噁蟲(chóng)酮原藥高效液相色譜分析方法研究

馮彥妮，姜宜飛，郭海霞，吳進(jìn)龍*

(1.山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250100；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京，100125)

1 前言

噁蟲(chóng)酮英文通用名稱(chēng)：Metoxadiazone，CAS號(hào)：60589-06-2，分子式：C10H10N2O4，相對(duì)分子質(zhì)量：222.2，化學(xué)名稱(chēng)：5-甲氧基-3-(鄰甲氧基苯基)-1,3,4-二唑-2-(3H)-酮，結(jié)構(gòu)式(圖1)。[1]

圖1 噁蟲(chóng)酮結(jié)構(gòu)式

噁蟲(chóng)酮具有良好的殺螨殺蟲(chóng)活性，殺蟲(chóng)譜廣，能夠?qū)⒗ハx(chóng)快速擊倒。其作用機(jī)理是抑制乙酰膽堿酯酶和對(duì)神經(jīng)軸索作用，對(duì)防治對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)產(chǎn)生抗性的家蠅、蟑螂等害蟲(chóng)具有很好的效果。對(duì)刺吸式口器害蟲(chóng)、同翅目害蟲(chóng)如蚜蟲(chóng)、飛虱、葉蟬等農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)都具有優(yōu)異的殺蟲(chóng)活性。它在植物體內(nèi)的持久期比較短而在葉面和土壤中的持效時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。[2]

目前國(guó)內(nèi)有關(guān)噁蟲(chóng)酮原藥的分析方法未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法，對(duì)噁蟲(chóng)酮原藥進(jìn)行定量分析，該方法操作簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)分析檢測(cè)的參考方法。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 甲醇(色譜純)；超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；磷酸(分析純)；噁蟲(chóng)酮標(biāo)樣，已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%(由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供)；噁蟲(chóng)酮原藥(由某公司提供)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1200，具有二極管陣列檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器，定量環(huán)：100μL；Agilent色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：250mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C185.0μm填充物。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：ψ(甲醇:0.1%磷酸水溶液)=50:50；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時(shí)間：噁蟲(chóng)酮約6.7min。

噁蟲(chóng)酮標(biāo)樣和原藥的高效液相色譜圖(圖2、3)。

圖2 噁蟲(chóng)酮標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖3 噁蟲(chóng)酮原藥高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱(chēng)取噁蟲(chóng)酮標(biāo)樣0.02g(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱(chēng)取含噁蟲(chóng)酮0.02g的試樣(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中噁蟲(chóng)酮峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中噁蟲(chóng)酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1──標(biāo)樣溶液中噁蟲(chóng)酮峰面積的平均值；

A2──試樣溶液中噁蟲(chóng)酮峰面積的平均值；

m1──標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2──試樣的質(zhì)量，g；

P──標(biāo)樣中噁蟲(chóng)酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 通過(guò)Agilent 1200高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得噁蟲(chóng)酮的紫外波長(zhǎng)掃描圖(圖4)。從圖中可以看到噁蟲(chóng)酮最大吸收波長(zhǎng)在220nm處，在280nm處也有較大的吸收，為了盡量減少溶劑的干擾，將檢測(cè)波長(zhǎng)定為280nm。

圖4 噁蟲(chóng)酮紫外吸收譜圖

色譜柱選擇常規(guī)的ZORBAX SB-C18反相柱。依據(jù)噁蟲(chóng)酮物化性質(zhì)，用甲醇作為溶劑溶解樣品，并選擇甲醇和水作為流動(dòng)相，為了得到更好的分離效果和峰形，將流動(dòng)相按不同比例在色譜柱上進(jìn)行試驗(yàn)，最終確定流動(dòng)相為ψ(甲醇:0.1%磷酸水溶液)=50:50，在流速1.0mL/min時(shí)，有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對(duì)稱(chēng)，基線平穩(wěn)，能在短時(shí)間能得到滿意的分析結(jié)果，提高了工作效率。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 在0～1.0g/L范圍內(nèi)，配制0.05、0.1、0.45、0.7、1.0g/L的1組噁蟲(chóng)酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜操作條件進(jìn)行分析，測(cè)定噁蟲(chóng)酮的峰面積，取2次測(cè)定的平均結(jié)果，以噁蟲(chóng)酮的質(zhì)量濃度(x，g/L)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)校正曲線。擬合噁蟲(chóng)酮線性方程為y=4.034 3x-0.415 8，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。結(jié)果表明噁蟲(chóng)酮在測(cè)試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3 分析方法的精密度試驗(yàn) 從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱(chēng)取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得噁蟲(chóng)酮的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16%，變異系數(shù)為0.16%(表1)。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的噁蟲(chóng)酮(99.62%)中稱(chēng)取5個(gè)試樣，分別加入一定量的噁蟲(chóng)酮標(biāo)樣(99.9%)，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得噁蟲(chóng)酮的平均回收率為99.98%(表2)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

試驗(yàn)建立了高效液相色譜法檢測(cè)噁蟲(chóng)酮中有效成分的分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，噁蟲(chóng)酮在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法。