雌激素對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中酪蛋白和甘油三酯表達(dá)的影響

■武開樂 庫西塔別克·買買提依不拉音 馬 靜 邵 偉，2 余 雄，2*

（l.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；2.新疆肉乳用草食動(dòng)物營養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊830052）

奶牛乳腺上皮細(xì)胞是激素在奶牛乳腺中的重要反應(yīng)器，也是研究乳腺的生長發(fā)育和泌乳機(jī)制的重要體外模型，因此提高乳腺上皮細(xì)胞中乳蛋白及乳脂的合成對(duì)生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)乳具有重要的意義。乳腺的發(fā)育是在多種激素的共同調(diào)節(jié)下完成的[1-2]，雌激素主要是通過機(jī)體內(nèi)一些由不同組織分泌的因子，這些因子通過多種分泌途徑來發(fā)揮對(duì)乳腺發(fā)育的作用[3]。近年來，對(duì)于雌激素在畜牧方面的研究，大多集中在反芻動(dòng)物上，主要是通過飼喂異黃酮類（isoflavone）、木脂素類（lignans）和香豆雌酚（coumestrogen）這幾種結(jié)構(gòu)與動(dòng)物體內(nèi)雌激素相類似的物質(zhì)進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。特別是通過動(dòng)物研究雌激素對(duì)奶牛的泌乳性能及乳成分的表達(dá)研究已經(jīng)逐漸開展[4-6]，但在細(xì)胞水平上對(duì)奶牛乳成分的研究卻很少報(bào)道。本研究通過體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞，研究不同濃度雌激素對(duì)其乳成分表達(dá)的影響，不僅為雌激素在細(xì)胞分子水平上對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞的研究奠定基礎(chǔ)，而且可以進(jìn)一步的為雌激素在提高奶牛的乳成分的表達(dá)方面提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本研究于2018 年2 月至2018 年4 月在新疆肉乳用草食動(dòng)物營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行雌激素調(diào)控奶牛乳腺上皮細(xì)胞酪蛋白和甘油三酯調(diào)控的試驗(yàn)。將乳腺上皮細(xì)胞復(fù)蘇后，添加細(xì)胞完全培養(yǎng)基，放入37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，選取擴(kuò)增生長較好的乳腺上皮細(xì)胞，分別添加0、50、100、200 μmol/l雌激素孵育BMECs后，在12、24、48、72 h各時(shí)間點(diǎn)采用Western Blot方法及高效液相色譜分析法檢測(cè)各組細(xì)胞中α-酪蛋白（CSN1）、β-酪蛋白（CSN2）及甘油三酯（TG）的表達(dá)量。

試驗(yàn)分為兩組：對(duì)照組為單純?nèi)橄偕掀ぜ?xì)胞培養(yǎng)組，試驗(yàn)組為不同濃度雌激素添加組。

1.2 主要試驗(yàn)材料及試劑

奶牛乳腺上皮細(xì)胞系（華英生物：支原體檢測(cè)為陰性，STR 鑒定結(jié)果：Amelogenin：X；CSF1PO：10，12；D13S317：8，9；D16S539：11，12；D5S818：10，13；D7S820：10，11；THO1：8，9.3 ；TPOX：9，11；vWA：15，17）、CO2恒溫培養(yǎng)箱、潔凈工作臺(tái)、生物倒置顯微鏡、倒置熒光顯微鏡、離心機(jī)、Fresco 低溫冷凍離心機(jī)（Thermo）、MultiSkan3 酶 標(biāo) 儀（Thermo）、酸 度 計(jì)pH211（Hanna）、高效液相色譜儀（日本島津2010A）。

MEBM、胎牛血清（Fetal Bovine Serum/FBS）、胰酶、PBS、蛋白抽提試劑（華英生物）、BCA蛋白定量試劑盒（華英生物）、2 mg/ml BSA標(biāo)準(zhǔn)品（華英生物）、5×還原樣品緩沖液（華英生物）、考馬斯亮藍(lán)染色液（華英生物）、麗春紅染色液（華英生物）、BSA（Amresco 0332）、PMSF（Amresco 0754）、APS（Amresco 0486）、Tween-20（Amresco 0777）、Bromphenol Blue（Amresco 0449）、NP-40（Amresco M158）、Trizma base（Sigma T1503）、Glycine（Sigma G8898）、Sodium deoxycholate（Sigma D6750）、蛋白酶抑制劑（Roche 11697498001）、甲 醇（國 藥10014118）、璜基水楊酸（國藥10021516）、TCA（國藥80132618）、氯化鈉（國藥10019392）、1，2-丙二醇（華英生物）、乙腈（華英生物）、正己烷（華英生物）、苯甲酰氯（華英生物）、異丙醇（華英生物）、三氯醋酸（華英生物）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞的純化

將液氮罐中購買的細(xì)胞，用鑷子取出，迅速放在已開啟的37 ℃的水浴鍋中，不停地在水中晃動(dòng)，使其在1 min 內(nèi)融化。之后將其移至超凈臺(tái)內(nèi)，用移液槍接種至25 cm2（T25）的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入完全培養(yǎng)基使其再次生長。在37 ℃、5% CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)80%時(shí)開始進(jìn)行擴(kuò)增純化。

1.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)

當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)80%左右之后，將舊的培養(yǎng)基棄去，用2～3 ml 磷酸鹽緩沖溶液（PBS）洗兩遍，加入預(yù)熱好的0.25%胰蛋白酶1～2 ml進(jìn)行消化，在培養(yǎng)箱中孵育2～3 min，然后取出來在顯微鏡下一邊觀察一邊輕微地彈下培養(yǎng)瓶底部，讓其細(xì)胞脫落。在顯微鏡下觀察到大約70%細(xì)胞脫落之后，加入完全培養(yǎng)基終止消化。再用移液槍進(jìn)行輕微吹打?qū)⑵溆嗉?xì)胞吹打下來。移至離心管中，在2 000 r/min下離心2 min，小心棄去上清液，加入完全培養(yǎng)基并用移液槍打勻，傳到細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，正常情況下3 d可以長滿培養(yǎng)瓶內(nèi)部，在此期間換一次培養(yǎng)基。按照上述的培養(yǎng)方法，將細(xì)胞純化擴(kuò)增到第3 代，在加入不同濃度的雌激素，然后將所有細(xì)胞樣進(jìn)行12、24、48、72 h的培養(yǎng)。

1.4 樣品收集

收集對(duì)照組及各雌激素濃度添加試驗(yàn)組在12、24、48、72 h各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞樣品，每組設(shè)3個(gè)平行，3個(gè)重復(fù)，取樣后將細(xì)胞樣品先放置于-20 ℃的冰箱中2 h，后取出放置于-80 ℃的冰箱過夜，再將過夜后的細(xì)胞樣品放入液氮罐中保存。將樣品送至北京華英生物技術(shù)有限公司檢測(cè)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中α-酪蛋白（CSN1）、β-酪蛋白（CSN2）及甘油三酯（TG）的表達(dá)量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有原始數(shù)據(jù)先用Excel 2016 進(jìn)行整理，用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan's法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)最終計(jì)算資料用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，P＜0.01作為差異極顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 觀察奶牛乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)

圖1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞復(fù)蘇后生長的形態(tài)

由圖1可以看出，復(fù)蘇后正常生長的奶牛乳腺上皮細(xì)胞成片連接，呈不規(guī)則的鋪路石狀。

2.2 酪蛋白表達(dá)量結(jié)果

2.2.1 雌激素對(duì)CSN1表達(dá)的影響

表1 不同雌激素濃度在不同時(shí)間段對(duì)CSN1表達(dá)量的影響（灰度值）

由表1 可知，在12 h 時(shí)，與對(duì)照組相比，添加50 μmol/l雌激素組其CSN1的表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；在24 h時(shí)，與對(duì)照組相比，添加100 μmol/l雌激素組其CSN1 的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），添加200 μmol/l 雌激素組其CSN1 的表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；在48 h時(shí)，與對(duì)照組相比，添加100 μmol/l 雌激素組其CSN1的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；在72 h 時(shí)，與對(duì)照組相比，添加50、100、200 μmol/l雌激素組其CSN1的表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。其余組與對(duì)照組間差異均不顯著。

在12 h 時(shí)，50 μmol/l 雌激素添加組CSN1 表達(dá)量顯著高于200 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05），且極顯著高于100 μmol/l雌激素添加組（P＜0.01），200 μmol/l雌激素添加組CSN1表達(dá)量極顯著高于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01）；在24 h時(shí)，200 μmol/l雌激素添加組CSN1 表達(dá)量極顯著高于50、100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01），100 μmol/l雌激素添加組CSN1表達(dá)量極顯著高于50 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01）；在48 h 時(shí)，50、200 μmol/l 雌激素添加組CSN1 表達(dá)量顯著高于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05）；在72 h時(shí)，200 μmol/l雌激素添加組CSN1表達(dá)量極顯著高于50、100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01）。其余各濃度組間差異均不顯著。

不添加雌激素時(shí)，對(duì)照組CSN1 表達(dá)量在48 h 時(shí)顯著高于其他各時(shí)間點(diǎn)（P＜0.05）；添加50 μmol/l雌激素時(shí)，12、48、72 h 的CSN1 表達(dá)量顯著高于24 h（P＜0.05）；添加100、200 μmol/l 雌激素時(shí)，24、72 h 的CSN1 表達(dá)量顯著高于12、48 h（P＜0.05）。其余各時(shí)間點(diǎn)差異均不顯著。圖2 是各組在不同時(shí)間段時(shí)細(xì)胞CSN1 表達(dá)的凝膠圖像。

圖2 不同雌激素濃度在不同時(shí)間段時(shí)CSN1表達(dá)的凝膠圖像

2.2.2 雌激素濃度對(duì)CSN2表達(dá)的影響

由表2 可知，在48 h 時(shí)，與對(duì)照組相比，添加200 μmol/l 雌激素組其CSN2 表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；在72 h 時(shí)，與對(duì)照組相比，添加100 μmol/l雌激素組其CSN2 表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），添加200 μmol/l 雌激素組其CSN2 表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。其余組與對(duì)照組間差異均不顯著。

表2 不同雌激素濃度在不同時(shí)間段對(duì)CSN2表達(dá)量的影響（灰度值）

在12 h 時(shí)，100 μmol/l 雌激素添加組CSN2 表達(dá)量顯著高于200 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05）；在24 h時(shí)，100 μmol/l雌激素添加組CSN2表達(dá)量顯著高于50 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05）；在48 h 時(shí)，200 μmol/l 雌激素添加組CSN2 表達(dá)量顯著高于50、100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05）；在72 h 時(shí)，200 μmol/l 雌激素添加組CSN2 表達(dá)量顯著高于50 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05）。其余組各濃度組間差異均不顯著。

不添加雌激素及添加50 μmol/l雌激素時(shí)，在72 h CSN2 表達(dá)量顯著高于其他各時(shí)間點(diǎn)（P＜0.05）；添加100 μmol/l 雌激素時(shí)，在72 hCSN2 表達(dá)量顯著高于24 h（P＜0.05），且極顯著高于12、48 h（P＜0.01），24 h時(shí)CSN2 表達(dá)量顯著高于48 h（P＜0.05）；添加200 μmol/l雌激素時(shí)，在72 h 時(shí)CSN2 表達(dá)量極顯著高于其他各時(shí)間點(diǎn)（P＜0.01），在48 h時(shí)CSN2表達(dá)量顯著高于24 h（P＜0.05），且極顯著高于12 h（P＜0.01），在24 h 時(shí)CSN2 表達(dá)量顯著高于12 h（P＜0.05）。其余各時(shí)間組間差異均不顯著。圖3 是各組在不同時(shí)間段時(shí)細(xì)胞CSN2表達(dá)的凝膠圖像。

圖3 不同雌激素濃度在不同時(shí)間段時(shí)CSN2表達(dá)的凝膠圖像

2.3 雌激素對(duì)TG表達(dá)的影響

由表3 可知，在12 h 時(shí)，與對(duì)照組相比，添加50 μmol/l 雌激素組其TG 表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），添加100 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）；在24 h 時(shí)，與對(duì)照組相比，添加50 μmol/l 雌激素組其TG 表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），添加100 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），添加200 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；在48 h時(shí)，與對(duì)照組相比，添加50 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），添加100 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），添加200 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；在72 h時(shí)，與對(duì)照組相比，添加50 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），200 μmol/l雌激素組其TG表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。其余組與對(duì)照組間差異均不顯著。

表3 不同雌激素濃度在不同時(shí)間段對(duì)TG表達(dá)量的影響（灰度值）

在12 h 時(shí)，50 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量極顯著高于100、200 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01），200 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量極顯著于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01）；在24 h 時(shí)，200 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量極顯著高于50、100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01），50 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量極顯著高于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01）；在48 h 時(shí)，200 μmol/l 雌激素添加組TG表達(dá)量顯著高于50 μmol/l雌激素添加組（P＜0.05），且極顯著高于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01），50 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量極顯著高于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01）；在72 h 時(shí)，200 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量極顯著高于50、100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.01），50 μmol/l 雌激素添加組TG 表達(dá)量顯著高于100 μmol/l 雌激素添加組（P＜0.05）。其余各濃度添加組間差異均不顯著。

不添加雌激素時(shí)，對(duì)照組在24 h 時(shí)TG 表達(dá)量極顯著高于其他各時(shí)間點(diǎn)（P＜0.01），在72 h 時(shí)TG 表達(dá)量極顯著高于12、48 h（P＜0.01）；在添加50、100 μmol/l雌激素時(shí)，24、72 h時(shí)TG表達(dá)量顯著高于12、48 h（P＜0.05）；在添加200 μmol/l 雌激素時(shí)，24、72 h 時(shí)TG 表達(dá)量極顯著高于12、48 h（P＜0.01）。其余各時(shí)間點(diǎn)組間差異均不顯著。

3 討論

3.1 雌激素對(duì)乳腺上皮細(xì)胞中CSN1表達(dá)的影響

本實(shí)驗(yàn)研究表明，添加雌激素與對(duì)照組相比可以促進(jìn)CSN1的表達(dá)。乳腺上皮細(xì)胞是乳腺實(shí)質(zhì)腺泡和導(dǎo)管系統(tǒng)的重要組成部分[7]，雌激素可以促進(jìn)乳腺導(dǎo)管的延伸及乳腺上皮細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步促進(jìn)乳腺分泌乳汁。乳汁中，重要的營養(yǎng)成分之一就是乳蛋白，主要含有乳清蛋白和酪蛋白[8]。隨著對(duì)激素調(diào)控乳腺上皮細(xì)胞研究的逐漸深入，雌激素能夠促進(jìn)CSN1 表達(dá)的原因可能是雌激素可以激活細(xì)胞內(nèi)與其有關(guān)的一些信號(hào)傳導(dǎo)通路，而這些通路的激活可能與乳腺上皮細(xì)胞合成及分泌CSN1的能力有關(guān)[9]。楊建英、艾曉杰等[10-11]給荷斯坦牛飼喂大豆黃酮（植物類雌激素）的研究發(fā)現(xiàn)，大豆黃酮能夠明顯的提高牛乳中乳蛋白的含量。在對(duì)山羊乳腺的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)注射17 β-雌二醇后，可誘導(dǎo)提高乳腺上皮細(xì)胞分泌α-酪蛋白的能力[12]。與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

在50、100、200 μmol/l雌激素添加組中，200 μmol/l高濃度雌激素添加組在24、48、72 h 三個(gè)時(shí)間段的CSN1的表達(dá)量均顯著或極顯著高于50、100 μmol/l雌激素添加組在這段時(shí)間內(nèi)CSN1的表達(dá)量。說明高濃度雌激素添加組能夠隨時(shí)間的增長，更好的促進(jìn)CSN1 的表達(dá)?？赡苁且?yàn)榇萍に氐臐舛壬吆?，大量的雌激素與其特異性受體發(fā)生結(jié)合后，誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞分泌了一些細(xì)胞因子，這些因子可能促進(jìn)了乳腺上皮細(xì)胞的增殖，間接的影響了CSN1 的合成[13-14]。盧志勇等[15-17]也做出了同樣的結(jié)果，他們的研究發(fā)現(xiàn)，加入高添加劑量的大豆異黃酮可以使酪蛋白的表達(dá)量明顯提高，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性趨勢(shì)。

隨著時(shí)間的逐漸增加，100、200 μmol/l 雌激素添加組CSN1的表達(dá)量呈先上升，48 h時(shí)下降，72 h時(shí)又再次升高的趨勢(shì)。這種現(xiàn)象的出現(xiàn)可能與細(xì)胞自身合成CSN1 的過程及能力有關(guān)，高濃度雌激素添加組在72 hCSN1 的表達(dá)量再次升高，可能是改變了細(xì)胞內(nèi)CSN1 的合成模式。具體的機(jī)制還不清楚，有待于進(jìn)一步深入研究。

3.2 雌激素對(duì)乳腺上皮細(xì)胞中CSN2表達(dá)的影響

研究表明，添加雌激素與對(duì)照組相比可以促進(jìn)CSN2的表達(dá)。酪蛋白是研究激素對(duì)乳腺細(xì)胞作用的標(biāo)志，占乳蛋白的80%[18]，它是乳腺特有的合成蛋白，其他細(xì)胞不能夠合成。乳腺上皮細(xì)胞是合成和分泌乳汁的基本場(chǎng)所。CSN2只在乳腺上皮細(xì)胞中分泌[19]，雌激素能夠促進(jìn)CSN2 的表達(dá)，可能是因?yàn)榇萍に乜梢栽鰪?qiáng)細(xì)胞的抗氧化性，減緩細(xì)胞的衰老及凋亡，從而提高了細(xì)胞自身對(duì)分泌CSN2所需營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化速率，也可能是雌激素可以刺激垂體釋放催乳素來調(diào)節(jié)乳蛋白的合成[20]。程蕾等[21]對(duì)乳成分檢測(cè)結(jié)果表明，日糧中添加大豆異黃酮200 mg/kg，乳蛋白含量略有提高。李東[22]的研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，經(jīng)過添加雌激素培養(yǎng)的細(xì)胞分泌CSN2 的能力明顯提高。李艷等[23]的研究顯示，當(dāng)催乳素、胰島素和氫化可的松一起添加時(shí)，能顯著的提高β-酪蛋白。這些研究與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。

200 μmol/l 濃度雌激素添加組CSN2 的表達(dá)量在48、72 h時(shí)顯著或極顯著高于50、100 μmol/l濃度雌激素添加組。說明高濃度雌激素添加組在培養(yǎng)時(shí)間上升后能有效的促進(jìn)CSN2的表達(dá)?？赡苁请S著雌激素和時(shí)間的不斷增加，雌激素開始促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞吸收大量的其自身生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，使乳腺上皮細(xì)胞的增殖能力及活力不斷提高，進(jìn)一步合成和分泌CSN2。這之中具體的作用機(jī)制還需進(jìn)一步的探討研究。

3.3 雌激素對(duì)乳腺上皮細(xì)胞中TG表達(dá)的影響

本試驗(yàn)研究表明，添加雌激素與對(duì)照組相比可以促進(jìn)TG 的表達(dá)。乳脂肪的主要成分為甘油三酯、磷脂和甾醇，是牛奶中主要的能量成分。乳脂肪在體內(nèi)主要是以甘油三酯的形式存在。雌激素可以促進(jìn)TG的表達(dá)，可能是雌激素通過旁分泌或自分泌的方式分泌了一些細(xì)胞因子，這些因子進(jìn)入到血液后，促進(jìn)了血液中胰島素樣生長因子（IGF-I）的含量逐漸升高，IGF-I 進(jìn)一步的作用于下丘腦和垂體，促進(jìn)垂體分泌了大量的催乳素及生長激素等，這些激素含量的變化直接或間接的引起了乳脂含量的變化[11]，也可能是雌激素通過誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞，使其自身分泌更多的催乳素，催乳素通過PI3K/AKT 途徑促進(jìn)了乳脂的合成[24]。艾曉杰、程蕾[11，21]等對(duì)乳成分檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，日糧中添加大豆異黃酮，乳脂肪含量極顯著升高。與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。

在50、100、200 μmol/l雌激素添加組中，200 μmol/l濃度雌激素添加組在24、48、72 h三個(gè)時(shí)間段的CSN1的表達(dá)量均顯著或極顯著高于50、100 μmol/l 雌激素添加組在這段時(shí)間內(nèi)CSN1的表達(dá)量。說明高濃度雌激素添加組能夠隨時(shí)間的上升，更好的促進(jìn)TG 的表達(dá)。其原因可能是雌激素作為生理調(diào)節(jié)劑，隨著濃度的不斷增加，促進(jìn)大量其他因子的不斷分泌，這些因子進(jìn)入到血液中，誘發(fā)了催乳素，IGF-I及促黃體素等一些內(nèi)源性激素的水平發(fā)生了改變，促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞大量的合成和分泌乳脂。

隨著時(shí)間的逐漸增加，各濃度雌激素添加組TG的表達(dá)量呈先上升，48 h 時(shí)下降，72 h 時(shí)又再次升高的趨勢(shì)。其具體的機(jī)制目前還尚不清楚，有待進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

綜上所述，添加雌激素可以促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞中CSN1、CSN2 及TG 的表達(dá)。且在50、100、200 μmol/l這三種濃度的雌激素添加組中，200 μmol/l 在一定條件下促進(jìn)CSN1的表達(dá)效果最好；100、200 μmol/l雌激素添加組均能夠促進(jìn)CSN2 的表達(dá)，且100 μmol/l 促進(jìn)CSN2 的表達(dá)效果最好，尤其是在12、24 h；50、200 μmol/l 雌激素添加組可以促進(jìn)TG 的表達(dá)，但100 μmol/l雌激素添加組能夠抑制TG的表達(dá)。