新疆哈巴河縣流產(chǎn)牛病原檢測(cè)

吾力江，張夢(mèng)圓，李仿鑫，艾日登才茨克，努爾古麗，巴音查汗

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052 ; 2.新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊830000)

隨著新疆養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，牛飼養(yǎng)量的逐漸增加，牛病也逐年增長(zhǎng)。其中，母牛流產(chǎn)是影響?zhàn)B牛業(yè)發(fā)展的主要原因之一。母牛流產(chǎn)是由于母體與胎兒之間存在的正常生理關(guān)系受到破壞，導(dǎo)致妊娠中斷，由疫病性因素引起的流產(chǎn)主要包括寄生蟲病性流產(chǎn)和傳染性疫病性流產(chǎn)，如新孢子蟲、弓形蟲引起的流產(chǎn)；布魯菌病、小反芻獸疫、衣原體病、Q熱病毒病等可引起的流產(chǎn)[1-5]。新孢子蟲病、弓形蟲病、布魯菌病等多種原因都是導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)的主要根源。新孢子蟲病 (Neosporosis)[6]是由犬新孢子蟲 (Neosporacaninum)寄生于犬、牛、羊等多宿主細(xì)胞內(nèi)所引起的一種原蟲病，造成母畜流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或弱胎等對(duì)養(yǎng)牛業(yè)的危害極為嚴(yán)重，全世界至少有 40% 左右的母牛流產(chǎn)是因?yàn)楦腥玖诵骆咦酉x病，所以被認(rèn)為是目前導(dǎo)致世界性牛流產(chǎn)的主要原因之一。弓形蟲病是一種由龔地弓形蟲(Toxoplasmagondii) 引起人和動(dòng)物感染的人獸共患病，目前研究表明，孕婦感染弓形蟲后可導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形。布魯菌病 (Brucellosis) 是由布魯菌引起的一種人獸共患病，研究證明，布魯菌導(dǎo)致母牛流產(chǎn)。對(duì)布魯桿菌病和弓形蟲病等研究較深入，對(duì)新孢子蟲病的研究在國(guó)內(nèi)較少，尤其在新疆哈巴河縣尚未調(diào)查。近年來(lái)，阿勒泰哈巴河縣放牧母牛發(fā)生流產(chǎn)率逐漸增高，這對(duì)當(dāng)?shù)啬撩癜l(fā)展養(yǎng)牛業(yè)造成了較大影響；故本試驗(yàn)對(duì)哈巴河縣有流產(chǎn)史的放牧牛進(jìn)行新孢子蟲病、弓形蟲、布魯桿菌病的血清學(xué)檢測(cè)，進(jìn)行傳染性流產(chǎn)病因分析。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品采集 牛血清樣品采自新疆阿勒泰哈巴河縣其流產(chǎn)史的放牧牛，其中加依勒瑪鄉(xiāng)31份，庫(kù)勒拜鄉(xiāng)23份，共計(jì)54份。牛進(jìn)行尾靜脈采血，斜置于4 ℃ 冰箱5 h后，放于室溫待血清析出后收集血清，-80 ℃冷凍保存待檢。

1.1.2 試驗(yàn)試劑 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗牛IgG，購(gòu)自北京中杉金橋生物科技有限公司；新孢子蟲rELISA試劑盒、弓形蟲rELISA試劑盒，由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院寄生蟲實(shí)驗(yàn)室提供；布病虎紅平板凝集抗原、布病虎紅平板凝集試驗(yàn)臨床標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清、試管凝集抗原，由烏魯木齊畜牧局提供；PBS(磷酸鹽緩沖液，pH值9.6)、吐溫(Tween)-20、PBS，由實(shí)驗(yàn)室自制；顯色液，購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)板(96孔平底微量板)、移液槍、槍頭，購(gòu)自生工生物工程(上海)股份有限公司；KHBST-36型全自動(dòng)酶標(biāo)儀、溫箱，購(gòu)自中儀國(guó)科(北京)科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 新孢子蟲病rELISA 檢測(cè)抗體試劑盒 以新孢子蟲特異性重組蛋白(GST-Nc SRS2)作為 rELISA 檢測(cè)試劑盒的包被抗原，嚴(yán)格參考楊帆等[7]建立的 rELISA 方法進(jìn)行。

1.2.2 弓形蟲病 rELISA檢測(cè)抗體試劑盒 以弓形蟲特異性重組蛋白(GST-Tg SAG2)作為 rELISA 檢測(cè)試劑盒的包被抗原，嚴(yán)格參考王常漢[8]、許正茂等[9]建立的 rELISA 方法進(jìn)行。

1.2.3 虎紅平板凝集試驗(yàn) 虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)參考國(guó)標(biāo) GB/T18646-2002 進(jìn)行。

1.2.4 試管凝集試驗(yàn) 試管凝集試驗(yàn) (SAT) 參考國(guó)標(biāo) GB/T18646-2002 進(jìn)行。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 流產(chǎn)母牛寄生蟲性和細(xì)菌性病原檢測(cè)結(jié)果 對(duì)54頭流產(chǎn)放牧牛血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，加依勒瑪鄉(xiāng)新孢子蟲病和牛布魯桿菌病的感染率較高，分別為38.70%、54.80%；而弓形蟲的感染率較低，兩個(gè)鄉(xiāng)的感染情況沒有明顯差異，見表 1。

2.2 哈巴河縣試驗(yàn)點(diǎn)流產(chǎn)母?；旌细腥緳z測(cè)結(jié)果 表2為新孢子蟲病、弓形蟲病和布魯菌這3種病原混合感染情況，其中，新孢子蟲病與弓形蟲病的混合感染率最低，新孢子蟲病與布魯菌病混合感染率最高，為 14.80%

2.3 哈巴河縣試驗(yàn)點(diǎn)流產(chǎn)母牛不同年齡妊娠期牛疾病感染情況 如表3所示，結(jié)合采樣記錄(3-8歲齡的流產(chǎn)母牛樣品)和訪問(wèn)調(diào)查分析，各年齡段的牛均可感染新孢子蟲病、弓形蟲病和布魯菌病，3-4 歲之間，新孢子蟲病、弓形蟲病和布魯桿菌病這3種疾病呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，布魯菌病達(dá)到最高值；5-6歲之間，弓形蟲病的感染率繼續(xù)上升，而新孢子蟲病和牛布魯菌病感染率處于下降趨勢(shì)；7-8歲之間，3種病處于同時(shí)下降的趨勢(shì)。

表2 哈巴河縣2個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)流產(chǎn)?；旌细腥緳z測(cè)結(jié)果

表3 哈巴河縣兩個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)流產(chǎn)牛不同年齡段檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

本試驗(yàn)調(diào)查分析了哈巴河縣部分鄉(xiāng)新孢子蟲病、弓形蟲病、布魯菌病導(dǎo)致的母牛流產(chǎn)情況，即使傳染性3種病原感染原因似乎是最普遍的，由于不同的病原體可能涉及同一病例，并且診斷方法并不總是被優(yōu)化，因此所涉及的病原體的鑒定是困難的。因此，我們運(yùn)用較成熟的便捷、快速診斷法對(duì)采集的母牛流產(chǎn)血清檢測(cè)，包括ELISA診斷法、虎紅平板凝集試驗(yàn)及試管凝集試驗(yàn)。母牛飼養(yǎng)環(huán)境因素對(duì)疾病感染牛群有著重要的影響，通過(guò)向當(dāng)?shù)啬撩窳私獾焦秃涌h牛只飼養(yǎng)方式以散養(yǎng)為主，高產(chǎn)母牛的引進(jìn)、調(diào)運(yùn)等導(dǎo)致了上述3種病原的感染造成母牛流產(chǎn)；再加上哈巴河縣哈薩克族居多，土狗、牧羊犬處處可見，這也大大上升了以犬為終末宿主的新孢子蟲等的感染，犬隨糞便排出卵囊污染草場(chǎng)，使牛羊等感染。弓形蟲也是如此，貓、人、畜、禽、鼠及其他動(dòng)物都是本病的傳染源，由于能排出卵囊，而且卵囊又能在外界環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間貯存，故是最危險(xiǎn)的傳染源。布魯桿菌病感染可能一方面是接種疫苗后，長(zhǎng)期進(jìn)行牛、羊貿(mào)易時(shí)有患病牛、羊作為傳染源傳給疫苗失效的牛群，或者是沒有一對(duì)一接種疫苗或消毒處理不嚴(yán)，導(dǎo)致再次出現(xiàn)了回升和擴(kuò)大蔓延的趨勢(shì)等等。

南北疆均有新孢子蟲病、布魯菌病、弓形蟲病等病因?qū)е铝鳟a(chǎn)的報(bào)道，楊帆[7]等人之前也有報(bào)道新疆部分地區(qū)的流產(chǎn)原因分析；巴音查汗等[10]報(bào)道北疆部分地區(qū)新孢子蟲病的血清學(xué)調(diào)查，本次檢測(cè)結(jié)果與上述報(bào)道的新孢子蟲病的檢測(cè)結(jié)果基本一致；并且同時(shí)對(duì)新孢子蟲病、弓形蟲病與布魯桿菌病這3種疾病進(jìn)行流產(chǎn)病因分析。

在冬季，哈巴河縣寒冷的氣候可能會(huì)影響放牧牛的正常采食、飲水等，這也可能導(dǎo)致妊娠牛流產(chǎn)。預(yù)防是對(duì)妊娠牛流產(chǎn)和減少病原體最有效的方法之一，環(huán)境衛(wèi)生及疾病防控對(duì)此有重要意義。建議做好發(fā)生流產(chǎn)區(qū)域的消毒工作，在產(chǎn)犢高峰期應(yīng)當(dāng)進(jìn)行多次消毒。避免在產(chǎn)犢時(shí)期開展疫苗免疫，嚴(yán)格按照國(guó)家法律規(guī)定對(duì)人獸共患病進(jìn)行處理；避免狗、貓等動(dòng)物與牛群的直接接觸，減少感染幾率。另外，可督促畜主及時(shí)上報(bào)空胎、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱胎的牲畜，以防發(fā)生新病源在畜群間蔓延；要提高廣大養(yǎng)殖農(nóng)戶對(duì)該病的防范意識(shí)和自我保護(hù)意識(shí)。