不同方法提取潁半夏揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析*

彭加兵，嚴(yán)安定，陳昆鵬，張治靜，沙曼琪，崔 斌

（安徽醫(yī)科大學(xué)附屬阜陽醫(yī)院藥劑科，安徽 阜陽 236000）

半夏Pinelliae ternata（Thunb.）Breit.屬天南星科，塊莖入藥，具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié)功效，用于濕痰寒痰、咳喘痰多、痰飲眩悸、風(fēng)痰眩暈、痰厥頭痛、嘔吐反胃、胸脘痞悶、梅核氣，外治癰腫痰核［1］。半夏具有抗炎、抗菌、抗腫瘤作用，以及平喘、鎮(zhèn)咳、祛痰、止嘔、抗?jié)?、抗腹瀉、抑制胰蛋白酶、調(diào)節(jié)胃腸功能、調(diào)血脂、鎮(zhèn)靜催眠、護(hù)肝等作用［2-4］。其主要化學(xué)成分有揮發(fā)油、生物堿、淀粉、氨基酸、甾醇類、芳香族成分、有機酸類、蛋白、鞣質(zhì)、核苷、黃酮類及多種微量元素等［5-8］。潁半夏因產(chǎn)于安徽古潁州府（現(xiàn)阜陽地區(qū)阜南縣、潁上縣）一帶而得名，為半夏的道地品種。目前，有關(guān)潁半夏的研究集中在藥理作用、質(zhì)量評價、產(chǎn)地加工方面［9-12］，其揮發(fā)油化學(xué)成分的相關(guān)研究尚未見報道。本研究中采用水蒸氣蒸餾法、同時蒸餾萃取法和乙醚提取法提取潁半夏揮發(fā)油及其成分，并比較其差異，為進(jìn)一步認(rèn)識和利用該植物資源提供依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：7890A-5975C型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；NHW型電熱套（河南博愛科技有限公司）；MP31001型電子天平（上海舜宇恒平科技儀器有限公司）。

試藥：潁半夏塊莖，2017年12月采集于安徽省潁上縣夏橋鎮(zhèn)，由安徽醫(yī)科大學(xué)附屬阜陽醫(yī)院嚴(yán)安定副主任中藥師鑒定為正品；乙醚、無水硫酸鈉、丙酮均為分析純，均購于西隴化工股份有限公司；水為超純水。

圖1 同時蒸餾萃取法提取揮發(fā)油成分總離子流色譜圖

圖2 乙醚提取法提取揮發(fā)油成分總離子流色譜圖

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取

水蒸氣蒸餾法：稱取搗碎潁半夏干燥塊莖300 g，置1 000 mL燒瓶中，加入超純水500 mL，加熱蒸餾10 h，索氏提取器中未見油狀液體。

同時蒸餾萃取法：稱取搗碎潁半夏干燥塊莖300 g，置1 000 mL燒瓶中，加入超純水500 mL，用同時蒸餾萃取裝置，即水蒸氣蒸餾、乙醚萃取10 h，乙醚蒸去后得淡黃色透明液體，有香味，即為揮發(fā)油。用無水硫酸鈉干燥后，稱定質(zhì)量4.0 g，揮發(fā)油得率為1.33%，加丙酮定容，用0.22 μm有機濾膜過濾，置2 mL容量瓶中，待測。

乙醚提取法：稱取搗碎潁半夏干燥塊莖300 g，置1 000 mL燒瓶中，加乙醚500 mL，反復(fù)蒸餾提取1 h，將提取液再減壓蒸餾，蒸去乙醚后得淡黃色透明液體，有香味，符合揮發(fā)油外觀性狀，即為揮發(fā)油。取揮發(fā)油，用無水硫酸鈉干燥后，稱定質(zhì)量 5.0 g，揮發(fā)油得率為1.67% ，加丙酮定容，用 0.22 μm 有機濾膜過濾，置2 mL容量瓶中，待測。

2.2 分析條件

2.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：DB-5 型石英毛細(xì)管柱（250 μm×0.25 μm，30.0m）；載氣：高純氦氣（99.999%）；柱流量：1.0mL ／min；汽化室溫度：250℃。升溫程序：從40℃開始，以10℃ ／min的速率升至 250℃，保持 10 min；分流比：40∶1；進(jìn)樣量：1.0 μL。

2.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式：電子轟擊（EI）；電子能量：70 eV；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；進(jìn)樣口溫度：250℃；質(zhì)量 掃 描范圍（m／z）：40～350 amu，全掃描方式 ，NIST11質(zhì)譜庫。

2.3 總離子流圖和各化學(xué)成分相對含量測定

在擬訂條件下，對潁半夏揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS聯(lián)用法分析，獲得總離子流圖，詳見圖1和圖2。結(jié)合總離子流色譜圖、保留時間、NIST 11庫和相關(guān)文獻(xiàn)，鑒定潁半夏揮發(fā)油化學(xué)成分；通過峰面積歸一化法計算各化學(xué)成分的相對含量。結(jié)果見表1和表2。

2.4 化學(xué)成分分析

由圖1和表1可知，采用同時蒸餾萃取法提取潁半夏揮發(fā)油共鑒定出13個化學(xué)成分，占潁半夏揮發(fā)油總量的66.41%，相對含量最高的為9，12-十八碳二烯酸乙酯。由圖2和表2可知，采用乙醚提取法提取揮發(fā)油確認(rèn)了其中的11種化學(xué)成分，所鑒定的組分占總揮發(fā)油的55.36%，其中相對含量最高的為二十四烷。

表1 同時蒸餾萃取法提取潁半夏揮發(fā)油化學(xué)成分及相對含量

表2 乙醚提取法提取潁半夏揮發(fā)油化學(xué)成分及相對含量

2.5 化學(xué)成分種類分析

由表1可知，采用同時蒸餾萃取法共鑒定出13個化學(xué)成分，包括 6 個酯類（46.20%）、3 個烷烴類（6.16%）、2 個雜硅氧類（5.76% ）、1 個酚類（3.98% ）、1 個酮類（4.31%）。由表2可知，采用乙醚提取法提取揮發(fā)油共確認(rèn)11個化學(xué)成分，包括6個烷烴類（29.48%）、3個酯類 （13.79% ）、1 個酮類（9.57% ）、1 個 雜 硅 氧 類（2.52%）。從化學(xué)結(jié)構(gòu)類型來看，同時蒸餾萃取法提取鑒定的化學(xué)成分主要為酯類，乙醚提取法提取確定的化學(xué)成分主要為烴類。

2.6 相同化學(xué)成分分析

由表1和表2可知，2種提取方法提取的相同化學(xué)成分為7個，但相對含量不同。相同化學(xué)成分分別為4-羥基-4-甲基-2-戊酮、十四甲基環(huán)七硅氧烷、鄰苯二甲酸二丁酯、十六烷酸乙酯、9，12-十八碳二烯酸乙酯、二十烷和二十五烷。

2.7 特有化學(xué)成分分析

由表1和表2可知，同時蒸餾萃取法提取的特有化學(xué)成分有6個，即十二甲基環(huán)己硅氧烷、2，6-二叔丁基對甲酚、鄰苯二甲酸異丁基辛酯、十六烷酸甲酯、γ-欖香烯和反-10，順-12-十八碳二烯酸甲酯。乙醚提取法提取的特有化學(xué)成分有4個，即十八烷、十九烷、二十四烷和二十六烷。

3 討論

按2015年版《中國藥典（一部）》提取植物揮發(fā)油的方法，常用水蒸氣蒸餾法提取潁半夏的揮發(fā)油，提取10 h后，索氏提取器中未見油狀液體，可能是因為提取的溫度太高，揮發(fā)油溶于水中而無法得到，蒸餾萃取法和乙醚提取法均得到潁半夏揮發(fā)油。故不建議使用水蒸氣蒸餾法提取潁半夏的揮發(fā)油。

同時蒸餾萃取法揮發(fā)油得率為1.33%，乙醚提取法揮發(fā)油得率為1.67%，后者得率略高于前者。同時蒸餾萃取法提取鑒定的化學(xué)成分主要為酯類，相對含量最高的為9，12-十八碳二烯酸乙酯；乙醚提取法提取確定的化學(xué)成分主要為烴類，相對含量最高的為二十四烷。2種方法提取潁半夏的揮發(fā)油成分有差異，實際應(yīng)用中應(yīng)綜合考慮揮發(fā)油得率、相對含量、有效成分、工業(yè)成本和操作難度等因素選擇合適的提取方法。