明荷菊減肥茶的制備及其總黃酮和總生物堿的含量測定

藥學(xué)院，山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)，山東 泰安 271016

隨著人們生活水平的提高，食入的營養(yǎng)、熱量過剩，肥胖癥的發(fā)病率不斷升高。肥胖會引起高血壓、心臟病、糖尿病等多種疾病，嚴(yán)重影響人們身體健康[1-2]。明荷菊減肥茶是以荷葉、決明子、野菊花、澤瀉、制首烏、枸杞、山楂、薏米、大棗、烏龍茶為原料制備成的保健品，具有提神醒腦、降脂減肥的功效。野菊花、山楂、制首烏、決明子藥材中所含的黃酮具有很強的抗氧化性以及調(diào)節(jié)血脂的活性[3-6]，能很好地清除人體內(nèi)的自由基，起到調(diào)脂減肥的作用；荷葉和枸杞藥材中所含的生物堿具有降脂減肥的功效[7-8]。因此，本研究采用紫外分光光度法建立了明荷菊減肥茶中總黃酮和總生物堿含量的測定方法，以期為明荷菊減肥茶中有效成分的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與儀器

荷葉、決明子、野菊花、澤瀉、制首烏、枸杞、山楂藥材均購于泰安金泰聯(lián)藥店，薏米、大棗、烏龍茶均為市售。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(含量>98%，批號：171109)購于上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品(含量>98%，批號：CY20180205)購于楊凌慈緣生物技術(shù)有限公司。實驗所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

759S系列紫外可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)，F(xiàn)A505N型電子分析天平(上海菁海儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 明荷菊減肥茶的制備

減肥茶原料比例為荷葉∶決明子∶野菊花∶澤瀉∶制首烏∶枸杞∶山楂∶薏米∶大棗∶烏龍茶=10∶10∶10∶10∶5∶5∶5∶5∶10∶40。將荷葉、決明子、澤瀉、制首烏、野菊花、山楂混合，用70%乙醇提取2次，每次1.5 h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得粗粉。將薏米、枸杞、大棗加水煎煮2次，每次1 h，過濾，合并濾液，濾液噴霧干燥得粗粉。將烏龍茶粉碎過40目篩。將所有粉末混合均勻，制成茶包，每包重9 g，然后輻射消毒，制得減肥茶。

2.2 總黃酮含量測定

2.2.1對照品溶液的制備

精密稱定蘆丁對照品23.75 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，得對照品儲備液(每1.0 mL中含蘆丁0.95 mg)。精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(每1.0 mL中含蘆丁0.19 mg)。

2.2.2供試品溶液的制備

稱取減肥茶0.50 g，精密稱定，加入50%乙醇150 mL，稱重，超聲處理30 min，補足減失的重量，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3測定波長的選擇

精密吸取蘆丁對照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min；另同時吸取對照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，分別置25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，分別作空白對照溶液，采用紫外-可見分光光度法，在200～600 nm區(qū)間掃描吸收曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試品溶液在510 nm處有最大吸收，與蘆丁對照品溶液吸收曲線相似，故選用510 nm為測定波長。

2.2.4方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置25 mL量瓶中，依“2.2.3”項下方法測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程：A = 0.012 71C +0.142 4，r=0.999 7，線性范圍為7.6～45.6 μg·mL-1。

穩(wěn)定性實驗：精密吸取供試品溶液3.0 mL，按“2.2.3”項下方法測定，在顯色后10、20、30、40、50、60 min測定吸光度，RSD為1.13%，表明顯色后60 min內(nèi)穩(wěn)定。

精密度實驗：精密吸取供試品溶液3.0 mL，按“2.2.3”項下方法重復(fù)測定6次吸光度，RSD值為1.04%，表明精密度良好。

重復(fù)性實驗：取減肥茶0.50 g，平行制備6份供試品溶液，按“2.2.3”項下方法測定吸光度，計算含量。結(jié)果總黃酮含量平均值為3.03%，RSD為1.28%，表明重復(fù)性良好。

回收率實驗：取同一批次已知含量的減肥茶，按“2.2.1”項下制成供試品溶液，平行制備6份，分別精密加入對照品儲備液1.6 mL,按“2.2.3”項下方法測定吸光度，計算回收率，平均回收率為100.06%，RSD為1.88%。結(jié)果見表1。

表1 總黃酮回收率實驗結(jié)果(n=6)

2.2.5樣品測定

取減肥茶0.5 g，按“2.2.1”項下制成供試品溶液，按“2.2.3”項下方法測定吸光度，樣品平行測定3次，結(jié)果總黃酮含量平均值為3.03%。

2.3 總生物堿含量測定

2.3.1對照品溶液的制備

精密稱取荷葉堿對照品10.01 mg，加甲醇溶解并定容至25 mL量瓶，作為對照品儲備溶液(每1.0 mL中含荷葉堿0.40 mg)。

2.3.2供試品溶液的制備

取減肥茶約5.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶，精密加入甲醇120 mL，稱定重量，加熱回流2.5 h，放冷，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3.3測定波長的選擇

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1 mL，分別置于分液漏斗中，揮干甲醇，加入枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液(pH值4.5)5.0 mL，加入溴甲酚綠溶液2.0 mL，搖勻，以三氯甲烷10 mL萃取，取萃取液，以隨行試劑為空白，采用紫外可見分光光度法，在200～700 nm區(qū)間掃描吸收曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試品溶液和對照品溶液在415 nm處有最大吸收，選定為測定波長。

2.3.4方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.2 mL，分別置于分液漏斗中，揮干甲醇，依“2.3.3”項下方法測定吸光度。以荷葉堿的量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程為Y=0.014 075X-0.022 5(r=0.999 2)，表明荷葉堿在19.24～57.72 μg范圍內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗：精密量取供試品溶液2.0 mL，照“2.3.3”項下方法操作，在室溫下每隔1 h測定，結(jié)果樣品在5 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.37%。

精密度試驗：取同一供試品溶液2.0 mL，照“2.3.3”項下方法操作，連續(xù)測定6次，吸光度的RSD為1.03%，表明儀器的精密度良好。

重復(fù)性實驗：取減肥茶，平行制備6份供試品溶液，照“2.3.3”項下方法操作，計算含量，結(jié)果為3.12%，RSD為1.81%，表明重復(fù)性良好。

回收率實驗：取同一批次已知含量的減肥茶2.5 g，精密加入對照品溶液2.6 mL，按“2.3.2”項下制成供試品溶液，平行制備6份，按“2.3.3”項下方法測定吸光度，計算回收率，平均回收率為97.37%，RSD為2.09%。結(jié)果見表2。

表2 總生物堿回收率實驗結(jié)果(n=6)

2.3.5樣品測定

取減肥茶5.0 g，按“2.3.2”項下制成供試品溶液，按“2.3.3”項下方法測定吸光度，樣品平行測定3次，結(jié)果總生物堿含量為0.042%。

3 討 論

本研究在明荷菊減肥茶的制備過程中，采用將荷葉、決明子、澤瀉、制首烏、野菊花、山楂用70%乙醇合并提取的方法，利用了黃酮和生物堿易溶于有機溶劑的特點，此提取方法簡便易行，黃酮和生物堿的提取率高。

在總黃酮的含量測定中，本實驗比較了4種不同的顯色試劑NaNO2-Al(NO3)3-NaOH、KOH、NaBH4、AlCl3，實驗結(jié)果顯示Al(NO3)3絡(luò)合法的測定結(jié)果相對于其他方法準(zhǔn)確度高，是測定明荷菊減肥茶中總黃酮含量的有效方法。在總生物堿的含量中，本實驗采用酸性染料比色法，相比紫外薄層層析法、滴定法等，該法靈敏度高，操作簡便，重現(xiàn)性好。

在明荷菊減肥茶總黃酮和總生物堿的含量測定中，發(fā)現(xiàn)總黃酮的含量相對較高，而總生物堿的含量相對較低。本方法簡單、快速、準(zhǔn)確，易于推廣，故該方法可作為減肥茶類保健食品的質(zhì)量評價的方法之一。