DRD2(-141C Ins/Del)多態(tài)性與利培酮所致精神分裂癥患者高泌乳素血癥的相關(guān)性分析

鄔俊福，張運(yùn)才，彭紅波

0 引言

精神分裂癥是一種慢性精神紊亂疾病，發(fā)病率占精神障礙患病率的50%左右，臨床癥狀涉及感知能力、思維、情感等多方面障礙[1-3]。研究表明，多巴胺系統(tǒng)的過度表達(dá)是造成精神分裂的原因之一[4]，多巴胺D2受體在多巴胺通路中發(fā)揮重要功能[5]，常用利培酮治療，效果顯著，但也有明顯不良反應(yīng)，即高泌乳素血癥。長期高泌乳素對女性造成閉經(jīng)、溢乳、月經(jīng)不調(diào)等不良影響，極大抑制了利培酮的長期應(yīng)用[6]。DRD2-141C Ins/Del多態(tài)性為D2基因啟動子區(qū)域-141位點(diǎn)上胞嘧啶的插入/缺失突變，可能與泌乳素的升高有一定聯(lián)系[7]。本研究應(yīng)用PCR-LDR檢測基因多態(tài)性，探討DRD2-141C Ins/Del多態(tài)性與高泌乳素血癥之間的相關(guān)性,從基因水平為精神分裂癥患者臨床合理用藥提供指導(dǎo)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2013年6月至2018年10月148例我院漢族精神分裂癥患者作為研究對象。入組標(biāo)準(zhǔn)：在患者本人或監(jiān)護(hù)人知情同意的情況下，自愿參加本研究，征得同意后抽取其外周靜脈血樣；符合中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)第3版(CCMD-3)精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；入組前1個(gè)月內(nèi)未服用過抗精神病藥、抗抑郁藥等影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥物；年齡16～58歲；利培酮單藥治療6周，起始劑量1 mg/d，在1周左右的時(shí)間內(nèi)逐漸將劑量加大到2～4 mg/d，第2周內(nèi)可逐漸加量到4～6 mg/d，此后維持此劑量不變，或根據(jù)個(gè)人情況進(jìn)一步調(diào)整。每日劑量一般不超過10 mg。收集全部研究對象的臨床資料。男性精神分裂癥患者73例，年齡20～45歲，平均年齡(36.21±6.29)歲；女性75例，年齡21～53歲，平均年齡(37.19±7.12)歲。另選130例漢族體檢健康者為對照組。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象知情并簽署同意書。

1.2 血樣采集 征求患者及監(jiān)護(hù)人同意，采肘部靜脈血5 ml，置于EDTA二鈉抗凝管中，上下顛倒搖勻，記錄研究對象信息，-20 ℃保存，現(xiàn)用現(xiàn)融，避免多次凍融。

1.3 基因分型 按常規(guī)方法提取基因組DNA。采用RFLP-PCR方法分析D2R2(-141C Ins/Del)多態(tài)性，引物采用primer 5.0設(shè)計(jì)，PCR引物序列為：5′-TCGTGGACGCCGTGATTCAGG-3′；5′-AGGTCTGACAACGGGTCAGGC-3′，引物由TaKaRa公司合成。PCR的反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性2 min，然后設(shè)定以下循環(huán)：95 ℃ 5 s，95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，共41個(gè)循環(huán)，72 ℃終延伸10 min。PCR產(chǎn)物長度為217 bp。D2R2(-141C Ins/Del)基因分型：取擴(kuò)增產(chǎn)物10 μl，用5 μl BstN1限制性內(nèi)切酶酶切，37 ℃處理4 h后，以15%聚丙烯酰胺凝膠電泳，EB染色，紫外燈下觀察分型。分型標(biāo)準(zhǔn)：D2R2-141等位基因可被酶切為144 bp和160 bp兩個(gè)片段。若兩條等位基因均可被酶切，則基因型為-141C Ins/Ins；若兩條等位基因均不能被酶切，則基因型為-141C Del/Del；若一條等位基因可被酶切，另一條等位基因不能被酶切，則基因型為-141 C Ins/Del。

1.4 泌乳素水平檢測 使用EDTA真空采血管收集外周血后當(dāng)天送交醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科進(jìn)行檢驗(yàn)。全血離心后分離血清，采用微粒酶免疫分析法對泌乳素含量進(jìn)行測定。正常血清泌乳素的范圍為2.64～13.13 ng/ml。

2 結(jié)果

2.1 遺傳平衡性實(shí)驗(yàn) Hardy-weinberg遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)顯示，研究組與對照組各基因型分布符合與等位基因頻率上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.20，df=1，P>0.05；χ2=1.95，df=1，P>0.05)，符合遺傳平衡差異。見表1。

2.2 精神病患者人口學(xué)因素與DRD2(-141C Ins/Del)多態(tài)性分析 DRD2(-141C Ins/Del)基因多態(tài)性在性別、年齡、婚姻史、家族史、起病形式、有無精神創(chuàng)傷史等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 遺傳平衡表

注：HWE代表哈迪-溫伯格平衡定律檢驗(yàn)

2.3 精神分裂癥患者接受利培酮治療前后泌乳素水平比較 研究組患者接受利培酮治療6周后，血清泌乳素水平較用藥前顯著升高[(78.26±10.13)ng/ml vs.(20.16±3.27)ng/ml]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 DRD2(-141C Ins/Del)多態(tài)性與利培酮所致高泌乳素血癥相關(guān)性 治療前，不同基因型泌乳素水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。患者經(jīng)利培酮治療后，不同基因型泌乳素水平變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Del攜帶者升高幅度顯著低于Ins攜帶者，且Del/Del型泌乳素升高幅度最低(P<0.05)。見表3。

3 討論

精神分裂癥是一種嚴(yán)重的精神類疾病，病因尚未闡明，占精神障礙終身患病率的50%左右[9]，是精神疾病中患病率最高的一種。精神分裂癥多發(fā)生于青壯年人群，重度刺激可誘發(fā)發(fā)病，臨床癥狀涉及感知能力、思維、情感等多方面障礙，部分患者發(fā)展為精神殘疾，少數(shù)患者通過治療可痊愈或基本痊愈。研究表明，額前皮質(zhì)多巴胺的活性變化是精神分裂癥的主要病因猜想之一。多巴胺D2受體在多巴胺通路中發(fā)揮重要功能。研究表明，DRD2基因多態(tài)性與精神分裂癥密切相關(guān)。Frank等[5]報(bào)道，260例日本精神分裂癥患者中，-141C 缺失的頻率為0.14，312例對照中，-141C缺失頻率為0.22，OR=0.6，95%CI：0.44～0.81，P<0.001，該研究提示，-141C缺失是一種保護(hù)性因素,而-141C插入是一種遺傳易感因素。Wang等[10]研究則得出不同結(jié)論，精神分裂癥和DRD2-141C Ins/Del基因多態(tài)性之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。王錦毓等[11]研究表明，DRD2-141C Ins/Del基因多態(tài)性與農(nóng)村自殺未遂密切相關(guān)，表明DRD2-141C Ins/Del基因多態(tài)性與精神類疾病密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，D2R2基因-141C Ins/Del基因型分布頻率在研究組與對照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

利培酮是苯并異惡唑衍生物，是治療急性和慢性精神分裂癥的常用藥物，對焦慮、抑郁等情感問題有較好的療效。活性成分為選擇性單胺能拮抗劑，可與多巴胺D2受體特異性結(jié)合[12]，但其有明顯不良反應(yīng)[13]，即易導(dǎo)致患者泌乳素升高，形成高泌乳素血癥。長期高泌乳素對女性造成閉經(jīng)、溢乳、月經(jīng)不調(diào)等不良影響，對男性亦可導(dǎo)致性功能障礙等后果，極大抑制了利培酮的長期應(yīng)用[14]。研究表明，DRD2受體基因多態(tài)性與抗精神疾病藥物所致錐體外系不良反應(yīng)密切相關(guān)[15]，因此，研究DRD2(-141C Ins/Del)多態(tài)性與利培酮所致精神分裂癥患者高泌乳素血癥的相關(guān)性確有必要。

表2 一般人口學(xué)資料與DRD2(-141C Ins/Del)多態(tài)性分析

表3 基因多態(tài)性與高泌乳素變化相關(guān)性

注：*與Ins/Ins型比較，P<0.05；#與Ins/Del型比較，P<0.05

本實(shí)驗(yàn)Hardy-weinberg遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)顯示，所選取研究對象研究組與對照組各基因型分布符合與等位基因頻率上差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，符合遺傳平衡差異，說明本研究樣本來自隨機(jī)婚配大群體，無近親婚配、遷移、偶然因素的干擾。本研究精神分裂癥患者經(jīng)利培酮治療后，泌乳素水平發(fā)生明顯升高，與韓勇等[16]研究結(jié)果類似。推測原因可能為部分精神分裂癥患者有額葉5-HT功能亢進(jìn)，抑制了額葉多巴胺功能，繼而又引起皮質(zhì)下多巴胺功能亢進(jìn)，從而使這部分患者泌乳素水平偏低，應(yīng)用利培酮后，抑制了5-HT功能，解除了皮質(zhì)多巴胺功能的抑制，從而抑制了皮質(zhì)下多巴胺功能，而引起了血漿泌乳素水平的升高。Alladi 等[17]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，289例精神分裂患者利培酮誘導(dǎo)的高催乳素貧血癥中，DRD2-141 Ins/Del和Del/Del多態(tài)性的發(fā)生與利培酮的催乳素水平增加顯著相關(guān)；而喬屹等[18]未發(fā)現(xiàn)-141C Ins/Del基因多態(tài)性與泌乳素水平的變化有明顯相關(guān)性。不同結(jié)果可能與人群選擇差異有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，DRD2-141C Ins/Del基因多態(tài)性與泌乳素水平的變化有明顯相關(guān)性，Ins攜帶者治療前后血清泌乳素變化幅度較低，且Ins/Ins型升高幅度最低，表明DRD2-141C Ins/Del多態(tài)性中Ins/Ins基因型在接受利培酮治療后，造成泌乳素升高作用最輕，有利于較長時(shí)間采用利培酮治療，達(dá)到更好療效。

綜上所述，DRD2-141C Ins/Del基因多態(tài)性參與了利培酮治療精神病患者導(dǎo)致泌乳素水平上升的病理過程，Ins/Ins、DRD2-141C Ins/Del多態(tài)性有望成為改善利培酮所致高泌乳素的生物學(xué)標(biāo)志。精神分裂癥通常是由基因與基因、基因與環(huán)境之間相互作用形成的復(fù)雜性狀疾病，單獨(dú)分析某個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性往往不能得出準(zhǔn)確結(jié)果，因而今后將對多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行聯(lián)合檢測，以期得到更全面的認(rèn)識。