注射用鹽酸萬古霉素與三種常用電解質(zhì)注射液的配伍穩(wěn)定性考察

劉 鋼，秦 侃，袁 杰，吳文華

0 引言

萬古霉素(Vancomycin)屬糖肽類抗菌藥物，是目前治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、表皮葡萄球菌和耐藥腸球菌引起重癥感染的一線用藥[1-2]，臨床主要用于上述致病菌引起的敗血癥、感染性心內(nèi)膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、灼傷、手術(shù)創(chuàng)傷等淺表性繼發(fā)感染等的治療。萬古霉素臨床應(yīng)用中國專家共識(2011版)中推薦的臨床常用靜脈輸液配制方法為：注射用鹽酸萬古霉素0.5 g用10 ml滅菌注射用水溶解后，再用5%葡萄糖溶液或0.9%氯化鈉溶液載體稀釋成最終濃度為5 g/L的溶液，供靜脈滴注[3]。

關(guān)于混合糖電解質(zhì)注射液(MSEI)、轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液(ISEI)、鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液(SPMCGI)，臨床常通過非口服途徑為患者補充，以維持水分、電解質(zhì)和能量。重癥感染的患者容易出現(xiàn)電解質(zhì)紊亂，往往需要補充此類電解質(zhì)注射液[4]，但是目前除了萬古霉素臨床應(yīng)用中國專家共識(2011版)中推薦的靜脈輸液配制方法外，尚沒有萬古霉素與上述3種電解質(zhì)注射液的相關(guān)配伍穩(wěn)定性報道，因此,本實驗?zāi)M臨床用藥濃度，旨在不同條件下考察萬古霉素與上述3種電解質(zhì)注射液的配伍穩(wěn)定性，以期為臨床用藥提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260series四元梯度高效液相色譜儀和DAD檢測器(美國Agilent公司)，PB-10型酸度計(德國Sartorius公司)，XSE204型電子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)，H.H.S電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)。

1.2 試藥 萬古霉素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：130360-201302)，注射用鹽酸萬古霉素(美國禮來公司，批號：C778985)，混合糖電解質(zhì)注射液(江蘇正大豐海制藥有限公司，批號：1712252)，轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液(上海海尼藥業(yè)有限公司，批號：1801143)，鈉鉀鎂鈣葡萄糖注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：170421EK)，磷酸二氫鉀(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20140114)。乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo Scientific C18-ODS(100 mm×2.1 mm,3 μm)；流動相：乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.6)(6∶94)；柱溫：30 ℃；檢測波長：236 nm；流速：0.8 ml/min；進樣量：10 μl；萬古霉素對照品、空白溶液和供試品溶液的色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取萬古霉素對照品24.9 mg，置25 ml容量瓶中，流動相溶解定容至刻度，搖勻即得對照品溶液。

2.3 空白溶液的制備 向未含有注射用鹽酸萬古霉素的空白小瓶中加入10 ml注射用水，平行制備3份，再分別用MSEI、ISEI、SPMCGI溶解定容至100 ml容量瓶中，搖勻后在室溫下避光保存。

2.4 供試品溶液的制備 模擬臨床用藥濃度，向含有注射用鹽酸萬古霉素0.5 g的小瓶中加入10 ml注射用水溶解，平行制備3份，再分別用MSEI、ISEI、SPMCGI溶解定容至100 ml容量瓶中，搖勻后在室溫下避光保存。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取對照品溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，流動相溶解定容至刻度，搖勻，HPLC分別自動進樣1、2、5、10、15、20 μl，按“2.1”項下方法測定萬古霉素的含量，以萬古霉素濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=1 548.8 X+4.201 4(r=0.999 9，n=6)，表明萬古霉素在0.099 6～1.992 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液，按“2.1”項下方法分別進樣6次，測定萬古霉素的含量，結(jié)果RSD=0.93%。

2.7 重現(xiàn)性試驗 精密吸取同一供試品溶液，按“2.1”項下方法分別進樣6次，測定萬古霉素的含量，結(jié)果RSD=1.27%。

圖1 萬古霉素對照品、空白溶液和供試品溶液的色譜圖

注：A.萬古霉素對照品，B.MSEI空白溶液，C.MSEI供試品溶液，D.ISEI空白溶液，E.ISEI供試品溶液，F(xiàn).SPMCGI空白溶液，G.SPMCGI供試品溶液;1、2、3、4均為萬古霉素

2.8 加樣回收率試驗 精密吸取已知含量的萬古霉素供試品溶液0.5、1.0、1.5 ml和對照品溶液0.5、1.0、1.5 ml至100 ml容量瓶中，配制為低、中、高濃度各3份，按“2.1”項下方法測定萬古霉素的含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.9 配伍穩(wěn)定性試驗

2.9.1 外觀、pH值變化 按“2.4”項下方法配制供試品溶液，于藥液配好后即刻(0 h)及1、2、4、6、8 h取樣，測定3種不同配伍液的pH值，同時觀察配伍液外觀及澄明度，結(jié)果見表2、表3。

2.9.2 含量測定結(jié)果 按“2.4”項下方法配制供試品溶液。將3種配伍液分別置于25 ℃和40 ℃恒溫水浴鍋中，采取避光和光照2種儲存條件進行處理。分別按上述儲存條件于藥液配好后即刻(0 h)及1、2、4、6、8 h取樣，測定3種不同配伍液中萬古霉素的含量變化，以配制后0 h的含量為100%，換算出其他時間點的百分含量，結(jié)果見表4、表5。

表2 三種不同配伍液的pH值

3 討論

3.1 含量測定方法的選擇 《中國藥典》(2015年版)中萬古霉素項下的含量測定方法為抗生素微生物檢定法。其對于醫(yī)療機構(gòu)來說具有步驟繁瑣、耗時長、結(jié)果受多種因素影響等缺點。高效液相色譜法具有靈敏度高、重復(fù)性好、對微量濃度樣本具有高靈敏度等優(yōu)點，更適合在實際工作中進行操作使用[5-6]，故本實驗中選用高效液相色譜法進行萬古霉素的含量測定。

表3 三種不同配伍液的外觀及澄明度

表4 25 ℃下3種配伍液的相對百分含量變化(%)

表5 40 ℃下三種配伍液的相對百分含量變化(%)

3.2 流動相的篩選 本實驗參考了多篇文獻中的方法進行預(yù)試驗，篩選了磷酸鹽緩沖液的pH值(3.2、3.4、3.6、3.8)和濃度(0.025、0.05、0.1 mol/L)，結(jié)果顯示，酸性越大、鹽濃度越大，萬古霉素的保留越強，分離越好；但酸性過大或鹽濃度過高對色譜系統(tǒng)影響較大，故最終選定0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.6)作為流動相中的磷酸鹽緩沖液。

另通過預(yù)試驗對2種流動相的比例進行了篩選，結(jié)果顯示，采用乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.6)(6∶94)，溶劑峰和藥物峰分離完全，無雜質(zhì)干擾，峰形和主藥保留時間較佳[7-9]。

3.3 對照品溶媒的選擇 預(yù)試驗過程中，選用甲醇溶解萬古霉素對照品并進行含量測定，發(fā)現(xiàn)甲醇溶劑峰對萬古霉素對照品主峰干擾較大，遂改用流動相溶解萬古霉素對照品，對照品主峰峰形較好。

3.4 三種配伍液的穩(wěn)定性 本實驗通過對注射用鹽酸萬古霉素與3種常用電解質(zhì)注射液的配伍穩(wěn)定性考察，結(jié)果顯示，三種不同配伍液在室溫條件下8 h內(nèi)外觀及pH值均無明顯變化；25 ℃下8 h內(nèi)三種不同配伍液在避光、光照條件下萬古霉素含量與初始含量相比均無明顯變化；40 ℃下6 h后三種不同配伍液在避光、光照條件下萬古霉素含量與初始含量相比均有小幅降低。

4 結(jié)論

高效液相色譜法可以用于萬古霉素的含量測定，注射用鹽酸萬古霉素可以與三種常用電解質(zhì)注射液配伍使用，但應(yīng)控制環(huán)境溫度，一般情況下不應(yīng)在超過30 ℃的環(huán)境下配伍使用，并且配制后的溶液應(yīng)盡量在6 h內(nèi)使用。