氣相色譜法檢測(cè)黃瓜和土壤中氟唑活化酯殘留

張春榮，郭鈐，孔麗萍，徐玲英

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所 省部共建國家重點(diǎn)試驗(yàn)室培育基地 浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021)

氟唑活化酯，化學(xué)名稱為2,2,2-三氟乙基苯并[1,2,3]噻二唑-7-甲酸酯，是由華東理工大學(xué)開發(fā)的創(chuàng)制農(nóng)藥產(chǎn)品，上海泰禾化工有限公司享有專利化合物獨(dú)家使用權(quán)，并與華東理工大學(xué)產(chǎn)學(xué)研合作開發(fā)工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)。氟唑活化酯是一類新型的植物誘導(dǎo)抗病激活劑，本身沒有殺菌活性，但在活體植物上能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生對(duì)侵染病菌的抗性[1]，對(duì)水稻白葉枯病、水稻稻瘟病、瓜類炭疽病和瓜類白粉病均具有誘導(dǎo)抗病活性[2]。目前，我國政府批準(zhǔn)的氟唑活化酯的登記作物和防治對(duì)象為黃瓜白粉??；但我國、CAC(國際食品法典委員會(huì))、歐盟、美國、日本等均未制定黃瓜上氟唑活化酯的最大殘留限量值。關(guān)于氟唑活化酯的誘導(dǎo)抗病機(jī)理，目前已有不少研究報(bào)道[3-6]。在檢測(cè)方法上，覃柳瓊等[1]建立了高效液相色譜法測(cè)定氟唑活化酯含量的方法，但關(guān)于其殘留檢測(cè)方法尚未見任何報(bào)道。為評(píng)價(jià)氟唑活化酯使用的安全性，有效防止和減少其對(duì)農(nóng)作物和環(huán)境的污染，并為制定氟唑活化酯在黃瓜中的最高允許殘留限量提供參考依據(jù)，特開展氟唑活化酯在黃瓜和土壤樣品中殘留量檢測(cè)的氣相色譜方法研究，并在浙江杭州、山東淄博和湖北武漢3地開展了2 a的田間殘留檢測(cè)試驗(yàn)。該方法準(zhǔn)確、凈化分離效果好、靈敏度高。現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

供試藥劑：5%氟唑活化酯乳油，由南通泰禾化工有限公司提供。99.0%氟唑活化酯標(biāo)準(zhǔn)品，由南通泰禾化工有限公司提供。乙腈、氯化鈉、乙酸乙酯、石油醚(60～90 ℃沸程)、無水硫酸鈉，均為分析純；弗羅里硅土，650 ℃烘4 h，5%水脫活，分析純。試驗(yàn)用水為超純水。

試驗(yàn)作物：黃瓜。

試驗(yàn)儀器：Shimadzu GC-2010 Plus型GC-ECD(氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器)，日本島津；AB104-S電子天平(0.000 1 g)，梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司；R201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申勝生物技術(shù)有限公司；HH-4恒溫水浴鍋，江蘇金壇市江南儀器廠；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵，鞏義市子華儀器責(zé)任公司；SPN402F型電子天平(0.01 g)，梅特勒-托利多(常州)測(cè)量技術(shù)有限公司；W201B型數(shù)控恒溫浴鍋，上海申勝生物技術(shù)有限公司；DHZ-DA全溫型大容器恒溫振蕩器，太倉市試驗(yàn)設(shè)備廠。

1.2 田間試驗(yàn)

1.2.1 施藥

消解動(dòng)態(tài)。施藥時(shí)期為黃瓜果實(shí)生長至成熟個(gè)體一半大小時(shí)，施藥時(shí)應(yīng)保證用于動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的黃瓜均勻著藥。小區(qū)面積15 m2，施藥劑量為制劑量1 666.7倍液(30 mg·kg-1)，施藥后2 h和1、3、5、7、10、14、21、28 d采集黃瓜和土壤樣本。

殘留量。設(shè)2個(gè)施藥劑量：低劑量，制劑量2 500倍液(20 mg·kg-1)；高劑量，制劑量1 666.7倍液(30 mg·kg-1)。各設(shè)5～6次施藥，小區(qū)面積30 m2。黃瓜定植苗后第一次用藥，施藥間隔期7 d。采樣時(shí)距離最后一次施藥的間隔分別為3、5、7 d。

試驗(yàn)另設(shè)清水空白對(duì)照。以上所有處理均重復(fù)3次，處理間設(shè)保護(hù)帶。

1.2.2 樣本采集

用隨機(jī)方法在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)不同方向及不同部位采集6份以上(不少于2 kg)生長正常、無病害、成熟的黃瓜樣本；并在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)隨機(jī)取點(diǎn)6～12個(gè)，用土鉆采集0～15 cm的地表土(動(dòng)態(tài)采集0～10 cm)1～2 kg，除去碎石、雜草和植物根莖等雜物。將以上樣本裝入樣品袋中包扎妥當(dāng)，同時(shí)采集對(duì)照區(qū)樣本。

1.2.3 樣品制備與保存

田間樣本采集后8 h內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。黃瓜田間樣本用不銹鋼刀切成1 cm大小的碎塊，充分混勻后用四分法縮分黃瓜及土壤樣品，分取兩份150 g的樣品，裝入封口樣品容器中，貼好標(biāo)簽，貯存于-20 ℃冰柜，待測(cè)。

1.3 樣品分析

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取99%的氟唑活化酯標(biāo)準(zhǔn)品0.010 1 g于100 mL容量瓶中，用石油醚配成濃度為100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，吸取1.0 mL于10 mL容量瓶中，石油醚定容，得到10.0 mg·L-1的氟唑活化酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，再分別稀釋成0.001、0.002、0.005、0.010、0.020 mg·L-1的系列濃度氟唑活化酯標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 提取

稱取樣品(黃瓜、土壤)各20 g(精確到0.01 g)，放入250 mL錐形瓶中，加入50 mL乙腈振蕩30 min，提取液經(jīng)布氏漏斗抽濾，濾液轉(zhuǎn)入裝有10 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，充分搖勻2 min，靜置15 min，取上清液5 mL到250 mL平底燒瓶中，在40 ℃水浴條件下濃縮近干，待凈化。

1.3.3 凈化

在玻璃層析柱內(nèi)依次加入2 cm高的無水Na2SO4、4 g弗羅里硅土、2 cm高的無水Na2SO4，用10 mL石油醚預(yù)淋層析柱，棄去淋洗液。

將以上提取物用10 mL石油醚溶解洗滌3次，移入層析柱中，用10 mL石油醚-乙酸乙酯(體積比95∶5)淋洗，棄去淋出液，再用20 mL石油醚-乙酸乙酯(體積比90∶10)洗脫，收集洗脫液，在40 ℃水浴條件下濃縮干，用5 mL石油醚定容待測(cè)。

1.3.4 色譜條件

色譜柱：RTX-1701(30 m×0.320 mm×0.25 μm)；氣體流量恒壓：100.0 kPa；載氣：氮?dú)?，流?0.0 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：250 ℃，不分流進(jìn)樣；檢測(cè)器溫度：300 ℃；基座溫度：280 ℃。程序升溫：150 ℃，0.5 min；25 ℃·min-1升溫至260 ℃，保持3 min；再20 ℃·min-1升溫至280 ℃，保持5 min。進(jìn)樣量：1.0 μL；尾吹：30 mL·min-1。外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用石油醚準(zhǔn)確配制0.001、0.002、0.005、0.010、0.020 mg·L-1的系列濃度氟唑活化酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按前述色譜條件測(cè)定，以峰面積(y)-濃度(x)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)最小二乘法擬合，得回歸方程y=11 741 408.789 4x+4 776.693 2(R2=0.999 2)，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈良好的線性關(guān)系，可見，氟唑活化酯在0.001～0.02 mg·L-1范圍內(nèi)，含量與色譜峰面積呈顯著的線性關(guān)系，可滿足定量分析的需要。

2.2 方法的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度

2.2.1 方法的準(zhǔn)確度和精密度

采用添加回收率和變異系數(shù)(RSD)表示此方法的準(zhǔn)確度及精密度。在黃瓜和土壤空白樣品中添加3檔濃度的氟唑活化酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，每檔重復(fù)5次，測(cè)定回收率(表1)。當(dāng)黃瓜、土壤中氟唑活化酯的添加濃度為0.02、0.2、2.0 mg·kg-1時(shí)，黃瓜中的回收率為95.5%～97.4%，RSD為1.7%～4.5%；土壤中的回收率為92.1%～106.8%，RSD為1.7%～6.1%。說明分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，可滿足農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求。

2.2.2 方法的靈敏度

采用最小檢出量和最低檢出濃度來表示此方法的靈敏度。儀器對(duì)氟唑活化酯的最小檢出量為1.0×10-12g；方法對(duì)黃瓜及土壤樣品中氟唑活化酯的最低檢出濃度均為0.02 mg·kg-1。

表1 氟唑活化酯在黃瓜和土壤中的平均添加回收率

2.3 氟唑活化酯在黃瓜和土壤基質(zhì)中的消解動(dòng)態(tài)和最終殘留

以施藥劑量30 mg·kg-1噴施5%氟唑活化酯乳油1次，浙江點(diǎn)、山東點(diǎn)和湖北點(diǎn)3地2 a樣品中僅在藥后2 h黃瓜樣品中檢測(cè)到氟唑活化酯，其含量為0.020～0.045 mg·kg-1，土壤樣品中氟唑活化酯均未檢出(<0.020 mg·kg-1)，表明氟唑活化酯在黃瓜和土壤中消解較快。

以低劑量(20 mg·kg-1)和高劑量(30 mg·kg-1)分別噴施5%氟唑活化酯乳油5次和6次，施藥間隔期均為7 d，距離最后一次噴藥3、5、7 d采樣測(cè)定黃瓜和土壤中氟唑活化酯的殘留量。浙江點(diǎn)、山東點(diǎn)和湖北點(diǎn)黃瓜和土壤樣品中氟唑活化酯均未檢出(<0.020 mg·kg-1)。說明用5%氟唑活化酯乳油防治黃瓜白粉病，用藥量20～30 mg·kg-1，施藥5～6次，施藥間隔7 d，距最后一次施藥3 d采樣，采收的黃瓜樣品是安全的。氟唑活化酯在土壤中消解較快，不易對(duì)周圍環(huán)境及地下水造成風(fēng)險(xiǎn)。

3 小結(jié)

建立了一種基于氣相色譜檢測(cè)黃瓜和土壤中氟唑活化酯的分析方法。結(jié)果表明，該方法的靈敏度、精密度和回收率等均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。氟唑活化酯在黃瓜和土壤中消解較快，不易對(duì)周圍環(huán)境及地下水造成風(fēng)險(xiǎn)。5%氟唑活化酯乳油，用藥量20～30 mg·kg-1，施藥5～6次，施藥間隔7 d，距離最后一次噴藥3 d時(shí)黃瓜和土壤中氟唑活化酯殘留量均<0.020 mg·kg-1，無殘留風(fēng)險(xiǎn)。