根顆粒中表告依春含量檢測(cè)，有利于促進(jìn)其產(chǎn)品質(zhì)量控制，確保其作用功效發(fā)揮。

高效液相色譜法檢測(cè)分析的流動(dòng)相比例確定中，通過(guò)對(duì)多種比例對(duì)比分析顯示，其比例設(shè)計(jì)為15∶85時(shí)，以甲醇-水為流動(dòng)相的實(shí)驗(yàn)分析過(guò)程中能夠?qū)崿F(xiàn)表告依春峰達(dá)的較好分離，且峰形變化較好。

對(duì)高效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根顆粒中表告依春含量的可行性進(jìn)行驗(yàn)證，有利于促進(jìn)其在實(shí)踐中的推廣應(yīng)用，對(duì)實(shí)現(xiàn)板藍(lán)根顆粒生產(chǎn)質(zhì)量的全面監(jiān)控有積極作用，值得進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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