唐氏中孕血清學篩查標本-20 ℃保存1年后結果比對與臨床可接受性評價

冉健 裴元元 胡亮 溫麗娟 魏鳳香

(龍崗區(qū)婦幼保健院 中心實驗室，廣東 深圳 518172)

本實驗室中孕期唐氏血清學篩查是通過檢測懷孕15～20+6周孕婦血清中的甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)、游離人絨毛膜促性腺激素(freeβ-human chorionic gonadotrophin,β-hCG)、游離雌三醇(unconjugated oestriol，uE3)這3種標志物的濃度為基礎，結合孕婦的年齡、孕周、體重、以及是否患糖尿病、是否吸煙等參數(shù)，評估胎兒罹患21-三體綜合征的風險[1]。目前評估各篩查實驗室產(chǎn)前唐氏血清學篩查的效果，主要通過在隨訪基礎上通過四格表計算某一階段唐氏篩查樣本的假陽性率和檢出率來實現(xiàn)。由于血清學方法本身的局限性，目前國內(nèi)外實驗室中孕期唐氏篩查的檢出率約60%～70%[2]，即該方法存在一定的漏檢風險。為避免唐氏篩查假陰性導致唐氏兒出生引起的醫(yī)療糾紛，《胎兒常見染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術標準》中第Ⅰ部分：中孕期母血清學產(chǎn)前篩查中，要求對產(chǎn)前血清學篩查樣本在-80 ℃至少保存1年，用于滿足臨床復查結果的需要。由于-80 ℃醫(yī)用冰箱存在購買價格昂貴，使用過程中耗電量大的特點，為了節(jié)省成本，本研究探討是否可以用-20 ℃冰箱保存唐氏篩查檢測后的血清標本，同時達到臨床可接受的要求。

1 材料與方法

1.1 材料 收集本實驗室2016年5～10月中期唐氏篩查(孕15～20+6周)，21-三體綜合征風險評估提示低風險(風險值<1/1 000)，臨界風險(1/270>風險值≥1/1 000)，高風險(風險值≤1/270)的血清標本共60例，放置-20 ℃冰箱保存。檢測系統(tǒng):美國鉑金埃爾默公司提供的Perkin Elmer1235全自動時間分辨熒光免疫分析系統(tǒng)。檢測試劑：PE配套試劑盒，由芬蘭Wallac提供的AFP、freeβhCG、uE檢測試劑盒。風險計算軟件：Lifecycle4.0。本實驗室唐氏血清學篩查項目每年參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)控所有結果均在控。室內(nèi)質(zhì)控品由伯樂公司提供，設置低、中、高3個濃度水平，所有批次實驗滿足質(zhì)控指標要求。

1.2 統(tǒng)計學方法 以復查的標志物濃度值(y)對原始濃度(x)進行線性回歸，獲得回歸方程。建立AFP、βhCG、uE3各自的回歸方程：y=ax+b。以2016、2017年共6次衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)控公布的共30個樣本結果的均值作為因變量(x)，可接受的上限為自變量(y1)，可接受的下限為自變量(y2),建立回歸方程。即y1=a1x +b1；y2=a2x +b2。a值如果在a1與a2之間，b值在b1與b2之間，說明復查結果滿足臨床要求[3]。

應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對60例樣本AFP、freeβ-hCG、uE3的原始濃度與復查濃度進行配對t檢驗，如果P>0.05，則3種標志物的原始結果與-20 ℃保存一年后的復查結果之間沒有顯著性差異。

2 結果

AFP、freeβ-hCG、uE3標志物復查濃度與原始濃度線性回歸方程y=ax+b，可接受上限與均值線性回歸方程y1=a1x+b1，可接受上限與均值線性回歸方程y2=a2x+b2。AFP、freeβ-hCG、uE3標志物回歸方程系數(shù)均滿足a2

表1 3種標志物回歸方程

AFP、freeβ-hCG、uE3標志物P值均>0.05，分別為0.068、0.264、0.185，提示復查結果與原始結果之間沒有顯著性差異。

3 討論

21-三體綜合征又稱唐氏綜合征或先天愚型，是由于染色體多了一條21號染色體導致的疾病。唐氏兒臨床主要表現(xiàn)為嚴重智力低下，心血管畸形，多發(fā)性先天小畸形等，出生后可通過外周血染色體G顯帶核型分析明確診斷[4]。中期唐氏血清學篩查是通過檢測母體中AFP、βhCG、uE3這3種標志物的濃度為基礎，檢測結果的準確性直接影響篩查效果。中期唐氏血清學篩查是通過檢測孕婦體內(nèi)的AFP、freeβ-hCG、uE3計算胎兒的患病風險，由于標志物水平的個體差異，方法學局限性，目前唐氏篩查的檢出率60%～70%，對于漏檢的病例如果臨床對唐氏篩查結果提出質(zhì)疑時，需要將保存的血清樣本再次檢測。為滿足檢測結果重現(xiàn)性的要求，各篩查實驗室采用-80 ℃冰箱保存樣本。本研究希望通過對-20 ℃冰柜保存的樣本放置1年進行重復檢測，通過統(tǒng)計分析，驗證是否滿足結果重現(xiàn)性要求。

孕婦血清中的AFP主要是由胚胎卵黃囊及肝臟分泌的一種單鏈糖蛋白，分子量約70 000，半衰期約5天。孕婦體內(nèi)甲胎蛋白隨孕周增加，孕20周達到高峰。hCG是胎盤滋養(yǎng)層細胞分泌的一種多肽鏈糖蛋白，分子量36 700，半衰期24～36 h，freeβ-hCG在懷孕孕40～90天處于高峰，以后逐漸下降。freeβ-hCG對溫度非常敏感，較高的溫度可導致hCG亞基分離，造成freeβ-hCG測量值異常增高[5，6]。uE3是由胎兒-胎盤單位合成的一類甾體類激素，在孕婦體內(nèi)半衰期20～30分鐘，隨孕周增加呈上升趨勢。

從國家臨床檢驗中心室間質(zhì)評對中孕期血清學篩查AFP、βhCG、uE3標志物允許上限，允許下限可得出均值±30%為可接受標準，-20 ℃保存的血清標本如果能滿足復查結果在原始結果±30%以內(nèi)則表明符合臨床可接受性的要求[7，8]。本研究將近2年，6批次的衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評樣本共30個樣本的上限，下限對均值獲得回歸方程，將獲得的回歸方程系數(shù)作為實驗組的對照回歸方程。60個實驗樣本復查濃度對原始濃度的回歸方程均在參考回歸方程范圍，說明復查濃度對原始濃度的偏差在±30%范圍內(nèi)，滿足臨床可接受要求。

通過對原始濃度和復查濃度兩組數(shù)據(jù)進行配對t檢驗的結果同樣顯示，兩組數(shù)據(jù)沒有顯著性差異，說明-20 ℃保存1年后的樣本復查AFP、βhCG、uE3指標均可以滿足臨床要求。