淫羊藿多糖對(duì)雛雞抗氧化功能的影響

李星艷，靳錄洋，徐小芳，羅 燕，谷新利

(新疆石河子工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆石河子832000)

淫羊藿是我國(guó)傳統(tǒng)的補(bǔ)益中藥，有堅(jiān)精骨、益精氣、補(bǔ)腰膝、強(qiáng)心力等作用。其主要成分是黃酮類(lèi)和多糖，目前對(duì)淫羊藿屬植物的研究多集中在黃酮類(lèi)成分，而對(duì)淫羊藿多糖的研究相對(duì)較少[4]。本試驗(yàn)從淫羊藿中提取淫羊藿多糖(EPS)，探討EPS對(duì)雛雞抗氧化作用的影響，以期為研究開(kāi)發(fā)新藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 淫羊藿購(gòu)自石河子市醫(yī)藥公司。淫羊藿多糖(EPS)由石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提取，多糖含量為32.30%。試驗(yàn)中注射劑量均指經(jīng)過(guò)換算實(shí)際進(jìn)入雛雞體內(nèi)純多糖的含量。多糖在注射前用蒸餾水溶解，配成溶液，115 ℃ 30 min高壓滅菌，備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡健康羅曼雛雞由石河子市養(yǎng)雞場(chǎng)提供，臨床檢查健康。用新疆天康飼料廠生產(chǎn)的雛雞料進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)，所有雞只的飼養(yǎng)方法、飼養(yǎng)條件、環(huán)境、飼料品質(zhì)及飼養(yǎng)管理均一致。

1.3 方法 80只羅曼雛雞隨機(jī)分為4組，每組20只。1日齡開(kāi)始用藥，Ⅰ組：皮下注射生理鹽水0.2 mL/只，連續(xù)注射7 d。Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ組：皮下注射濃度分別為12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL的EPS，0.2 mL/只，連續(xù)注射7 d。每組隨機(jī)抽取10只，在試驗(yàn)第7天心臟采血，第14、21、28、35、42天翅靜脈采血，所采血液用3.8%檸檬酸鈉溶液抗凝。

1.4 檢測(cè)項(xiàng)目 測(cè)定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)的活性、丙二醛(MDA) 含量。所有測(cè)定均采用南京建成生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒，按照其說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)，以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)表示，顯著性分析采用方差分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 EPS對(duì)SOD活性的影響 試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中SOD的活性，且在試驗(yàn)第7、14、21、28天有不同程度的提高，第35、42天略有降低。與Ⅰ組相比，Ⅱ、Ⅳ組在試驗(yàn)第14、21、35天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗(yàn)第7、42天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第14、21、28、35天時(shí)差異極顯著(P<0.01)。

表1 不同濃度的EPS對(duì)SOD活性的影響 (U/mL)

注：與Ⅰ組相比，同一列數(shù)字后*表示差異顯著 (P<0.05)，**表示差異極顯著 (P<0.01)； 下表同

2.2 EPS對(duì)MDA含量的影響 試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的降低血清中MDA的含量，且在試驗(yàn)第7、14、21、28天逐漸減小，第35、42天略有升高。與Ⅰ組相比，Ⅱ組在試驗(yàn)第7、14、21、28天時(shí)差異顯著(P<0.05)；Ⅲ組在試驗(yàn)第7、35、42天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第14、21、28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅳ組在試驗(yàn)第14、21、28天時(shí)差異顯著(P<0.05)。

表2 不同濃度的EPS對(duì)MDA含量的影響 (nmol/mL)

2.3 EPS對(duì)GSH-Px活性的影響 試驗(yàn)結(jié)果如表3所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中GSH-Px的活性，且在試驗(yàn)第7、14、21、28天有不同程度的提高，第35、42天有所下降。與Ⅰ組相比，Ⅱ組在試驗(yàn)第7、14、35天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第21、28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗(yàn)第35、42天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第7、14、21、28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅳ組在試驗(yàn)第7、14、21天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)。

表3 不同濃度的EPS對(duì)GSH-Px活性的影響 (U/L)

2.4 EPS對(duì)CAT活性的影響 試驗(yàn)顯示如表4所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中CAT的活性，且在試驗(yàn)第7、14、21、28天都有不同程度的提高，第35、42天逐漸降低。與Ⅰ組相比，Ⅱ、Ⅳ組在試驗(yàn)第7、14、35天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第21、28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗(yàn)第7、42天時(shí)差異顯著(P<0.05) ，第14、21、28、35天時(shí)差異極顯著(P<0.01)。

表4 不同濃度的EPS對(duì)CAT活性的影響 (U/mL)

2.5 EPS對(duì)GR活性的影響 試驗(yàn)結(jié)果如表5所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中GR的活性，且在試驗(yàn)第7、14、21、28天都有不同程度的提高，第35、42天逐漸降低。與Ⅰ組相比，Ⅱ組在試驗(yàn)第14、35、42天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第21、28天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗(yàn)第7天時(shí)差異顯著(P<0.05)，第14、21、28、35、42天時(shí)差異極顯著(P<0.01)；Ⅳ組在試驗(yàn)第14、21、28、35天時(shí)差異顯著(P<0.05)。

表5 不同濃度的EPS對(duì)GR活性的影響 (U/L)

3 討論

皮下注射不同濃度的EPS后，多糖組血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT的活性均表現(xiàn)升高，在第28天時(shí)達(dá)到峰值，第35、42天有所下降，而MDA的含量均表現(xiàn)降低，在第28天時(shí)降到最低，第35、42天略有升高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，EPS能明顯提高雞血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT活性，并能明顯降低雞血清中MDA含量。李明[5]、梁亦龍[6]、吳偉[7]等研究也發(fā)現(xiàn)多糖具有抗氧化作用，與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。提示EPS具有抗氧化活性。

濃度之所以是一個(gè)重要因素，是因?yàn)榍宄杂苫俾适怯善錆舛群退俾食?shù)決定的?？寡趸瘎┑幕钚栽谏矬w內(nèi)和體外常常有很大區(qū)別，造成這種差別的重要原因之一是抗氧化劑和底物在生物膜中所處的微環(huán)境與體外不同。決定抗氧化能力的另一主要因素是抗氧化劑引發(fā)自由基產(chǎn)生。當(dāng)抗氧化劑清除自由基時(shí)，轉(zhuǎn)換成其他自由基，也可能會(huì)發(fā)生某些化學(xué)反應(yīng)，這些反應(yīng)決定了整個(gè)體系的抗氧化能力，有時(shí)高濃度的抗氧化劑還會(huì)起到促氧化作用[8]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在試驗(yàn)第7、14、21、28、35、42天時(shí)，血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量均表現(xiàn)為濃度為25 mg/mL的多糖組優(yōu)于濃度為12.5 mg/mL、50 mg/mL的多糖組。提示EPS的抗氧化活性不是濃度越大越好。 鄒佳妤[9]、蘇圓圓[10]等研究也發(fā)現(xiàn)不同濃度和劑量的多糖抗氧化性能不同，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，皮下注射不同濃度的EPS后，血清中SOD、GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量在第42天時(shí)，與對(duì)照組相比，濃度為12.5 mg/mL、50 mg/mL組恢復(fù)正常，濃度為25 mg/mL組差異顯著(P<0.05) ，提示測(cè)定血清中SOD、GSH-Px、CAT活性時(shí)，濃度為25 mg/mL組應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)測(cè)定時(shí)間；血清中GR的活性在第42天時(shí)，與對(duì)照組相比，濃度為12.5 mg/mL組差異顯著(P<0.05)，25 mg/mL組差異極顯著(P<0.01)， 提示測(cè)定血清中GR時(shí)，濃度為12.5 mg/mL組 、25 mg/mL組應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)測(cè)定時(shí)間。

本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組皮下注射的EPS均為0.2 mL/只，由于濃度不同，即各組所用劑量是不同的。試驗(yàn)結(jié)果表明，濃度為25 mg/mL組較濃度為12.5 mg/mL、50 mg/mL組EPS抗氧化活性高，影響因素是劑量還是濃度，有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

EPS能使血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)的活性明顯升高，使丙二醛(MDA)的含量明顯降低。提示淫羊藿多糖作為天然抗氧化劑，具有很好的研究?jī)r(jià)值與應(yīng)用前景。