不同濃度理脾復(fù)方制劑對(duì)厭食大鼠胃腸動(dòng)力的影響

1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，貴州 貴陽(yáng) 550002； 2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550001

小兒厭食癥是指外消化道和全身性器質(zhì)性病變，表現(xiàn)為較長(zhǎng)時(shí)間的食欲減少或消失，食量減少甚至拒食，是小兒常見(jiàn)癥[1]。文獻(xiàn)報(bào)道嬰兒和學(xué)齡前兒童厭惡進(jìn)食問(wèn)題的發(fā)生率約為 12%～34%，以 1～6 歲兒童多見(jiàn)，約占兒童疾病的 40%以上，城市發(fā)病率高于農(nóng)村，獨(dú)生子女發(fā)病率更高[2]。食物攝入、消化、吸收與胃對(duì)食物排空、小腸對(duì)食物推進(jìn)因素明顯相關(guān)，若胃排空、小腸推進(jìn)力不足，可通過(guò)影響食物吸收、排泄進(jìn)而影響食物攝入，發(fā)生食欲食量減少，或厭食等。西醫(yī)治療厭食以促進(jìn)胃腸動(dòng)力、助消化、微生態(tài)制劑對(duì)癥治療為主。中醫(yī)認(rèn)為厭食主要是脾運(yùn)失健所致，故以健脾助運(yùn)為主。筆者導(dǎo)師為第六批全國(guó)老中醫(yī)藥專家學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)繼承指導(dǎo)教師，師承國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)黃建業(yè)教授，凝練形成黃老治療厭食經(jīng)驗(yàn)方“運(yùn)脾散”，開展相關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)運(yùn)脾散可通過(guò)健脾助運(yùn)，恢復(fù)胃腸氣機(jī)轉(zhuǎn)樞治愈厭食，總有效率為95.6%[3]，其可改善小腸吸收功能[4]、降低厭食大鼠下丘腦和外周血漿CCK-8[5]，顯示運(yùn)脾散治療厭食可能是通過(guò)影響胃腸吸收、食欲中樞的調(diào)節(jié)作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。為改善口感，方便患兒服用，導(dǎo)師對(duì)運(yùn)脾散劑型改革，形成的運(yùn)脾顆粒制劑(即“理脾復(fù)方制劑”顆粒)分別獲院內(nèi)制劑(黔藥制字Z20130006)與國(guó)家發(fā)明專利(ZL 2013 10127415.0)，成為導(dǎo)師所在醫(yī)院治療厭食主要中藥制劑。為進(jìn)一步探究理脾復(fù)方制劑對(duì)胃腸動(dòng)力影響、尋找最佳藥物濃度，現(xiàn)將開展本實(shí)驗(yàn)研究總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD幼齡(40～45d齡)大鼠SPF級(jí)72只(雌雄各半)，質(zhì)量(65±10)g，由貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[許可證號(hào)：SCXK(湘)2014-0011]。

1.1.2 藥物與制備 理脾復(fù)方制劑制備(蒼術(shù)、白術(shù)、茯苓、薏苡仁各10 g，山藥、陳皮、枳殼、神曲、甘草各6 g，本劑量為臨床3歲兒童用量)參照陳大業(yè)[6-7]對(duì)運(yùn)脾顆粒提取、收縮和干燥工藝方法，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院完成。為尋找最佳藥物劑量濃度對(duì)胃腸動(dòng)力的影響，本實(shí)驗(yàn)將理脾復(fù)方制劑設(shè)為低、中、高劑量3個(gè)組，上述劑量為中劑量組，高于其1倍為高劑量組，低于其1/2倍為低劑量組，按照人和鼠給藥劑量換算公式[8]，分別計(jì)算出理脾復(fù)方制劑低、中、高劑量組大鼠給藥量為：0.02 mL/g、0.04 mL/g、0.08 mL/g。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑備制 采用碳末灌胃法[9-10]檢測(cè)胃腸動(dòng)力。參照王繼芳方法制備[11]300 mL約300 g碳末半固體糊狀物，置4 ℃冰箱冷藏備用，使用2 h前恢復(fù)至室溫。羧甲基纖維素鈉為北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)20200704。

1.1.4 特質(zhì)飼料制備 采用汪受傳病因模擬法[12]對(duì)大鼠造模特質(zhì)飼料進(jìn)行制備。實(shí)驗(yàn)前將奶粉、魚松、豆粉、玉米粉、白糖、鮮雞蛋、鮮肥肉，按1∶1∶2∶1∶1∶1.8∶2比例配制, 攪拌勻后加水做成小餅干, 用電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱烘干后備用。

2 方法

2.1 造模方法 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，雌雄各半，隨機(jī)分正常A組12只、模型B組60只，A組給予常規(guī)飼料(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)、B組予特制飼料喂養(yǎng)，均在每天上午9時(shí)給大鼠投食及提供飲水,連續(xù)喂養(yǎng) 14 d，記錄大鼠攝食量、體質(zhì)量、精神轉(zhuǎn)態(tài)等，當(dāng)B組大鼠平均攝食量低于B組20%～30%、體質(zhì)量低于10%～15%以內(nèi)，表明造模成功[12]。

2.2 分組與給藥 B組造模成功后雌雄各半，隨機(jī)分生理鹽水C組、理脾復(fù)方制劑低、中、高劑量組(D、E、F組)，每組12只。A、B組為空白、模型對(duì)照組，正常飼料與水喂養(yǎng)，不予藥物干預(yù)；C、D、E、F組給藥量分別為0.01 mL/g生理鹽水、理脾復(fù)方制劑低、中、高劑量，連續(xù)灌胃干預(yù)7d，每日1次。

2.3 胃排空率檢測(cè) 采用碳末灌胃法。大鼠在第7天末次灌胃后，禁食不禁水24 h，用灌胃器抽取碳末半固體糊狀物，1.5 mL/100g，稱重后標(biāo)記為半固體糊重量，給大鼠灌胃，30 min 后用10%水合氯醛按0.3 mL/100 g腹腔麻醉，沿腹中線剖開大鼠腹腔，找出胃，用細(xì)線結(jié)扎胃賁門和幽門，防止胃內(nèi)容物流出，取出胃并用濾紙吸干表面水分后，稱重標(biāo)記為胃全重；將胃剪開，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，再用濾紙吸干胃表面水分，稱重標(biāo)記為胃凈重。胃排空率=[1-(胃全重-胃凈重)/半固體糊重量]×100%，記錄每只大鼠胃排空率。

2.4 小腸推進(jìn)率檢測(cè) 取胃后迅速分離腸系膜，取出小腸，直鋪于白紙上，量取自幽門括約肌至炭糊到達(dá)處為活性炭推進(jìn)距離L2，量取自幽門括約肌至回腸末端的距離為小腸全長(zhǎng)L1，小腸推進(jìn)率(%)=L2/L1×100 %，記錄每只大鼠小腸推進(jìn)率。

3 結(jié)果

3.1 攝食量、體質(zhì)量變化

3.1.1 造模后攝食量、體質(zhì)量變化 造模第7天各組大鼠攝食量低于A組21.71%、體質(zhì)量低于10.23%，表明造模成功；為觀察造模7 d 與14 d攝食量、體質(zhì)量的差異性，繼續(xù)造模14 d，攝食量、體質(zhì)量雖降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，顯示對(duì)厭食大鼠造模選擇7 d與14 d均可。見(jiàn)表1。

表1 造模后實(shí)驗(yàn)大鼠攝食量、體重變化

注：與A組相比，*P<0.05；造模7 d、14 d相比，*P>0.05。

3.1.2 干預(yù)治療后攝食量、體質(zhì)量變化 干預(yù)治療后與B組比較，攝食量D、E、F組均升高，但E組優(yōu)于其他組，第5天即顯效明顯(P<0.05)，F(xiàn)組第7天顯效，C組無(wú)差異性，對(duì)攝食量增加呈現(xiàn)E組>F組>D 組> C 組，中劑量組最好；體質(zhì)量C、D、E、F組顯著增加(P<0.01)，各組間無(wú)差異性。理脾復(fù)方制劑對(duì)攝食量、體質(zhì)量均有升高作用。見(jiàn)表2。

天數(shù)A組B組C組D組E組F組第1天111.00±3.24 164.07±9.96 80.12±2.13121.86±7.19 79.26±2.11 143.00±11.21??82.47±2.46 141.46±11.37??84.54±2.53 137.48±12.98??79.16±2.09 143.79±12.79??第3天 114.71±3.36 177.89±14.16 79.20±2.10 134.58±10.45 81.12±2.18 163.73±14.10??86.80±2.78 159.41±11.57??88.50±2.82 163.06±16.36??83.65±2.51 162.13±12.42??第5天 116.50±3.40 183.24±14.05 82.65±2.43 137.34±11.12 80.57±2.21 176.74±17.36??90.10±2.97 171.66±10.11?? 92.70±3.06? 175.68±18.58??86.56±2.75 171.14±12.59??第7天 118.23±3.48 203.48±17.11 81.29±2.27 140.19±16.16 82.74±2.49 190.43±19.92?? 94.38±2.98? 188.23±13.92?? 97.71±3.12? 190.11±19.16?? 90.20±2.99? 187.42±17.20??

注：與B組比較，*P<0.05、**P<0.01。

3.2 胃排空率、小腸推進(jìn)率變化

3.2.1 胃排空率 與A組比較，B組胃排空率降低明顯(P<0.05)；干預(yù)治療后與B組比較，C、D組升高差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，E、F組明顯升高(P<0.05)，顯示理脾復(fù)方制劑中、高劑量組優(yōu)于低劑量組。

3.2.2 小腸推進(jìn)率 與A組比較，B組小腸推進(jìn)率降低明顯(P<0.05)；與B組比較，E組明顯升高(P<0.05)，其余各組間無(wú)差異性，顯示理脾復(fù)方制劑中劑量組優(yōu)于低、高劑量組。見(jiàn)表3。

表3 各組實(shí)驗(yàn)大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率的影響

注：與A組比較，△P<0.05；與B組比較，*P<0.05。

4 討論

小兒厭食癥是指小兒較長(zhǎng)期的食欲不振，見(jiàn)食不貪，甚則拒食的一種病證；病程在1月以上，多見(jiàn)1～6歲小兒。其發(fā)生多由喂養(yǎng)不當(dāng)、他病傷脾、先天不足等因素引起，主要病機(jī)為脾運(yùn)失健。長(zhǎng)期厭食可因食物攝入不足或單一，水谷精微物質(zhì)化生不足，臟腑失養(yǎng)，致抵抗力下降，故厭食患兒多有慢性腹瀉、多汗、易感冒等肺脾兩虛體質(zhì)特點(diǎn)，易發(fā)生反復(fù)呼吸道感染、貧血、疳證、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等疾病，因此對(duì)厭食的防治仍是目前研究的熱點(diǎn)之一。

《靈樞·脈度》曰：“脾氣通于口，脾和則口能知五谷矣”，“飲入于胃,游溢精氣,上輸于脾,脾氣散精,上歸于肺,通調(diào)水道,下輸膀胱。水精四和,五經(jīng)并行”(《內(nèi)經(jīng)·經(jīng)脈別論》)，可見(jiàn)脾運(yùn)胃納功能是水谷正常納入、吸收以及精微物質(zhì)化生的基礎(chǔ)和保障。小兒脾常不足，乳食不知自節(jié)，如過(guò)食肥甘、煎炸、高糖高蛋白高熱量之品，或家長(zhǎng)片面追求高營(yíng)養(yǎng)飲食攝入，超越脾胃運(yùn)化能力，脾運(yùn)胃納失調(diào)則食欲食量減少，易發(fā)生厭食。厭食治療遵循“脾貴在運(yùn)不在補(bǔ)”、以恢復(fù)脾運(yùn)胃納功能為主。導(dǎo)師應(yīng)用理脾復(fù)方制劑治愈厭食正是通過(guò)其健脾助運(yùn)功能實(shí)現(xiàn)的。方中君藥蒼術(shù)微苦，氣味芳香而悅胃，性溫燥而醒脾運(yùn)，善燥濕健脾，其順應(yīng)了脾喜燥惡濕、香先入脾的特性，故蒼術(shù)為運(yùn)脾之要藥；導(dǎo)師前期研究顯示蒼術(shù)是黃建業(yè)教授治療厭食用藥頻次最高的藥物[13]，相關(guān)文獻(xiàn)也證實(shí)蒼術(shù)提取物中含有β-桉葉油醇、蒼術(shù)素和茅術(shù)醇等揮發(fā)油成分，能明顯改善胃腸動(dòng)力障礙[14]，其芳香揮發(fā)油成分能刺激胃腸蠕動(dòng)，增強(qiáng)胃腸動(dòng)力[15-17]；臣藥白術(shù)性溫微苦，歸經(jīng)脾胃，其能有效促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)[18-20]與其內(nèi)含的白術(shù)內(nèi)酯I作用分不開。本研究結(jié)果顯示以蒼術(shù)為君藥、白術(shù)為臣藥的理脾復(fù)方制劑，能明顯促進(jìn)胃排空率、小腸推進(jìn)率。

筆者對(duì)近20年厭食實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，厭食大鼠造模多采用較成熟的汪氏病因模擬法[12]，用高蛋白高糖等特制飼料來(lái)造厭食大鼠模型，是基于“飲食自倍，脾胃乃傷”理論，故本實(shí)驗(yàn)采用汪氏病因造模法與厭食發(fā)生的主要病因吻合；本研究應(yīng)用該法造模7 d后，大鼠在攝食量、體質(zhì)量下降明顯(表1)。應(yīng)用理脾復(fù)方制劑干預(yù)治療后，攝食量、體質(zhì)量恢復(fù)明顯(表2)，顯示理脾復(fù)方制劑能有效改善食欲食量，其中以中劑量組最佳。

胃排空、小腸推進(jìn)的速度與胃腸運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)弱有關(guān)，文獻(xiàn)報(bào)道常用碳末灌胃法檢測(cè)胃腸動(dòng)力[9-10]，胃排空、小腸推進(jìn)率數(shù)據(jù)越大，說(shuō)明胃腸運(yùn)動(dòng)越快，胃腸蠕動(dòng)越強(qiáng)。本研究顯示厭食大鼠胃排空率、小腸進(jìn)率明顯降低，表明厭食大鼠存在胃腸蠕動(dòng)減慢、胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙的表現(xiàn)；干預(yù)治療后理脾復(fù)方制劑能促進(jìn)胃排空率、小腸推進(jìn)率(表3)，以中劑量組最明顯。提示理脾復(fù)方制劑治療厭食可能是通過(guò)促進(jìn)胃排空率、小腸推進(jìn)率，增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)實(shí)現(xiàn)的，提高胃排空率、小腸推進(jìn)率可能是理脾復(fù)方制劑治療厭食的作用靶點(diǎn)之一。