丁香酚對錦鯉幼魚的麻醉作用

楊志強，李瀟軒，李志輝，尹陸樂，朱 天，陳建清，韓 飛，潘建林

(江蘇省淡水水產研究所，江蘇 南京 210017)

錦鯉(Cryprinuscarpiod)是風靡世界的高檔觀賞魚，有“水中活寶石” “會游泳的藝術品”之稱[1]，因其雜食性、易于飼養(yǎng)和繁殖，而受到人們的廣泛歡迎。錦鯉在人為操作和運輸過程中由于活動敏捷、喜跳躍，伴隨劇烈掙扎，極易導致其掉鱗、受傷、充血。但如果采用麻醉劑進行相應的處理，其合理使用不僅能夠減輕錦鯉應激反應，減少魚體損傷，而且能降低死亡率[2-3]。

用于魚類的麻醉劑有近30種，包括丁香酚、MS-222、美托味酯、喹哪啶、CO2等[4]。丁香酚本質為植物香料，作為麻醉劑能從機體組織和血液中快速排出，不會影響人體健康，也不會誘發(fā)機體突變[5]。目前，丁香酚被廣泛應用于醫(yī)學領域，常作為牙科鎮(zhèn)痛劑。由于丁香酚沒有殘留期、液體制劑在淡水和海水中均易于溶解，且價廉易得，大多數(shù)國家都認可丁香酚是一種合法的水產麻醉劑，并廣泛應用于生產應用和試驗研究，例如活魚運輸、活體手術以及親魚采卵等[6-12]，美國食品藥品監(jiān)督管理局也批準其用于麻醉食用魚[13]。目前，關于丁香酚的麻醉效果，國內外學者主要對大黃魚(Larimichthyscrocea)[7]、倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)[14]、羅非魚(Oreochromisspp)[15]、半滑舌鰨(CynoglossussemilaevisGunther)[11]、中國對蝦(Fenneropenaeuschinensis)[16]等水產動物進行了研究，而有關丁香酚對錦鯉麻醉效果的研究僅見張志明等[17]和李春梅等[18]的報道。

本研究采用不同濃度的丁香酚對錦鯉幼魚進行麻醉試驗，通過觀察錦鯉幼魚在不同麻醉條件下的行為反應，旨在找出適合于錦鯉長途運輸及人工操作的適宜質量濃度范圍，以期為丁香酚應用于錦鯉麻醉提供基礎數(shù)據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗時間：2018年5月15—16日。試驗地點：江蘇省淡水水產研究所祿口基地。試驗用魚：當年春季基地人工繁育所得，挑選規(guī)格均勻、體質良好、健康無病的錦鯉幼魚，體長為(14.16±0.98)cm，體質量為(40.50±1.04)g，試驗前停食1 d。試驗裝置：試驗全程室內進行，10 L左右的白色塑料箱。試驗用水：自來水曝氣24 h，水體溶解氧>5.0 mg/L，pH值為(7.7±0.1)，溫度為(19.5±0.5)℃。

丁香酚為丁香油的主要成分，學名：1-羥基-2-甲氧基-4-烯丙基苯，分子式：C11H12O2，液體呈淡黃色，易溶于醚、冰醋酸及醇，難溶于水。其購自成都化夏化學試劑有限公司，為分析純，有效成分≥95%，使用時按V(丁香酚)∶V(酒精)=1∶8溶解于酒精后，靜置10 min使用。

1.2 試驗方法

在本試驗設計中，共設計7個丁香酚濃度水平(0、10、20、30、40、60、100 mg/L)，每個濃度組10尾魚。麻醉時不增氧，麻醉劑加入后均勻攪動，室內常溫。其中，對照組即0 mg/L丁香酚濃度組不加入酒精。觀察不同丁香酚濃度水平麻醉錦鯉幼魚的效果及其行為反應，分別記錄其進入不同麻醉分期(A1期：鎮(zhèn)靜期、A2期：輕度麻醉期、A3期：中度麻醉期、A4期：深度麻醉期)及麻醉后的錦鯉幼魚轉入清水中進入R4期(正常期)所需要的時間。若轉入清水中24 h后麻醉魚仍不蘇醒，則判定為死亡，記錄能夠完全復蘇的麻醉魚尾數(shù)。

1.3 數(shù)據處理

數(shù)據分析使用Excel 2013。

復蘇率的計算公式：復蘇率=能夠完全復蘇的麻醉魚尾數(shù)/試驗魚總數(shù)×100%。

2 結果與分析

2.1 錦鯉幼魚在不同濃度丁香酚中的行為反應

參考梁政遠等[19]和張志明等[17]的報道，魚類麻醉及復蘇分期行為體征見表1。觀察麻醉錦鯉幼魚的行為反應，發(fā)現(xiàn)錦鯉幼魚在不同的丁香酚水溶液中能經歷的鎮(zhèn)靜期、輕度麻醉期、中度麻醉期以及深度麻醉期不一。10 mg/L丁香酚濃度組錦鯉幼魚僅能進入鎮(zhèn)靜期，鎮(zhèn)靜期錦鯉幼魚表現(xiàn)為對外界刺激反應明顯，鰓蓋張合頻率正常，游速正常。20 mg/L丁香酚濃度組錦鯉幼魚僅能進入鎮(zhèn)靜期、輕度麻醉期，輕度麻醉期錦鯉幼魚表現(xiàn)為對外界刺激反應遲緩，游速減慢，行為遲鈍。30、40、60和100 mg/L丁香酚濃度組錦鯉幼魚均能進入不同麻醉分期(鎮(zhèn)靜期、輕度麻醉期、中度麻醉期、深度麻醉期)，中度麻醉期錦鯉幼魚表現(xiàn)為完全失去反應能力，出現(xiàn)怪異泳狀直至游動停止，浮在水面；深度麻醉期錦鯉幼魚表現(xiàn)為鰓蓋張合頻率降低直至停止，呼吸微弱或停止，魚體逐漸失去平衡，沉入底部。

表1 魚類麻醉及復蘇分期行為體征

續(xù)表1

注：A0.正常期；A1.鎮(zhèn)靜期；A2.輕度麻醉期；A3.中度麻醉期；A4.深度麻醉期；R1.鰓動期；R2.抖動期；R3.游動期；R4.正常期。

Notes：A0.Normal period；A1.Sedation period；A2.Mild anesthesia period；A3.Moderate anesthesia period；A4.Deep anesthesia period；R1.Gill moving period；R2.Jitter period；R3.Swimming period；R4.Normal period.

2.2 錦鯉幼魚的麻醉時間和蘇醒時間

錦鯉幼魚在各丁香酚濃度組進入不同麻醉分期的時間和麻醉后蘇醒時間以及錦鯉幼魚的復蘇率見表2。由表2可以看出，隨著丁香酚濃度的逐漸升高，錦鯉幼魚表現(xiàn)出進入各麻醉分期所需時間逐漸減少，而后所需蘇醒時間逐漸增加；0、10、20、30、40和60 mg/L丁香酚濃度組錦鯉幼魚復蘇率均達到100%，而100 mg/L濃度組錦鯉幼魚出現(xiàn)死亡，復蘇率為90%。

表2 不同濃度丁香酚對錦鯉幼魚的麻醉效果

注：*表示不能進入麻醉狀態(tài)，—表示此期特征不明顯。

Notes：* indicated fishes couldn’t enter anesthesia，— indicated the characteristics in the period were not obvious.

3 小結與討論

3.1 丁香酚對錦鯉幼魚的麻醉效果

麻醉劑通過抑制魚類的反射能力和活動能力導致魚類排泄物減少、鰓蓋張合頻率減緩及游動遲緩，其作用通徑為魚體表及魚鰓吸收麻醉劑并傳導至神經中樞，如果麻醉劑的用量超過一定范圍，魚類長時間處于中度麻醉期或深度麻醉期，則會造成死亡[20]。由于物種之間的差異，丁香酚麻醉不同魚類的效果也存在差異。丁香酚作為大多數(shù)魚類的首選麻醉劑，其在觀賞魚研究應用方面則較少。本試驗中，在不同麻醉分期錦鯉幼魚均不同程度表現(xiàn)出鰓蓋張合頻率減緩、游動遲緩等行為。丁香酚濃度≤10 mg/L時麻醉錦鯉幼魚無效；濃度為20 mg/L時需要8.79 min可進入輕度麻醉期；濃度≥30 mg/L時可進入中度麻醉期及深度麻醉期；濃度為100 mg/L時，未能完全復蘇，分析原因可能是魚體表及魚鰓吸收過量丁香酚，呼吸頻率降低，導致魚類缺氧死亡。

3.2 丁香酚麻醉錦鯉幼魚的實用濃度選擇

麻醉劑的種類作為影響魚類麻醉效果的關鍵因素[21]，加之同一種麻醉劑的麻醉效果也受環(huán)境條件、物種及其狀態(tài)等因素的影響，因此，如何正確選擇麻醉劑種類及其使用濃度需考慮多方面因素，在實際應用中首要考慮的是適當?shù)穆樽韯┝縖22]。水產動物在試驗研究(測量、取樣等)和生產應用(捕捉、運輸?shù)?的過程中應激反應明顯，其機體可能會有不同程度的損傷，只有讓其處于中度麻醉期才能降低應激反應，從而減少機體損傷，試驗研究和生產應用也才能方便進行[20]。在外部環(huán)境條件一致的情況下，本文研究丁香酚不同濃度水平麻醉錦鯉幼魚的作用，試驗結果表明：10、 20 mg/L丁香酚濃度組麻醉作用不佳，錦鯉幼魚只進入A1期(鎮(zhèn)靜期)或A2期(輕度麻醉期)，而未能進入A3期(中度麻醉期)和A4期(深度麻醉期)；30、40和60 mg/L丁香酚濃度組麻醉作用較好，錦鯉幼魚均能完整進入不同麻醉分期(A1期、A2期、A3期、A4期)，蘇醒時間分別為5.02、5.77和7.40 min，30、40 mg/L濃度組蘇醒時間明顯短于60 mg/L濃度組；100 mg/L丁香酚濃度組，錦鯉幼魚也能完整進入不同麻醉分期(A2期、A3期、A4期)，但未能全部復蘇，出現(xiàn)死亡。綜合考慮麻醉效果、蘇醒時間及麻醉劑用量，為節(jié)約麻醉成本，在實踐操作中建議對體長為(14.16±0.98)cm、體質量為(40.50±1.04)g的錦鯉麻醉采用30～40 mg/L丁香酚，錦鯉幼魚進入A3期(中度麻醉期)，所需時間為5.22～17.46 min，麻醉作用明顯，而將其轉置清水中僅歷時5.02～5.77 min便可進入R4期(正常期)，蘇醒時間短。本文試驗結果與張志明等[17]采用丁香酚對錦鯉(體長12～14 cm，體質量30～40 g)麻醉效果的研究結果(麻醉運輸適宜質量濃度為15～20 mg/ L)不一致，試驗結果丁香酚濃度相差較多，可能是因為一方面錦鯉幼魚規(guī)格不一致，另外一方面試驗用錦鯉體質不一樣；與李春梅等[18]的研究結果(錦鯉魚種1.0～2.0 cm，10 mg/L濃度藥浴10 min對錦鯉比較合適)不一致，可能是因為錦鯉幼魚規(guī)格不一致。

因此，丁香酚在一定的濃度范圍內可使錦鯉幼魚處于麻醉狀態(tài)，即適合作為錦鯉幼魚麻醉劑，這為短期操作中丁香酚對其他水產動物進行麻醉提供了參考。此外，后續(xù)有待進一步開展丁香酚作為麻醉劑在不同目的(運輸、稱重、采卵等)、不同種類和不同規(guī)格水產動物等方面的差異試驗研究。