藜蘆與白頭翁提取液對人參黑斑病菌的抑菌活性

徐榮 李悅 趙博雅 蘇鑫 李翔國

目前，生產(chǎn)上防治植物病害使用的殺菌劑大多數(shù)是化學農(nóng)藥。化學殺菌劑的使用次數(shù)越來越多，土壤里的殘留物不斷增加，為減少污染和病蟲害，植物源提取液防治病害得到快速發(fā)展。研究表明，丁香的乙醇提取液中主要成分是丁香酚，對多種細菌真菌的生長具有抑制甚至致死作用，同時丁香提取液對人參灰霉病病原菌、龍眼的致腐真菌有抑制作用、對霉菌和酵母菌的抑菌效果顯著。曹鵬飛利用大蒜、銀杏、海金沙3種植物提取液對櫻桃番茄青枯病病原菌進行了抑菌實驗，結(jié)果表明，隨著3種提取物濃度的增加，抑菌效果逐漸增強，3種提取物的抑菌效果極顯著高于農(nóng)藥。莫熙禮等研究發(fā)現(xiàn)花椒提取物在低濃度條件下對桃褐腐病菌具有強烈的抑制作用，隨濃度升高抑制作用增強。以上學者的研究都可以說明不少植物提取物可以抑制多種病菌的危害。

藜蘆乙醇提取物和各層萃取物對多種植物病原菌均有不同程度的抑菌作用。田慧霞等研究發(fā)現(xiàn)一定濃度的藜蘆活性物質(zhì)對細菌有毒殺作用，抑制細菌生長。楊麗娟等發(fā)現(xiàn)藜蘆各部位的沸水提取液、乙醇提取液、丙酮提取液對水稻稻瘟病有不同程度的抑菌效果。劉佳實驗發(fā)現(xiàn)虎杖、黃連、藁本這三種中藥的提取物均有抑制真菌活性。李翔國等研究發(fā)現(xiàn)艾蒿正丁醇提取物、藜蘆生物堿提取物、延胡索氯仿提取物對玉米彎孢葉斑病菌的抑菌活性較高。

在探討白頭翁抗菌作用的有效部位及白頭翁湯的體外抑菌作用時，時維靜等研究發(fā)現(xiàn)白頭翁中的原白頭翁素抑菌效果最好，且白頭翁不同溶劑提取液對玉米小斑病菌菌絲生長和孢子萌發(fā)均具有一定的抑制作用，對菌絲生長的抑制效果好于對其孢子萌發(fā)的抑制效果。白頭翁和延胡索的不同溶劑提取物對供試植物的發(fā)芽、生長以及對葉綠素合成有著不同的影響，對病原菌的抑制率與病原菌的種類有關(guān)，對植物的發(fā)芽和生長有明顯的抑制作用，而且白頭翁氯仿提取液的抑制活性高于白頭翁正丁醇提取液。

人參黑斑病是人參地上部最為普遍的一種病害之一，生產(chǎn)上防治人參黑斑病使用的殺菌劑主要有多菌靈、代森錳鋅等，農(nóng)藥品種顯得陳舊，而且用藥次數(shù)多，并出現(xiàn)農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染等一系列社會問題，不符合人參的GAP規(guī)范化栽培標準。本試驗旨在研究藜蘆與白頭翁不同溶劑提取液對人參黑斑病菌的室內(nèi)抑菌活性，篩選出對人參黑斑病菌具有較強抑菌活性的提取液，為進一步田間藥效試驗奠定基礎。

1 材料與方法

1.1材料

試驗材料：藜蘆與白頭翁分別采集于吉林省安圖縣。樣品經(jīng)清洗，陰干，粉碎備用。供試菌株：人參黑斑病菌（Alternaria panax Whetz），由延邊大學農(nóng)學院植物病理學教研室提供。供試藥劑：甲醇、丙酮、乙醇由天津市科密歐化學試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 提取液的制備

將采集的藜蘆與白頭翁陰干后用粉碎機制成粉末，各取50 g，分別用甲醇、乙醇、丙酮，用索氏提取器提取8 h，再濃縮到50 mL，即為各提取液的母液，提取液經(jīng)0.22 μm濾膜除菌，4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 提取液抑菌活性的測定

采用生長速率法測定提取液對人參黑斑病菌的抑菌作用，將每種提取液配成不同濃度后，在超凈工作臺中，將經(jīng)高溫高壓滅菌的馬鈴薯瓊脂葡萄糖培養(yǎng)基，加入不同濃度提取液制成平板，每處理設3次重復。用內(nèi)徑為7 mm的打孔器在菌落邊緣打菌餅，放入含提取液平板中央，以不加提取液的平板接菌餅作對照，于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)。連續(xù)六天測量菌落直徑，取第六天的數(shù)據(jù)計算不同殺菌劑對人參黑斑病菌菌絲生長的抑制率。計算公式如下：

以處理濃度對數(shù)為橫坐標，不同濃度下的抑制生長率轉(zhuǎn)換成機率值為縱坐標繪制出毒力曲線，求出毒力直線回歸方程、相關(guān)系數(shù)、抑制中濃度（EC50）值。

2 結(jié)果與分析

2.1 藜蘆不同溶劑提取液對人參黑斑病菌的抑菌效果

藜蘆不同溶劑提取液對人參黑斑病菌菌絲生長的抑制作用見圖1-3，提取液的抑菌活性均隨著濃度的增大而增強，且劑量與毒力呈正相關(guān)。其中藜蘆甲醇提取液回歸方程為y=1.6868x+2.4601，EC50=32.0442 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9707;藜蘆丙酮提取液回歸方程為y=1.3663x+2.8674，EC50=36.3800μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.8865;藜蘆乙醇提取液回歸方程為y=1.7618x+2.5928，EC50=23.2500μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9367。

2.2白頭翁不同溶劑提取液對人參黑斑病菌的抑菌效果

白頭翁不同溶劑提取液對人參黑斑病菌菌絲生長的抑制作用見圖4-6，提取液的抑菌活性整體上隨著濃度的增大而增強，且劑量與毒力呈正相關(guān)，只有在乙醇提取液上呈先降后生的趨勢。其中白頭翁甲醇提取液回歸方程為y=1.9188x+2.4402，EC50=21.8050 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9567;白頭翁丙酮提取液回歸方程為y=1.6652x+2.5688，EC50=28.8400μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9492;白頭翁乙醇提取液回歸方程為y=1.1908x+3.1510，EC50=35.7100μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)r=0.9072。

綜上所述，根據(jù)試驗結(jié)果表明藜蘆與白頭翁的甲醇、乙醇、丙酮提取液對人參黑斑病菌均存在不同程度的抑菌效果，說明藜蘆與白頭翁均是具有一定抑菌作用的植物。采用不同溶劑提取的抑菌效果比較，藜蘆的藥用成分提取最好使用乙醇，而白頭翁的藥用成分提取最好使用甲醇。

通過試驗篩選出了對人參黑斑病菌具有較強抑菌活性的提取液，為進一步田間藥效試驗奠定了基礎。而提取液在田間對人參黑斑病的防治效果、作用機理以及對人參的生長是否有影響，還有待于進一步的研究。

（作者單位：133002吉林延吉延邊大學農(nóng)學院）