EBV與TLRs信號(hào)通路相互作用機(jī)制研究進(jìn)展

張旭娟, 趙鵬翔*, YAO Mawulikplimi Adzavon, 李秦劍, 謝 飛

1.北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院, 北京 100124;2.陸軍軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院, 全軍血液病中心, 重慶 400037

EBV為人類皰疹病毒4型(human herpesvirus 4，HHV-4)，屬于γ皰疹病毒亞科，于1964年由Epstein與Barr研究非洲兒童伯基特(Burkitt)淋巴瘤時(shí)發(fā)現(xiàn)[1]。成熟的EBV病毒顆粒呈球形，直徑約為180 nm，基因組為雙鏈線性DNA，長(zhǎng)度約為172 kb，編碼基因約85個(gè)[2]。EBV在全球范圍內(nèi)的人群感染率超過了90%[3]，且感染人群主要為青少年。大多數(shù)原發(fā)性感染起初并無癥狀，但若于青春期或成年期感染，則更容易引發(fā)傳染性單核細(xì)胞增多癥[4]。原發(fā)性感染后，EBV會(huì)在B細(xì)胞中建立潛伏感染，并通過一系列的調(diào)控來逃避宿主TLRs等免疫系統(tǒng)的識(shí)別與免疫作用，在特定條件下，EBV被激活進(jìn)入裂解感染期，產(chǎn)生子代病毒顆粒從而引發(fā)疾病。此外，EBV作為第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的與腫瘤相關(guān)的病毒，與眾多腫瘤的發(fā)生有關(guān)，如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌、宮頸癌和乳腺癌等[5]。然而，EBV也是溶瘤病毒。促癌和溶瘤這2種截然不同的作用主要是由EBV不同的侵染狀態(tài)所決定的，而TLRs信號(hào)通路能夠影響EBV侵染狀態(tài)從而影響EBV的生物學(xué)作用。

TLRs作為固有免疫中模式識(shí)別受體之一，一方面能夠識(shí)別EBV并控制病毒的感染，但TLRs的異常激活也會(huì)促進(jìn)EBV的感染效率及其部分蛋白的表達(dá)；另一方面，不同感染狀態(tài)的EBV對(duì)TLRs表達(dá)水平的調(diào)控作用也各不相同。本課題組在眼眶炎性假瘤(idiopathic orbital inflammatory pseudotumor，IOIP)的臨床樣品以及EBV+的B淋巴瘤細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)EBV與TLRs的活化存在潛在聯(lián)系[6,7]，提示深入研究TLRs與EBV的相互作用機(jī)理，將對(duì)臨床治療及實(shí)驗(yàn)研究有所助益。基于此，本文對(duì)EBV與TLRs信號(hào)通路之間相互作用的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，以期為開發(fā)新的EBV治療靶點(diǎn)以及完善TLRs激動(dòng)劑的臨床方案提供一定的參考。

1 EBV生活周期

EBV的原發(fā)性感染一般發(fā)生在口咽的唾液交換過程，宿主為B淋巴細(xì)胞和特定上皮細(xì)胞等。EBV通過糖蛋白gp350和B細(xì)胞表面受體CD21促進(jìn)EBV囊膜與細(xì)胞膜融合，使EBV外層基質(zhì)及核衣殼進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。核衣殼轉(zhuǎn)運(yùn)到核膜后，EBV DNA進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，激活γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16(γ interferon inducible protein 16，IFI16)下游的炎性小體通路以及DNA損傷反應(yīng)、ATM激酶信號(hào)通路。而EBV線性雙鏈在其末端重復(fù)序列TR的介導(dǎo)下進(jìn)行環(huán)化，進(jìn)而被宿主組蛋白識(shí)別修飾，建立穩(wěn)定的潛伏感染狀態(tài)，外界刺激或機(jī)體免疫力低下等條件會(huì)誘導(dǎo)EBV由潛伏期向裂解期轉(zhuǎn)化[8]。

1.1 潛伏感染

原發(fā)感染后的潛伏感染時(shí)期發(fā)生在記憶B細(xì)胞中，EBV通過一系列復(fù)雜的機(jī)制逃避宿主的免疫并在體內(nèi)長(zhǎng)期存在。該時(shí)期，EBV基因組通常是高度甲基化的，以環(huán)狀染色質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定存在于宿主細(xì)胞核內(nèi)，能夠利用宿主的DNA聚合酶隨宿主細(xì)胞周期進(jìn)行復(fù)制，并在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中可檢測(cè)到游離的雙鏈環(huán)狀病毒DNA[9]。潛伏感染主要分為4個(gè)階段，共表達(dá)近100個(gè)EB病毒基因和8種蛋白質(zhì)，這些潛伏基因包括6個(gè)EB病毒核衣殼抗原(EBV nuclear antigens，EBNAs)基因、2個(gè)潛伏膜蛋白(latent membrane proteins，LMPs)基因、EBV編碼的2種小的非聚腺苷?；疪NA(EBV encoded RNAs，EBERs)和限制性內(nèi)切酶BamHⅠ-A向右讀碼區(qū)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(BamHⅠ rightwards transcripts，BARTs)，其中僅EBNA-1和LMP-1在裂解感染期也表達(dá)。潛伏期相關(guān)基因相應(yīng)表達(dá)階段及其功能如表1所示，其中，LMP-1在潛伏期與裂解期均有表達(dá)，且作為病毒癌基因，越來越多的研究表明其與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、轉(zhuǎn)移和腫瘤的侵襲相關(guān)。與EBV相關(guān)的惡性腫瘤主要由被潛伏感染的細(xì)胞組成，并有EBV編碼的轉(zhuǎn)化蛋白和非編碼的RNA表達(dá)。

1.2 裂解感染

在某些情況下，如TGF-β的誘導(dǎo)、缺氧環(huán)境、DNA損傷或宿主記憶B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞的過程中發(fā)生的B細(xì)胞受體交聯(lián)等，EBV可能會(huì)重新活化進(jìn)入裂解復(fù)制階段產(chǎn)生大量感染性病毒顆粒，并經(jīng)口咽唾液在個(gè)體間傳播[28]。EBV在該階段的基因表達(dá)具有時(shí)序性，依次表達(dá)即刻早期基因(immediate-early genes，IE)、早期基因(early genes，E)和晚期基因(late genes，L)。首先轉(zhuǎn)錄的是即刻早期基因BZLF1和BRLF1，分別編碼轉(zhuǎn)錄因子Z(aka Z，ZTA，ZEBRA)和R蛋白(aka R，RTA)，Z和R與EBV DNA裂解復(fù)制起始點(diǎn)結(jié)合，反式激活啟動(dòng)子Zp(Z promoter)和Rp(R promoter)，觸發(fā)早期基因的表達(dá)，編碼病毒DNA復(fù)制所需的蛋白質(zhì)；隨著病毒基因組的復(fù)制，病毒晚期基因表達(dá)，并編碼病毒基因組包裝成感染性病毒顆粒所需的結(jié)構(gòu)蛋白，即衣殼蛋白、基質(zhì)蛋白、囊膜蛋白等。新包裝成的感染性病毒顆粒可通過胞吐或者在細(xì)胞裂解后釋放到細(xì)胞外。

表1 EBV潛伏感染期相關(guān)部分基因及其產(chǎn)物Table1 Some related genes and their products of EBV at latent infection stage.

圖1 已知能夠調(diào)控Zp和Rp轉(zhuǎn)錄的因子Fig.1 Factors known to play roles in regulating transcription of Zp and Rp.注：順式作用元件用灰色矩形表示，其對(duì)應(yīng)的反作用因子直接顯示在其上方，下方數(shù)字表示距離轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的堿基數(shù)目，其中轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為+1；YY1：轉(zhuǎn)錄因子Yin Yang-1；SP1/3：特異性蛋白1/3；SMADS：SMAD蛋白家族；MEF2D：肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2D；CREB：環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白；ATFs：激活應(yīng)激相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子；C/EBP：CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白；c-Jun：翼式轉(zhuǎn)錄因子；ZEB1/2：鋅指結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄因子1/2；EGR-1：早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1。

在整個(gè)EBV裂解周期中，BZLF1和BRLF1之間存在著復(fù)雜又緊密的聯(lián)系，它們的啟動(dòng)子序列中存在很多宿主轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控區(qū)域，受到嚴(yán)格的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控，目前已知的轉(zhuǎn)錄因子有：YY1、E2-2、JDP2、MEF-2D以及ZEB1/2等抑制Zp的轉(zhuǎn)錄；Sp1/Sp3、c-JUN/c-FOS、CREB/ATF/AP-1、SMAD以及C/EBP等激活Zp的轉(zhuǎn)錄[29]；YY1和ZEBs抑制Rp的轉(zhuǎn)錄；EBR1和Sp1/Sp3激活Rp的轉(zhuǎn)錄。上述轉(zhuǎn)錄因子及其作用元件如圖1所示。

2 TLRs

在機(jī)體抵抗病毒的過程中，先天性免疫系統(tǒng)發(fā)揮著重要作用，可通過多種模式識(shí)別受體系統(tǒng)識(shí)別病毒，而TLRs作為先天性免疫系統(tǒng)的重要組成成分，是首個(gè)被定義的跨膜模式識(shí)別受體系統(tǒng)[30]。其存在于多種進(jìn)化的生物中，能夠識(shí)別由微生物和內(nèi)源性組織產(chǎn)生的信號(hào)，即通過病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)和損傷相關(guān)分子模式(damage-associated molecular patterns，DAMPs)，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用。不同類型的TLRs在識(shí)別先天性免疫病原體方面具有不同的功能，統(tǒng)稱為TLR家族，在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)11種TLRs，其中，在人類中存在10種。先天免疫效應(yīng)細(xì)胞可表達(dá)這10種TLRs，每種都與特定的配體結(jié)合，其中，TLR2識(shí)別?；鞍?，TLR3識(shí)別雙鏈RNA，TLR4是脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)的受體，TLR5識(shí)別細(xì)菌鞭毛蛋白，TLR7/8、TLR13識(shí)別單鏈RNA，TLR9識(shí)別雙鏈DNA，TLR10、TLR11識(shí)別寄生蟲抑制蛋白樣分子[31]。

2.1 TLRs相關(guān)信號(hào)通路

TLRs介導(dǎo)的信號(hào)通路分為髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)依賴的信號(hào)通路和β-干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β，TRIF)依賴(或稱為MyD88非依賴)的信號(hào)通路，如TLR7/8/9屬于前者，TLR3屬于后者。MyD88依賴的信號(hào)通路中銜接蛋白MyD88招募下游的白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶(interleukin-1 receptor-associated kinases，IRAKs)，將信號(hào)傳遞至腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TNF receptor associated factor 6，TRAF6)，隨后募集并激活下游的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子激酶1(transforming growth factor activated kinase-1，TAK1)和NF-κB抑制蛋白激酶α/β/γ(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase α/β/γ，IKKα/β/γ)，促進(jìn)AP-1活化以及NF-κB介導(dǎo)的炎癥因子(如TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1α和IL-1β等)的表達(dá)[32,33]。TRIF依賴的信號(hào)通路中銜接蛋白TRIF招募下游的TRAF3，進(jìn)而激活TBK1和IKKε，促進(jìn)干擾素調(diào)節(jié)因子3/7(interferon regulatory factor 3/7，IRF3/7)所介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[34]。而Ⅰ型干擾素能夠使JAK-STAT等信號(hào)通路活化，表達(dá)大量抗病毒基因，從而抑制病毒的復(fù)制[35]。上述TLR信號(hào)通路如圖2所示。

2.2 TLRs激動(dòng)劑

TLRs激活介導(dǎo)產(chǎn)生的炎癥因子對(duì)機(jī)體有保護(hù)作用，其中大量研究證明其介導(dǎo)的腫瘤壞死因子具有抗癌作用，干擾素具有抗病毒作用；另有研究發(fā)現(xiàn)，人類免疫相關(guān)疾病中的TLRs表達(dá)異常升高，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的pDC細(xì)胞中TLR7的表達(dá)水平較高[37]。因此，TLRs激動(dòng)劑除了可用于治療各種病原微生物引起的疾病，還可能成為自身免疫相關(guān)疾病的治療藥物?，F(xiàn)階段，TLRs激動(dòng)劑，如TLR3激動(dòng)劑poly(I∶C)[38]，TLR7激動(dòng)劑R-848[39]、GS-9620[40]、852A[41]等，TLR9的激動(dòng)劑CpG[42]等，大多數(shù)可作為免疫佐劑應(yīng)用于臨床。TLRs除了能夠作用于免疫系統(tǒng)，也可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，如激活中樞小膠質(zhì)細(xì)胞的TLRs釋放IL-6等細(xì)胞因子，從而促進(jìn)腦缺血的神經(jīng)元存活，還能夠減少腦梗塞緩解腦血管疾病對(duì)大腦的損害[43]；TLRs的激活狀態(tài)可影響小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬能力，因此有望成為阿爾茨海默病免疫治療的潛在治療靶點(diǎn)[44]。

3 TLRs信號(hào)通路與EBV相互作用

TLRs作為模式識(shí)別受體中非常重要的一部分，可識(shí)別EBV并引發(fā)固有免疫，進(jìn)而在一定程度上控制病毒的感染并促進(jìn)在EBV潛伏感染狀態(tài)下B細(xì)胞的增殖；另一方面，越來越多的研究證明，EBV可能通過干擾TLRs的表達(dá)和功能，從而影響宿主免疫反應(yīng)，造成免疫逃逸與持續(xù)潛伏感染，但目前對(duì)于TLRs與EBV之間的具體相互作用機(jī)制仍不完全明確。

3.1 EBV對(duì)TLRs信號(hào)通路的調(diào)控

EBV可以通過一系列的途徑降低TLRs的表達(dá)、逃避宿主固有免疫，從而建立并維持體內(nèi)潛伏感染。人B細(xì)胞可表達(dá)高水平的TLR1、TLR6、TLR7、TLR9、TLR10，其中TLR7和TLR9的表達(dá)和功能與B細(xì)胞中EBV的關(guān)系較為密切。已有數(shù)據(jù)表明，EBV與TLR7、TLR9之間存在致病性串?dāng)_，EBV能夠影響或依賴TLR7、TLR9的表達(dá)，促進(jìn)宿主B細(xì)胞的存活[45]；與此同時(shí)，EBV通過抑制TLRs下游抗病毒因子的表達(dá)及功能而逃避宿主的免疫殺傷作用，由此可能引發(fā)B細(xì)胞功能障礙和免疫功能異常，從而引起一系列相關(guān)疾病。

EBV在不同的細(xì)胞中顯示出對(duì)TLRs具有不同的影響。研究表明，EBV能夠在體外感染纖維細(xì)胞并增加TLR7/9的mRNA表達(dá)水平[46]；EBV也能夠誘導(dǎo)外周單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中TLR7/8的表達(dá)，但卻抑制TLR7/8/9對(duì)PBMC的增殖作用，這一增殖抑制作用對(duì)于外周血富集B細(xì)胞更為明顯，且呈EBV劑量依賴性[47,48]；與此相悖，在幼稚B細(xì)胞中，EBV上調(diào)TLR7并下調(diào)TLR9的表達(dá)，使用TLR7激動(dòng)劑R837與EBV共培養(yǎng)后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)幼稚B細(xì)胞的增殖水平增加17倍[48]，說明在幼稚B細(xì)胞中EBV并不能像在PBMC及外周血富集B細(xì)胞中一樣發(fā)揮抑制TLR7及其促細(xì)胞增殖的能力。Wang等[49]在研究自免型疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)時(shí)發(fā)現(xiàn)，LMP2A可通過增強(qiáng)對(duì)TLR配體的反應(yīng)活性，促進(jìn)BCR/TLR通路對(duì)B細(xì)胞的自反應(yīng)激活。由此可見，在不同細(xì)胞中EBV對(duì)不同的TLRs組分表達(dá)水平的調(diào)控作用并不完全一樣。此外，EBV對(duì)TLRs的細(xì)胞增殖作用的影響也不盡相同，這可能是由于不同細(xì)胞中基因選擇性表達(dá)形成不同的免疫應(yīng)答機(jī)制，從而使EBV對(duì)TLRs的影響效應(yīng)也存在差異。

EBV除影響TLRs對(duì)細(xì)胞的增殖能力外，還可通過影響TLRs下游信號(hào)通路(如Ⅰ型干擾素、IRF-5/7以及NF-κB等)來干預(yù)宿主的免疫功能或抗病毒能力。EBV感染漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cells，pDCs)后能夠激活不成熟的pDCs，釋放受損性TNF-α，從而使機(jī)體無法啟動(dòng)完整的T細(xì)胞免疫[50]；EBV通過刺激pDCs誘導(dǎo)TLRs產(chǎn)生Ⅰ型干擾素，從而促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞和CD3 T細(xì)胞的活化，而此作用部分是由TLR9介導(dǎo)的[51]；EBV感染的B細(xì)胞中釋放的EBER，主要負(fù)責(zé)EBV免疫激活，誘導(dǎo)TLRs下游Ⅰ型IFN和促炎細(xì)胞因子的釋放，從而可能引發(fā)免疫病理性疾病[52]；Martin等[53]發(fā)現(xiàn)EBV能夠限制TLR7下游IRF-5對(duì)EBV建立持久感染的負(fù)作用；Dong等[54]的研究表明，在大多數(shù)EBV轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中，IRF-5啟動(dòng)子A區(qū)域存在高度甲基化，EBV編碼的蛋白BGLF4[55]以及BPLF1[56]都會(huì)抑制B細(xì)胞內(nèi)TLRs介導(dǎo)的NF-κB活化，從而使EBV通過抑制TLRs下游信號(hào)通路抗病毒的能力而逃脫宿主固有免疫；不僅如此，EBV還可介導(dǎo)T細(xì)胞抑制因子B7-H1和ICOS-L的表達(dá)上調(diào)[51]。以上研究均說明EBV能夠通過TLRs及其下游信號(hào)通路間接或直接影響宿主或機(jī)體對(duì)EBV的免疫作用，進(jìn)而維持自身的持續(xù)感染狀態(tài)。

在潛伏、裂解等不同感染時(shí)期，EBV基因及其產(chǎn)物的表達(dá)水平和功能各不相同，在EBV不同感染時(shí)期的B細(xì)胞中，TLRs的表達(dá)水平也具有差異性。在潛伏感染期中，隨著潛伏基因的表達(dá)，TLR6、TLR7、TLR9表達(dá)不變，TLR1和TLR10表達(dá)下降；但在被裂解感染的B細(xì)胞中，TLR1、TLR6、TLR7、TLR9、TLR10的mRNA表達(dá)水平均下降，尤其TLR9下降最為顯著[57]。造成TLR9被抑制的原因，目前主要集中在以下3個(gè)方面：①EBV表達(dá)的LMP1可通過激活NF-κB下調(diào)TLR9的轉(zhuǎn)錄[58]；②B細(xì)胞中EBV重新激活后，裂解期蛋白BGLF5隨著病毒的再次活化下調(diào)TLR9的mRNA以及蛋白的表達(dá)[57]；③然而也有研究者指出，EBV裂解感染后期表達(dá)的蛋白BPLF1能夠發(fā)揮去泛素化酶的作用，從而抑制TLRs介導(dǎo)的NF-κB在TRAF6信號(hào)通路中的激活[56]。除B細(xì)胞外，EBV在體外感染硬皮病SSc纖維細(xì)胞時(shí)會(huì)上調(diào)TLR7/9及IRF5/7的mRNA表達(dá)水平，但在細(xì)胞內(nèi)無EBV時(shí)使用TLR激動(dòng)劑并沒有引發(fā)TGF-β響應(yīng)，由此推測(cè)，EBV在硬皮病SSc纖維細(xì)胞中可能作為一種弱誘導(dǎo)刺激產(chǎn)生了不完全的IFN信號(hào)[47]。可見，EBV潛伏期和裂解期對(duì)宿主固有免疫TLRs的調(diào)控作用并不一致。在EBV的活化過程中，對(duì)TLR9的影響格外顯著，這可能是由于在宿主抵抗病毒時(shí)，TLR9識(shí)別進(jìn)入內(nèi)涵體中的病毒雙鏈DNA，從而能夠在病毒復(fù)制過程中發(fā)揮出更強(qiáng)大的抗病毒作用。

最新研究還發(fā)現(xiàn)，EBV病毒蛋白可通過TLRs介導(dǎo)的信號(hào)誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞使IL-6、IL-8、MCP-1分泌增加而引發(fā)炎癥，通過誘導(dǎo)NO合酶，合成NO以誘導(dǎo)視網(wǎng)膜細(xì)胞壞死和死亡[59]，這一發(fā)現(xiàn)為了解EBV誘導(dǎo)炎癥和細(xì)胞死亡的免疫機(jī)制提供了重要信息，并有助于設(shè)計(jì)新的免疫治療方法來治療由EBV引起的眼部感染。

在長(zhǎng)期的進(jìn)化中，EBV與宿主固有免疫系統(tǒng)的相互作用可能使EBV已經(jīng)發(fā)展出一系列類似挾持宿主以逃脫宿主的固有免疫的機(jī)制，但仍有待于進(jìn)一步探究與闡明。

3.2 TLRs信號(hào)通路對(duì)EBV的不同效應(yīng)機(jī)制

TLRs除了參與固有免疫過程限制EBV裂解感染，其他具體作用機(jī)制尚不明確，不同的TLRs可能發(fā)揮了不同的作用。TLR7/8激動(dòng)劑R848、TLR9的激動(dòng)劑CpG在CD40L的共同刺激下會(huì)顯著增加EBV對(duì)PBMC或者富集后B細(xì)胞的感染效率[60]。TLR7的異常激活可增加EBV LMP1的表達(dá)，TLR3、TLR 9激活產(chǎn)生的IRF7也參與了此過程[61]。TLR9的激活會(huì)抑制EBV裂解期基因BZLF1及其蛋白ZEBRA的表達(dá)，且這種抑制作用是不需要蛋白質(zhì)從頭合成介導(dǎo)的，但需要功能性IRAK4、TLR9和MyD88蛋白的參與[62]；TLR9觸發(fā)的BZLF1的組蛋白修飾也是抑制EBV裂解感染的重要因素，但NF-κB或其他已知的TLR9通路可能都不是TLR9介導(dǎo)抑制EBV的關(guān)鍵[63]。

TLRs下游信號(hào)通路中干擾素調(diào)節(jié)因子IRF-7與EBV介導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞體外及體內(nèi)轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。近期研究發(fā)現(xiàn)IRF-7的下調(diào)會(huì)導(dǎo)致EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制，敲除IRF-7后細(xì)胞增殖水平降低，凋亡率上升，而當(dāng)外源性表達(dá)IRF-7的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入后即可恢復(fù)病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長(zhǎng)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)IRF-7的下調(diào)會(huì)導(dǎo)致EBV的LMP1表達(dá)水平降低[64]。這表明IRF-7可能是EBV感染細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一個(gè)因素，并可能成為治療EBV介導(dǎo)的瘤變的潛在靶點(diǎn)。

此外，還有研究證實(shí)TLR7/9在小鼠內(nèi)皮細(xì)胞中參與識(shí)別了EBV DNA，但也因此觸發(fā)IL-17A的釋放引發(fā)炎癥[65]。由此可見，TLRs在識(shí)別控制EBV感染的同時(shí)對(duì)自身可能會(huì)造成如自身性免疫疾病等負(fù)面影響。這對(duì)評(píng)估TLR7/9在EBV陽(yáng)性的自身免疫疾病的患者中的作用具有一定的指導(dǎo)意義。

雖然，TLR9觸發(fā)能夠抑制B淋巴瘤細(xì)胞中EBV向裂解感染的轉(zhuǎn)化，但也有研究發(fā)現(xiàn)在各種B淋巴瘤細(xì)胞中EBV的狀態(tài)并不決定細(xì)胞對(duì)TLR9所觸發(fā)的反應(yīng)。使用TLR9的配體CpG2006激活TLR9后，能夠引發(fā)EBV宿主B淋巴瘤細(xì)胞的死亡，這一過程的發(fā)生依賴于半胱天冬酶，但與EBV及細(xì)胞周期均無關(guān)[66]。這一結(jié)果提示，B淋巴瘤細(xì)胞中TLR9的激活雖然能控制EBV的裂解性感染，但也可能會(huì)對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面?zhèn)Α?/p>

目前，TLRs多態(tài)性與EBV易感性的相關(guān)性研究，主要集中在TLR1、TLR2、TLR4、TLR7、TLR9的多態(tài)性位點(diǎn)，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明已報(bào)道的TLRs的多態(tài)性位點(diǎn)，如TLR1的rs5743551、rs5743611，TLR2的rs3804099、rs3804100[67]，TLR4的rs1927911等，TLR6的rs3775073等，TLR7的rs2897827，TLR8的rs3764879、rs3764880，TLR9的rs187084、rs352140[68]等，與EBV易感性并無顯著相關(guān)性[69～72]。由此可見，TLRs的基因多態(tài)性并不是造成EBV易感與否的主要原因，相關(guān)機(jī)理探究可考慮嘗試TLRs多態(tài)性之外的其他因素。

本課題組對(duì)于眼眶炎性假瘤(idiopathic orbital inflammatory pseudotumor，IOIP)研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，表達(dá)譜芯片測(cè)序與多組學(xué)分析結(jié)果均顯示TLRs通路呈活化狀態(tài)(數(shù)據(jù)未發(fā)表)，同時(shí)在臨床樣品中檢測(cè)到了EBV-DNA和EBV相關(guān)抗原，提示IOIP的發(fā)病機(jī)理可能與EBV感染有關(guān)[6]，且IOIP患者可能成為EBV誘發(fā)相關(guān)疾病的高危人群，需密切關(guān)注其EBV的感染狀態(tài)。

4 展望

作為全球范圍內(nèi)高感染率的病毒，對(duì)EBV的研究越來越深入，研究方向大致分為以下4個(gè)方面：①EBV各成分如基因、蛋白以及一些小RNA的功能研究；②EBV與宿主之間的相互調(diào)控關(guān)系；③EBV的免疫逃逸機(jī)制；④EBV在相關(guān)疾病的發(fā)生及發(fā)展中的作用。

目前，有關(guān)EBV大部分研究集中于對(duì)其生活周期的調(diào)控，但宿主固有免疫系統(tǒng)與EBV之間的相互作用關(guān)系尚不完全明確，尤其是TLRs信號(hào)通路與EBV之間的相互影響遠(yuǎn)比目前所了解到的更為復(fù)雜。TLR7/8/9具有交叉網(wǎng)絡(luò)的下游通路，盡管大部分研究著重探索了TLR9(識(shí)別DNA)，但TLR7/8很有可能與EBV也存在潛在的相互作用。部分B細(xì)胞抗原受體(B cell antigen receptor，BCR)激動(dòng)劑已經(jīng)證實(shí)能夠激活潛伏狀態(tài)的EBV病毒，而TLR7/8/9的配體作為常用的免疫激動(dòng)劑和抗體佐劑，在激活天然免疫的同時(shí)，是否會(huì)對(duì)大量人群中所攜帶的潛伏狀態(tài)的EBV的生活周期產(chǎn)生影響，可能是值得探討的重要問題。目前，HIV治療中已經(jīng)應(yīng)用shock-and-kill的新方法，有望徹底治愈HIV感染，該方法應(yīng)用免疫激動(dòng)劑，將T細(xì)胞中潛伏的HIV激活出來，從而再通過免疫系統(tǒng)將其清除。以這種方法為線索，對(duì)于正常人群中已經(jīng)處于高概率潛伏狀態(tài)的EBV和巨細(xì)胞病毒等，通過外源激活的方法，徹底清除潛伏病毒，是將來可能的治療策略。而EBV等潛伏病毒，具有整合在宿主DNA，并且持續(xù)表達(dá)多種潛伏蛋白的特點(diǎn)，這些病毒組分通常也是造成細(xì)胞永生化和腫瘤生成的重要因素，因此，去除潛伏的EBV感染可能是未來治愈諸如伯基特淋巴瘤等惡性腫瘤的可能手段。EBV各時(shí)期基因、蛋白與TLRs相關(guān)通路的作用關(guān)系及關(guān)鍵分子的研究?jī)H處于初步階段；此外，宿主對(duì)EBV周期調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄翻譯的影響、EBV在宿主內(nèi)維持感染以及在宿主間的轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制，均有待于進(jìn)一步研究。深入了解TLRs與EBV之間的限制關(guān)系有助于進(jìn)一步理解EBV的生活周期，對(duì)于闡明EBV相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)理以及篩選針對(duì)EBV的新型抗病毒疫苗和治療手段也具有重要意義，并且相關(guān)研究可能提示EBV參與的TLRs相關(guān)性自身性免疫疾病的新型治療靶點(diǎn)。

綜上所述，目前有關(guān)EBV與宿主之間相互作用的途徑和調(diào)控機(jī)制及其致病機(jī)制的相關(guān)研究并不詳盡，從而限制了抗EBV藥物的研發(fā)及臨床治療EBV相關(guān)疾病的推進(jìn)。因此，深入理解EBV與宿主細(xì)胞固有免疫TLRs信號(hào)通路之間錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系，對(duì)于闡明EBV相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)理和EBV相關(guān)疾病的診斷、新型治療方案的制定，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。